過氧乙酸應用增敏動力學光充法與陽離子表面活性劑協同檢測的效果

鄭穎華

（菏澤市立醫院 重癥醫學科，山東 菏澤 274000）

過氧乙酸又稱過醋酸或乙酸，可在室內家具、居室表面、空氣中廣泛消毒。過氧乙酸的檢測方法常見有動力學比色法、碘量法和其他分光光度法等[1]。碘量法操作十分繁瑣，終點觀察的穩定性較差，5 min內返藍現象多次出現，影響最終結果[2]；探究消毒液檢測過氧乙酸的方法有重要價值，故本研究探究予以陽離子表面活性劑及增敏動力學聯合檢測消毒液中的過氧乙酸，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

0.1 mg分析天平為北京天平儀器公司提供，可見分光光度計（7230G型）為上海美析科技有限公司提供；按照衛生部《消毒技術規范》（2002）對CH3COOOH標準溶液予以碘量法精確評估，二次稀釋濃度為1.50×10-4mol/L；溶解水適宜，110℃下干燥硫酸亞鐵至質量穩定，二價鐵離子標準容積，加入3 mol/L硫酸至清亮，容積瓶為1 L，表面活性劑為十八烷基三甲基溴化銨、十四烷基溴吡啶（體積均為2 g/L，質量濃度均為56 μg/ml）混合；鄰二氮雜菲溶液2 g/L、硫酸溶液、生理鹽水均為1 mol/L。

1.2 方法

取50 ml容積的容量瓶2個，分別加入二價鐵離子標準溶液（2.5 ml 56 μg/ml）、硫酸溶液（3 ml），待測的過氧乙酸溶液適度加入容積瓶中（阻抑體系標識），充分振蕩后將氫氧化鈉溶液6 ml加入，混合表面活性劑及鄰二氮菲溶液（2 ml），混合充分后10 min靜置，醋酸-醋酸鈉緩沖液予以稀釋至刻度；與不含鐵的空白試液進行對比，1 cm比色皿檢測510 nm處分光度計的阻抑體系吸光度A、非阻抑體系吸光度A0，且計算△A=A0-A。

2 結果

2.1 吸收光譜

在400～600 nm的波長范疇中，非阻抑體系VCH3COOOH=0.00 ml吸收峰為510 nm，尖銳峰形，峰值高，單一峰數，強吸收出現在2.20×104mol吸光系數，在510 nm處吸光譜未發生變化，阻抑體系為最大吸收值，吸光度值在加入過氧乙酸為階梯式下降。見圖1。

圖1 吸收光譜

2.2 實驗條件的選擇

2.2.1 表面活性劑 陽離子表面活性劑的激活中吸光度升高，TPB-STAB混合體系出現明顯優勢，當TPB、STAB劑量相同時，吸光度突然升高，在2.20×104mol吸光系數吸收波長max。見圖2。

圖2 表面活性劑不同劑型中鄰二氮菲配合物的吸光譜

2.2.2 硫酸用量 過氧乙酸在酸性條件下有助于抑制水解三價鐵離子，硫酸的用量對溶液褪色程度的影響，結果顯示，控制硫酸在0～2.0 ml范圍內，△A隨之增大；△A在2.0～4.0 ml范圍內逐漸平穩，大于4.0 ml時則下降，本研究為3.0 ml。

2.2.3 鄰二氮菲用量 鄰二氮菲含量0.6～2.0 ml，鄰二氮菲和△A用量呈正相關，當鄰二氮菲用量超過2.0 ml時，△A達到最大值且較平穩，本研究選擇2.0 ml。

2.2.4 標準二價鐵離子溶液用量 當標準二價鐵離子溶液為2.5 ml時，非阻抑吸光度約為1.20，因此標準Fe2+溶液適宜用量為2.5 ml。

2.2.5 穩定性和反應時間 反應時間和吸光度在反應起始時間呈正比例，但其達到最大吸光度值及趨于恒定的時間具有一定的差異；當 PCH3COOOH=0 μg/ml時，非阻抑體系5～8 min（A值）緩慢上升，9 min后逐漸穩定；當PCH3COOOH=1.0 μg/ ml時，阻抑體系 A值在 1～5 min內增高顯著，6 min后趨于平穩。在1 h左右A值無顯著改變；本研究在10 min顯色反應后對吸光度予以檢測。

