抗腫瘤藥卡培他濱有關物質分析方法驗證

胡麗娟

摘 要：分析卡培他濱中有關物質，并驗證測定有關物質的分析方法。 方法：使用高效液相色譜法測定有關物質并進行方法驗證。結論：確定了卡培他濱制備過程中的主要雜質；建立的分析方法簡單靈敏，準確可靠，專屬性好，結果穩定，適用于卡培他濱的有關物質控制，也可為其它氟化嘧啶類藥物的有關物質研究提供參考。

關鍵詞：卡培他濱 有關物質 分析方法驗證

卡培他濱（Capecitabine） 是一種可以在體內轉變成5-FU的抗代謝氟嘧啶脫氧核苷氨基甲酸酯類抗腫瘤原料藥物，通過體內三步酶鏈反應轉換為5-FU而作用于腫瘤細胞，能夠抑制細胞分裂和干擾RNA和蛋白質（protein）合成。具有臨床高效低毒價格低廉的優勢，作為一方便、安全、療效確切的抗癌藥，有可能取代5-FU成為胃癌聯合化療方案的基本用藥。從2001年美國FDA和2002年歐洲藥品管理局（EMEA）批準用于轉移性乳腺癌開始，先后獲得英國國家健康與臨床優化研究所（NICE）和美國國立綜合癌癥網絡（NCCN）權威指南的推薦，在全世界范圍已有多項大樣本研究證明其在胃癌、腸癌以及乳腺癌中具有生存獲益。而在我國，卡培他濱自2001年上市8年來，先后被批準單藥和聯合治療轉移性乳腺癌、腸癌的輔助治療和轉移性腸癌的一線治療，直至去年被批準用于晚期胃癌的一線治療。[1]

本文在國家標準H31022940的基礎上結合卡培他濱美國藥典USP32版的有關物質控制要求建立了HPLC-UV法測定卡培他濱中有關物質，并對該方法進行方法驗證。

一、儀器設備

1.儀器：A gilent1260高效液相色譜儀（紫外檢測器）、電子天平

2.色譜條件：[2]

（1）色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（4.6mm*250mm，5μm）

（2）流動相：以甲醇為流動相A，乙腈為流動相B，0.1%醋酸溶液為流動相C，進行梯度洗脫，檢測波長：250nm，流速：1.0ml/min ，柱溫：40℃進樣量：10μl，稀釋劑：甲醇-乙腈-水

（25：3：72）

二、有關物質

卡培他濱成品中可能含有的已知雜質，雜質A（5′-脫氧-5-氟胞苷）、雜質B（5-脫氧-5-氟脲苷）、雜質C（2′，3′-氧-羰基-5′-脫氧-5′-氟-N-（戊氧基羰基胞嘧啶核苷））、雜質D（2′，3′-二-氧-乙酰基-5′-脫氧-5-氟-N-（戊氧基羰基）-胞嘧啶核苷）、雜質E（2′，3′-二- 氧-乙酰基-5′-脫氧-5-氟胞嘧啶核苷）、雜質F（5-氟胞嘧啶）、雜質J（5-氟-N-[（戊氧基）羰基]-胞嘧啶）、雜質L1（5′-脫氧-5-氟-N-[（2-甲基丁氧基）碳基]-胞嘧啶核苷）、雜質L2（5′-脫氧-5-氟-N-[（3-甲基丁氧基）碳基]-胞嘧啶核苷）、雜質Q（5-脫氧-5-氟-N-[（甲氧基）羰基]- 胞嘧啶核苷）。

三、方法驗證

1.專屬性

（1）各已知雜質及成品的定位分離考察

取稀釋劑作空白溶劑，另分別取雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E、雜質F、雜質L1、雜質 L2、雜質H、雜質M、雜質N、雜質K1+K2、雜質O、雜質Q及卡培他濱適量，加稀釋劑溶解制成約6ug/ml樣品，照本品有關物質檢測方法進樣檢測，記錄色譜圖。

