麝香保心丸對(duì)代謝綜合征模型大鼠內(nèi)皮功能的影響

梁毓源，張旭升，黃戰(zhàn)軍，樊小容，蔡博治

隨著生活水平的提高和生活方式的改變，代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）的發(fā)病率越來(lái)越高，MS包括高血壓、高脂血癥和血糖代謝異常等心血管疾病，許多流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，MS可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙和動(dòng)脈粥樣硬化等血管損傷性疾病的發(fā)生發(fā)展［1］。麝香保心丸具有保護(hù)內(nèi)皮功能、抗炎及抑制血管鈣化等作用，在動(dòng)脈粥樣硬化及血管鈣化等血管重塑性疾病的治療中發(fā)揮了很大的作用［2，3］，能否改善 MS 導(dǎo)致的內(nèi)皮功能障礙尚不清楚，為此，該實(shí)驗(yàn)在MS大鼠模型上，用麝香保心丸干預(yù)，觀察內(nèi)皮功能指標(biāo)的變化。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、藥品及儀器雄性SD大鼠購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司 ［動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK （京）2012-001）］，8 周齡。 高果糖飼料（60%）由北京華阜康生物科技有限公司加工［飼料合格證號(hào)：SCXK （京）2014-0008］；NO 試劑盒購(gòu)自北京華英生物研究所；eNOS一抗、二抗及DAB顯色試劑盒購(gòu)自武漢博士德；麝香保心丸購(gòu)自上海和黃藥業(yè)有限公司 （生產(chǎn)批號(hào)：12050401）；Beckman Coulter AU5800生化儀購(gòu)自美國(guó)；血糖試紙及快速血糖儀購(gòu)自美國(guó)雅培；鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。其余為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2模型制備取雄性SD大鼠8只作為正常對(duì)

照組，普通飼料喂養(yǎng)；取20只雄性SD大鼠作為MS組，高果糖飼料喂養(yǎng)8 W，檢測(cè)尾動(dòng)脈壓、血糖和血脂水平，以確定MS模型建立成功，去除4只造模欠佳的大鼠。將造模成功的MS大鼠隨機(jī)分成MS組（8只）和MS+麝香保心丸組（8只），均繼續(xù)高果糖喂養(yǎng)，MS+麝香保心丸組每天予麝香保心丸25 mg/kg灌胃1次。4 W后稱重，3%水合氯醛麻醉，心臟取血，一部分血液置入含有EDTA的試管中，4℃離心分離血漿；另一部分血液置入含有促凝劑的5 ml塑料試管中，充分混勻，4℃離心分離血清，-80℃保存。摘取胸主動(dòng)脈，用冰生理鹽水沖洗后，石蠟包埋用于染色。

1.3血糖、三酰甘油和血壓的測(cè)定禁食8 h后尾動(dòng)脈取血，采用快速血糖儀檢測(cè)血糖，并分離血清，采用Beckman Coulter AU5800生化儀檢測(cè)血清三酰甘油水平；采用鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)量血壓。

1.4血漿NO含量的測(cè)定采用硝酸還原酶法測(cè)定血漿NO含量，具體步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.5免疫組織化學(xué)法檢測(cè)主動(dòng)脈組織eNOS的表達(dá)采用4%多聚甲醛固定胸主動(dòng)脈，石蠟包埋，制作4μm切片，常規(guī)脫蠟入水，抗原修復(fù)，封閉非特異性抗原，滴加一抗過(guò)夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸乙醇溶液分化、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片，具體步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析法，兩兩比較采用q檢驗(yàn)。P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1MS模型建立情況經(jīng)高果糖飼料喂養(yǎng)8 W后，大鼠血壓和血清血糖、三酰甘油水平明顯高于正常對(duì)照組，提示MS模型建立成功。見(jiàn)表1。

表 1　MS模型建立情況

2.2大鼠血漿NO含量的變化正常對(duì)照組血漿NO 含量為 （67.38±5.45） μmol/L，MS 組為 （43.25±4.97）μmol/L，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.01）；MS+麝香保心丸組血漿NO含量為 （62.87±5.55）μmol/L，且與MS組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。MS組血漿NO含量有所下降，采用麝香保心丸干預(yù)后，血漿NO含量有所上升。

2.3大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)皮eNOS表達(dá)的變化與正常組相比，MS組主動(dòng)脈內(nèi)皮eNOS表達(dá)明顯減少，用麝香保心丸干預(yù)后，主動(dòng)脈組織內(nèi)皮eNOS表達(dá)有所上調(diào)。見(jiàn)圖1。

3　討論

隨著生活條件改善和生活方式的改變，MS的患病率近年來(lái)急劇增加，包括胰島素抵抗、高血壓及高脂血癥等心血管危險(xiǎn)因素，其中肥胖是MS的一個(gè)重要特征，而胰島素抵抗是代謝綜合征的核心。這些危險(xiǎn)因素均可導(dǎo)致血管功能和解剖結(jié)構(gòu)的損傷，流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)MS人群中血漿NO濃度明顯下降［4］，NO是在NO合成酶作用下，催化左旋精氨酸轉(zhuǎn)變成L-瓜氨酸而生成，血漿NO主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌，是反映血管內(nèi)皮功能的主要指標(biāo)之一。血漿NO濃度明顯下降，提示血管內(nèi)皮功能損傷，這與該實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。血管內(nèi)皮功能損傷可導(dǎo)致血管功能及解剖結(jié)構(gòu)異常，加劇動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，因此，探索如何防治MS誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能異常，具有重要的臨床意義。

圖 1　大鼠胸主動(dòng)脈eNOS免疫組化染色（×40倍）

該實(shí)驗(yàn)采用高果糖飼料喂養(yǎng)后，血清血糖、三酰甘油水平及尾動(dòng)脈壓明顯高于對(duì)照組，提示大鼠MS模型建立成功。同時(shí)發(fā)現(xiàn)MS大鼠血漿NO水平明顯低于正常組，血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS的表達(dá)亦同步下調(diào)。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示MS大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷，導(dǎo)致分泌NO明顯減少。

麝香保心丸具有芳香溫通、益氣強(qiáng)心之功效，源于宋代經(jīng)典名方《太平惠民和劑局方》中的蘇合香丸。長(zhǎng)期以來(lái)，麝香保心丸在臨床上作為一種常用治療冠心病的有效藥物，對(duì)緩解心絞痛、改善心肌缺血等有顯著的作用，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，麝香保心丸具有保護(hù)血管內(nèi)皮、穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)斑塊、抑制炎癥反應(yīng)及促進(jìn)血管新生［5-7］等作用。在MS導(dǎo)致的內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷中是否亦有保護(hù)作用尚不清楚。該實(shí)驗(yàn)用麝香保心丸干預(yù)后，MS大鼠血漿NO水平明顯上升，血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)eNOS同步上調(diào)，這提示麝香保心丸具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用。

該實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麝香保心丸可改善MS大鼠誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮功能損傷，這將為血管損傷的機(jī)制研究及防治提供新的思路和作用靶點(diǎn)，具體的分子作用機(jī)制和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。由于植物提取物成分和有效成分作用靶點(diǎn)的復(fù)雜性，中藥成分對(duì)保護(hù)血管內(nèi)皮功能的藥理學(xué)作用尚需進(jìn)一步研究。