淋巴細胞亞群檢測在小兒過敏性紫癜診治中的應用

蔡莉莉，郝維敏，夏宏林

(宿州市立醫院檢驗科，安徽 宿州 234000)

過敏性紫癜(henoch-schonlein purpura，HSP)又叫亨舒綜合征，是兒科常見的小血管出血性炎癥，病因復雜，多與感染、過敏等因素有關，病變引起全身免疫功能紊亂，表現為免疫球蛋白IgA介導的免疫復合物沉積在小血管管壁，引起小血管脆性增加，導致出血[1-3]。如何在疾病早期正確的判斷患兒病情輕重，成為擺在廣大兒科醫師面前的一個難題。本次研究對HSP患兒進行淋巴細胞亞群檢測，與同期未感染患兒的正常對照組進行比較分析，同時根據是否合并溶血性鏈球菌感染(以下簡稱鏈球菌)將HSP患兒分為鏈球菌感染組和鏈球菌未感染組進行比較分析，探討淋巴細胞亞群檢測在HSP診治中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料選取宿州市立醫院2014年3月至2017年3月因HSP首次就診的患兒73例，為HSP組，其中男45例，女28例，男女之比為1.61 ∶1；年齡(4.8±1.9)歲，年齡范圍為2.5～13.3歲，病程均在15 d以內；選取同期門診同年齡階段體檢兒童30例進入健康對照組。本次研究內容均按照醫院醫學倫理委員會所制定的標準并取得倫理委員會批準，所有患兒家長、健康對照組兒童家長均已知曉研究內容并簽署知情同意書。

1.2納入和排除標準所有患兒入院前1月內均無過敏性或(和)免疫性疾病，未使用激素類及免疫抑制劑類藥物，符合2005年歐洲風濕病聯盟(ELAR)和歐洲兒童腎病防治委員會(ESPN)及美國風濕協會(ACR)共同制定的HSP診斷標準[4]；兩組患兒入院后均給予常規的治療方案，包括抗過敏、抗血小板聚集及根據藥敏結果選取敏感抗生素使用，在治療過程中排除因病情變化需使用激素治療的患兒7例。

1.3HSP患兒分組根據HSP患兒是否合并鏈球菌感染，分為鏈球菌感染組(31例)和鏈球菌未感染組(35例)，其中鏈球菌感染組男19例，女12例，年齡(6.7±2.0)歲，發病天數(7.0±2.3) d；鏈球菌未感染組男21例，女14例，年齡(6.1±1.9)歲，發病天數(7.4±3.1) d，兩組患者性別構成比、基本資料等方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.4研究方法

1.4.1儀器與試劑 多色流式細胞儀(FAcs calibur，美國BD公司)，所用試劑鼠抗人BD MultitestTM IMK kit 四色熒光抗體試劑盒 (Cat No：340503)，抗體組合為CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC及CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC(CD3-FITC、CD4-APC、CD45-PerCP及CD8-PE單克隆抗體)及其他配套耗材均購自美國BD公司。

1.4.2標本采集與處理 所有患兒采血過程中嚴格無菌操作，留取使用EDTA-K2抗凝的外周血2 mL，在室溫(15～25 ℃)保存，于4 h內完成標本檢測。

1.4.3流式細胞儀檢測 T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD16+CD56+和CD19+細胞檢測應用抗凝血在多色流式細胞儀上進行檢測。采用Multi TEST自動軟件獲取和分析淋巴細胞亞群，得到各群細胞相對百分含量。

2 結果

2.1HSP組患兒和正常對照組兒童淋巴細胞亞群檢測結果比較結果見表1。HSP組患兒與正常對照組比較，CD4+、CD4+/CD8+及CD16+CD56+細胞比值明顯下降，CD8+、CD19+比值上升，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組CD3+數值比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2鏈球菌感染組及鏈球菌未感染組治療前后淋巴細胞亞群檢測結果分析結果見表2。鏈球菌感染組治療前后比較，淋巴細胞亞群檢測數值均未見明顯好轉，差異無統計學意義(P>0.05)；鏈球菌未感染組治療前后比較，淋巴細胞亞群檢測數值明顯好轉，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組治療前比較，CD3+、CD8+、CD4+/CD8+差異無統計學意義(P>0.05)，CD4+、CD16+CD56+、CD19+差異有統計學意義(P<0.05)；兩組治療后比較，CD3+差異無統計學意義(P>0.05)，其余數值差異有統計學意義(P<0.05)。

2.3鏈球菌感染組及鏈球菌未感染組治療前后臨床癥狀比較結果見表3，鏈球菌感染組治療前后比較，臨床癥狀僅皮膚紫癜好轉，差異有統計學意義(P<0.05)，其余癥狀均無明顯好轉，差異無統計學意義(P>0.05)；鏈球菌未感染組治療前后比較，所有臨床癥狀均明顯好轉，差異有統計學意義(P<0.05)；兩組治療前比較，臨床癥狀表現差異無統計學意義(P>0.05)；兩組治療后比較，所有臨床癥狀均明顯好轉，差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討論

