乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平與腸道屏障功能損害的關系分析

周文浩，蔣曉忠，王昌松，黃斌

乙型肝炎是乙型肝炎病毒感染導致的肝臟炎性病變。隨著乙型肝炎病情的發展，部分患者肝臟逐漸發生纖維化致使肝臟變形，病情發展為肝硬化，出現腹水、感染、肝性腦病、消化道出血和肝癌等并發癥[1]。胰島素樣生長因子Ⅰ（insulin-like growth factorsⅠ，IGF-Ⅰ）是一種單鏈多態，主要由肝細胞分泌合成，肝臟功能病變可直接影響血清IGF-Ⅰ水平變化。近年來，研究主要集中于IGF-Ⅰ在子宮肌瘤、宮頸癌、胃癌、結直腸癌等病變中的表達及臨床意義[2-4]，也有部分動物實驗證實IGF-Ⅰ對多種細胞因子具有調節作用[5，6]，關于IGF-Ⅰ對腸道屏障功能的臨床研究較少，因此本研究檢測了107例乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-1水平，分析其與腸道屏障功能損害的關系，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 病例來源 2015年1月～2017年1月我院收住的乙型肝炎肝硬化患者107例，男73例，女34例；年齡25～69歲，平均年齡（47.1±8.4）歲。符合《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標準[7]，其中Child-Pugh A級35例，B級42例，C級30例。排除標準:（1）合并有嚴重心、肺、腎等器官疾病；（2）合并有惡性腫瘤；（3）合并自身免疫性疾病。另選同期在我院體檢的健康志愿者40例，男26例，女14例；年齡23～70歲，平均年齡（46.5±8.2）歲。受試者對本研究知情并簽署知情同意書。本研究經我院醫學倫理委員會審核通過。

1.2 血清檢測 所有受檢者清晨抽取空腹脈血9 ml，3000 r/m離心10 min，將分離血清置入-20℃冰箱保存。采用酶聯免疫吸附法檢測血清IGF-Ⅰ水平（上海森雄科技實業有限公司），操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行；采用化學比色法檢測血清二胺氧化酶（damine oxidase，DAO）；采用改良酶學分光光度法檢測血清D-乳酸；采用顯色基質鱟實驗法檢測血清內毒素。

1.3 腸道屏障功能檢測 清晨，囑患者沖服乳果糖口服溶液（荷蘭Abbott Healthcare Products B.V.，批準文號：H20120387）15 ml，收集6 h尿液，記錄總量。取尿液20 ml，置入-20℃冰箱保存。采用高壓液相色譜分析法檢測尿液乳果糖/甘露醇（lactulose/mannitol，L/M）排出比。

1.4 統計學方法 應用SPSS 19.0統計學軟件對研究數據進行處理和分析，計數資料以率（%）表示，采用 x2檢驗，計量資料以（±s）表示，組間 IGF-Ⅰ、DAO、D-乳酸、內毒素、L/M比值的比較采用t檢驗，采用Pearson相關分析，以P＜0.05為有顯著性統計學差異。

2 結果

2.1 不同Child-Pugh分級肝硬化患者與健康人血清IGF-Ⅰ水平比較 肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平顯著低于健康人（P＜0.05）；Child-Pugh A級患者血清IGF-Ⅰ水平顯著高于B級或C級（t=4.09，t=7.49，P＜0.05），Child-Pugh B級血清IGF-Ⅰ水平顯著高于 C 級（t=4.33，P＜0.05，表 1）。

2.2 不同Child-Pugh分級肝硬化患者與健康人腸道屏障功能比較 肝硬化患者血清DAO、D-乳酸、內毒素、L/M比值水平顯著高于健康人（P＜0.05）；Child-Pugh A級患者血清DAO、D-乳酸、內毒素、L/M比值水平顯著低于B級或C級（t=6.97，t=5.43，t=8.74，t=7.25 或 t=11.80，t=8.81，t=13.02，t=11.49，P＜0.05））；Child-Pugh B 級患者血清 DAO、D- 乳酸、內毒素、L/M比值水平顯著低于Child-Pugh C級（t=5.32，t=4.34，t=8.38，t=5.15，P＜0.05，表 2）。

表1 肝硬化患者與健康人血清IGF-Ⅰ水平（±s）比較

表1 肝硬化患者與健康人血清IGF-Ⅰ水平（±s）比較

與健康人比，①P＜0.05；與B級比，②P＜0.05；與A級比，③P＜0.05

例數 IGF-Ⅰ（ng/ml）肝硬化 Child-Pugh A級 35 180.3±33.4①②B 級 42 152.4±26.5①③C 級 30 126.9±21.8①②健康人 40 217.1±40.2

表2 肝硬化患者與健康人腸道屏障功能指標（±s）比較

表2 肝硬化患者與健康人腸道屏障功能指標（±s）比較

與健康人比，①P＜0.05；與B級比，②P＜0.05；與A級比，③P＜0.05

例數 DAO（U/ml） D-乳酸（μg/ml） 內毒素（EU/ml） L/M比值（%）Child A級 35 3.3±0.7①② 9.0±1.6①② 0.6±0.1①② 9.2±1.7①②B級 42 4.6±0.9①③ 11.2±1.9①③ 0.8±0.1①③ 12.6±2.3①③C級 30 5.8±1.0①② 13.4±2.4①② 1.1±0.2①② 15.7±2.8①②健康人 40 2.5±0.5 7.1±1.3 0.4±0.1 6.3±1.1