2.線性范圍及各已知雜質校正因子測定

（1）雜質A、B、C、D、E、J 、L2、Q低濃度線性

精密稱取雜質A15.77 mg、雜質B13.76mg、雜質C15.78mg、雜質D13.94mg、雜質E15.85mg、雜質J13.65mg、雜質L2 14.10mg和雜質Q15.36mg分別置于25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液，精密量取各儲備溶液1ml置同一100ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為1%對照溶液。精密量取1%對照溶液3ml、5 ml、10ml、20ml分別置100ml、50ml、25ml、25ml的量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得相對1%對照溶液的3%、10%、40%、80%線性溶液。再精密量取儲備溶液1ml置50ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，即得200%線性溶液，分別取上述線性溶液與1%對照溶液各10μl進樣檢測。[3]

3.精密度考察

（1）重復性考察

取卡培他濱約15mg ，精密稱定，共6份，分別置于25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取1ml置100ml量瓶中，加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。分別取上述對照溶液和供試品溶液各10μl進樣檢測，記錄色譜圖。按加校正因子的主成分自身對照法計算已知雜質的含量，按自身對照法計算其他單個雜質和總雜質含量，并計算相應雜質偏差。

（2）中間精密度考察

取本品適量，按重復性項下的方法，在同一實驗室，由不同操作者，于不同日期，使用不同儀器進行檢測，并與重復性試驗進行比較。[4]

4.各已知雜質的回收率

雜質A、B、C、D 、E、J、L1+L2和Q的回收率：

分別精密量取加雜質的供試品溶液、不加雜質的供試品溶液和對照品溶液10μl進樣檢測，記錄色譜圖，按外標法分別計算雜質A、C、D、 E、J、L1+L2和Q的回收率。

5.溶液穩定性

精密稱取卡培他濱約15mg，置25ml量瓶中，加稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，取該溶液于室溫下放置0、2、4、8小時后進樣檢測，同時將該供試品溶液在冰箱（2～8℃）中放置，于0、3、12、24小時后進樣檢測，記錄色譜圖，按自身對照法分別計算各已知雜質、其他單個雜質以及總雜質大小。[5]

6.耐用性考察

分別使用正常色譜條件（Inertsil ODS-SP C18柱，250*4.6mm，5μm；）、不同色譜柱（Agilent ，ZORBAX ，XDB-C18柱，250*4.6，5μm；Welchrom C18，250*4.6，5μm）；不同柱溫（柱溫為35℃和45℃）；不同流速（流速為0.95ml/min和1.05ml/min）；不同初始流動相比例（甲醇-乙腈-0.1%醋酸=23：3：74、甲醇-乙腈-0.1%醋酸=27：3：70）進行測試，以面積歸一化法分別計算供試品溶液雜質個數和雜質大小，主峰理論板數，主峰與相鄰雜質的分離情況，以及各雜質的相對保留時間。

四、驗證結果

結語

通過卡培他濱中有關物質的專屬性、系統適用性、低濃度線性、各已知雜質的回收率、各已知雜質和未知雜質的檢出限、定量限以及未檢出的已知雜質的檢出限加入試驗、精密度測定、溶液穩定性考察和耐用性考察試驗，驗證試驗表明該色譜條件專屬性強、低濃度線性關系好、檢出靈敏度高，精密度好，溶液室溫4小時穩定，在低溫條件下（2℃～8℃）24小時內穩定，且各已知雜質測定的準確度高，色譜系統在流速（1.0±0.05ml/min）、柱溫（40±5℃）、流動相比例[流動相：0.1%醋酸-甲醇-乙腈=72：（25±2）：5，]的微小變化下，不影響有關物質的測定結果，各已知雜質相對保留時間穩定，系統適用性符合測定要求，上述條件耐用性好。可用卡培他濱原料藥和制劑的有關物質檢查，進行質量控制，也可為其它氟化嘧啶類物質研究提供參考。

參考文獻

[1]美國藥典32版卡培他濱藥品標準.

[2]美國藥典32版卡培他濱片藥品標準.

[3]卡培他濱片說明書.

[4]血管緊張素有關物質研究及分析方法驗證耿敏，丁金國，黃臻輝.

[5]更昔洛韋殘留溶劑分析方法驗證，牛海燕，劉科樂，煤炭與化工，第37卷第10期，2014.