HSP發病與感染及過敏因素關系較密切，常見的感染病原體有鏈球菌、肺炎支原體及EB病毒等，在臨床上，各種原因引起的HSP表現出的臨床癥狀相似，但其實驗室檢測尤其是淋巴細胞亞群檢測的數值則有所不同，本研究選取的鏈球菌感染引起的HSP患兒作為研究對象，但其他感染如肺炎支原體引起的HSP患兒也不在少數，因篇幅限制，在本文中就不予贅述。鏈球菌在自然界中分布較廣，常可引起細菌性心內膜炎、猩紅熱和風濕熱、腎小球腎炎等變態反應，其致病性與鏈球菌感染的特殊致病機制有關[5]，鏈球菌能夠在體內釋放鏈球菌溶血素O，除本身能夠引起血液內的紅細胞溶解外，還可以刺激機體產生免疫反應，形成抗原抗體復合物，分泌的殺白細胞素能夠使正常的白細胞變形破裂，而白細胞的廣泛碎裂也進一步加重了腎臟損害，本次研究根據患兒血清抗鏈球菌溶血素O抗體(ASO)測定、血培養及咽拭子培養結果以及結合臨床癥狀和體征，來判定是否存在鏈球菌感染。近年來大量研究發現HSP患兒機體存在不同程度的免疫紊亂[6-7]，其紊亂程度與患兒感染的病原體和機體自身的免疫系統有關。本次研究中，HSP組患兒在急性期CD3+、CD4+和CD8+細胞比例的變化，同國內的研究基本一致[8]，變化的原因應是多種致病因素共同導致的機體T細胞免疫功能失調，而免疫功能的紊亂也在疾病本身的進程中起著重要的作用。CD4+/CD8+的比值持續倒置可以使病情的進程進入腎臟持續損傷的階段，而在此階段的時間越長，腎臟的不可逆損害就越顯著。CD4+細胞在急性期的減少主要是Th1細胞的明顯減少，而Th2細胞卻異常活化，Th2細胞能夠誘導B細胞多克隆活化增殖，B細胞特有的表面抗原是CD19+，由骨髓中的淋巴干細胞分化而來，受到抗原刺激后，分化增殖為漿細胞；增多的漿細胞參與了機體合成和分泌免疫球蛋白尤其是IgA的產生，IgA與補體C3形成免疫復合物，沉積在消化道黏膜和皮膚腎臟小血管壁的表面，引起腹痛、紫癜和血尿、蛋白尿等一系列癥狀[9]。NK細胞又叫自然殺傷細胞，在體內免疫監視過程中發揮著重要的作用，可以激活體內的巨噬細胞釋放白細胞介素-1(IL-1)，使Th細胞活化增加，增強體內T細胞的免疫效應，同時可以直接抑制B細胞的活化或抑制輔佐細胞的抗原提呈作用，調節抗體蛋白的產生，NK細胞的數量與IL-2呈正相關，在前文中提到HSP患兒的CD4+細胞減少主要是由于Th1細胞的減少，而IL-2主要由Th1細胞分泌，這也解釋了本次研究中HSP組患兒的CD16+CD56+入院時檢測的比值降低的原因。

表1 HSP組和正常對照組淋巴細胞亞群檢測結果比較

表2 鏈球菌感染組及未感染組治療前后淋巴細胞亞群檢測結果比較

表3 鏈球菌感染組及鏈球菌未感染組治療前后臨床癥狀的比較/例(%)

兩組患兒入院時臨床及實驗室數據說明不同原因導致的HSP患兒臨床癥狀上無明顯區別，但淋巴細胞亞群檢測提示患兒輔助性T淋巴細胞及B細胞活性增強，表現在機體內IgA的增多，國內外研究關于HSP急性期IgA數據的不一致[10-11]，應與選取病例時沒有充分考慮患兒的致病因素有關。目前國內大部分醫院治療HSP還停留在根據臨床癥狀選取藥物治療的階段，這種缺乏免疫學數據支持的治療雖然能夠緩解皮膚紫癜的癥狀，但其他癥狀尤其是腎臟損害的癥狀并沒有緩解，腎臟損害的癥狀不僅容易引起HSP的復發，而且復發后的腎臟損害會較首次發作明顯加重[12]，腎臟損害的嚴重程度直接決定了HSP患兒的預后[13]。臨床研究證明，年齡越小的HSP患兒，如果在早期能夠接受針對性的治療，其腎臟損害的危險性就會降低[14]，并能夠減少紫癜性腎炎的發病概率[15]，雖然早期臨床癥狀區分很困難，但是淋巴細胞亞群檢測卻能夠表現出明顯的不同，如果這個時候治療可以針對性的加入抑制免疫反應的藥物，必然可以獲得更好的治療效果。表2和表3列出兩組患兒的數據說明經過兩個星期的常規治療后，鏈球菌未感染組患兒免疫紊亂已經有一定程度的緩解，其臨床癥狀也較入院時明顯好轉，說明臨床常規治療對于單純型的HSP效果尚可，但是對于合并免疫紊亂的HSP患兒治療效果不盡如人意，實際上在臨床工作中并非只有鏈球菌感染的HSP患兒才有免疫紊亂，其他病因導致的HSP也存在不同程度的免疫紊亂，如果能夠正確的區分患兒，進行針對性治療，臨床效果會更好，如果在早期不能確定病因的情況下可以根據淋巴細胞亞群檢測的結果進行治療，不僅可以早期緩解患兒的臨床癥狀，而且對于治療HSP和防止復發起到很好的效果。

綜上所述，HSP患兒急性期存在的細胞免疫紊亂，溶血性鏈球菌感染引起HSP患兒應采用針對性方案進行治療，淋巴細胞亞群檢測對小兒HSP診治具有重要的作用與意義。