2.3 乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平與腸道屏障功能指標相關性分析 乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平與血清DAO、D-乳酸、內毒素和L/M比 值 均 呈 負 相 關（r=-0.845、r=-0.808、r=-0.867、r=-0.839，P＜0.01）。

3 討論

肝硬化是一種慢性進行性肝病，病因包括病毒性肝炎肝硬化、酒精性肝硬化、血吸蟲病性肝硬化和膽汁性肝硬化等，在我國慢性乙型病毒性肝炎是門靜脈性肝硬化的主要病因[8-10]。IGF-Ⅰ是一種活性蛋白多肽物質，由70個氨基酸組成，分子量約為7500D，其編碼基因位于12號染色體短臂。IGF-Ⅰ廣泛存在于機體各組織系統中，主要由肝臟合成，其分子結構與胰島素相似，具有豐富的生物學功能，可以促進細胞增殖、分化，抑制細胞凋亡，在機體生長發育方面具有重要的作用[11，12]。近年來研究發現，IGF-Ⅰ與肝臟疾病存在一定的關系。有人[13]發現IGF-Ⅰ可以抑制糖尿病大鼠肝星狀細胞活化，延緩肝纖維化進程。研究[14]指出，肝硬化發生時機體肝臟功能受損，肝臟合成IGF-Ⅰ能力下降，導致血液循環中IGF-Ⅰ含量減少。IGF-Ⅰ能反映肝臟的合成能力，血清IGF-Ⅰ水平顯著降低提示肝硬化患者出現蛋白質分解代謝障礙，可能出現營養不良等癥狀[15]。本研究發現，不同Child-Pugh分級肝硬化患者與健康人血清IGF-Ⅰ水平比較差異有統計學意義，血清IGF-Ⅰ水平隨肝硬化程度加重而下降，可能由于IGF-Ⅰ主要由肝實質細胞合成和分泌，而乙型肝炎肝硬化患者肝細胞受到長期慢性損害，隨肝纖維化進程加重肝細胞數量減少，其合成IGF-Ⅰ的能力顯著降低，導致血清IGF-Ⅰ水平越來越低。

腸道屏障功能指腸道上皮分隔腸腔內物質，防止細菌、毒素等有害物質穿過腸黏膜侵入人體內其他器官、組織的功能總稱[16]。腸道屏障由機械屏障、免疫屏障、生物屏障、化學屏障等4部分組成，任一部分受損均可造成腸道屏障功能破壞[17]。隨著對肝臟與腸道關系的研究不斷深入，部分學者指出肝硬化患者可能存在腸道屏障功能被破壞。研究[18]發現非酒精性脂肪肝大鼠腸道黏膜屏障功能受損，小腸細菌過度生長，腸道微生態紊亂。由于肝硬化患者存在門靜脈高壓，腸黏膜血流速度減緩，腸黏膜易發生缺血性損傷[19]。肝硬化患者腸黏膜細胞受損，腸道黏膜通透性增加，腸黏膜結構功能受損，具有較高的內毒素血癥發生風險[20]。肝硬化患者腸黏膜屏障功能減退，存在不同程度的腸道菌群失調，機體易發生細菌感染和內毒素血癥等，加劇肝硬化病情進展[21]。

DAO是一種具有高度活性的細胞內酶，主要分布于哺乳動物小腸黏膜上層絨毛中，在外周血中活性穩定。當腸黏膜屏障被破壞時，DA0大量進入血液循環，導致血清DA0水平顯著上升。D-乳酸是細菌代謝產物，哺乳動物體內缺乏快速降解D-乳酸的酶系統。在機體正常情況下，-乳酸很少被吸收。當腸道屏障受損時，細菌大量滋生，D-乳酸在腸道內積累。內毒素是存在于革蘭氏陰性細菌菌體的一類毒性物質的總稱。在機體正常情況下，內毒素局限于腸道內。當腸黏膜受損時，內毒素穿過腸黏膜進入血液循環，導致內毒血癥[22]。乳果糖和甘露醇在人體中含量極少，口服后從尿液中排出，通過兩者比值可以反映腸黏膜的屏障功能。本研究顯示，不同Child-Pugh分級肝硬化患者與健康人血清DAO、D-乳酸、內毒素和尿L/M比值比較差異有統計學意義，乙型肝炎肝硬化患者普遍存在腸道屏障功能受損，可能與免疫機能被破壞、門靜脈高壓、腸蠕動減緩、腸黏膜受損等因素相關，而腸道屏障功能受損，腸道通透性增加，可能導致細菌和內毒素移位增加，引起腸道局部和全身炎癥反應，加重肝功能損傷，以此形成惡性循環。本研究發現，乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平與DAO、D-乳酸、內毒素水平和尿L/M比值均呈負相關，提示IGF-Ⅰ在維持腸道屏障方面具有一定的作用。一方面可能由于肝硬化發生后，腸道屏障功能受損，內毒素進入血液，抑制垂體釋放IGF-Ⅰ[23-25]；另一方面，IGF-Ⅰ可以通過調節腸上皮環氧雙酶表達，抑制腸道炎癥反應，降低腸黏膜通透性，保護腸黏膜上皮細胞，減輕腸道屏障功能的損傷[26-30]。

綜上所述，乙型肝炎肝硬化患者血清IGF-Ⅰ水平與血清DAO、D-乳酸、內毒素水平和尿L/M比值呈負相關關系。IGF-Ⅰ對乙型肝炎肝硬化患者腸道屏障功能可能具有一定的保護作用，通過檢測其血清水平可以大致反映患者腸道屏障功能，值得進一步研究。