2.3 共存離子的影響

當過氧乙酸濃度為2 μg/ml時，對無機離子和有機化合物體系予以檢測，當誤差＜5%時，MnO2-4、Cr2O2-7濃度相同時產生干擾，10倍的氫氧化氮、Zn2+、Ca2+、Mg2+、葡萄糖、三價鋁離子、3 倍的二價銅離子、一價NO離子、碳酸氫離子等檢測未發生變化。

2.4 工作曲線

工作曲線予以實驗方式制定，移取不同量的過氧乙酸標準液。條件最佳時，△A和0.05～2.00 μg/ ml的過氧乙酸的線性關系較佳，線性回歸方程為：△A為1.3234 PCH3COOOH-0.0154，相關系數r =0.9997，按照實驗方式對空白平行檢測10次，標準偏差s為0.01，按照3 s/k（k為標準曲線回歸方程的斜率）計算方法的檢出限為0.02 μg/ml。見圖 3。

圖3 工作曲線

2.5 樣品分析

2.5.1 處理試樣 取過氧乙酸-1#、過氧乙酸-2#均為5 ml，混合后置存24 h，加入10 ml的H2SO4溶液（2 mol/L），加入高錳酸鉀溶液（0.1 mol/L）至出現粉紅色溶液，溶液中加水至1 L，稀釋液超過10 ml后再加水，最終稀釋液為250 ml。

2.5.2 檢測含量結果 按實驗方式檢測且加標回收待測液1 ml；加入、回收量大體相同，樣品回收率為97.0%～101.7%，見表1。

表1 樣品結果分析（n =6）

3 討論

本研究于2015年1月‐2016年12月探析菏澤市立醫院50 ml消毒液內予以陽離子表面活性劑和增敏動力學光充法檢測過氧乙酸，結果 顯 示： 在 0.05～1.50 μg/ml范 圍 內 檢 出 限 為0.02 μg/ml，過氧乙酸及吸光度呈現遞減式線性關系；在400～600 nm的波長范疇中，非阻抑體系VCH3COOOH=0.00 ml吸收峰為510 nm，尖銳峰形，峰值高，單一峰數，強吸收出現在2.20×104mol吸光系數，在510 nm處吸光譜未發生變化，阻抑體系為最大吸收值，吸光度值在加入過氧乙酸為階梯式下降；吸光度在陽離子表面活性劑的激活中升高，TPB-STAB混合體系出現明顯優勢，當TPB、STAB劑量相同時，吸光度突然升高，在2.20×104mol吸光系數吸收波長max。反應時間和吸光度在反應起始時間呈正比例，但其達到最大吸光度值及趨于恒定的時間具有一定的差異；當PCH3COOOH=0 μg/ml時，非阻抑體系5～8 min（A值）緩慢上升，9 min后逐漸穩定；當PCH3COOOH=1.0 μg/ml時，在1～5 min內阻抑體系A值增高顯著，6 min后趨于平穩[3-6]。

試驗結果顯示，吸收光譜說明Fe2+和過氧乙酸僅出現氧化還原反應，生成物Fe3+未影響Fe2+二的顯色反應，在溶劑效應的激活中，460 nm為吸收峰最小值，本吸收峰為Fe2+，檢測吸光度（510 nm）無影響。在選擇試驗條件時，吸光度在予以陽離子表面活性劑發生程度不同的升高，為發生協同增敏機制[7-10]：長鏈STAB是兩性功能化分子，鄰二氮菲混合疏水劑，水溶性增強，與Fe2+接觸較多，進而形成配位反應，TPB的吡啶基結構，可進行配位[11-13]，在STAB的刺激下，TPB、鄰二氮菲、二價鐵離子反應生成顏色更深的三元絡合物，摩爾吸光系數變大，增強光吸收度[14-16]；TPB-STAB體系顯著提高配合物的光敏感度，達到助溶、催化、增敏的功能[17]。其他試驗顯示，CTMAB等陽離子表面活性劑的催化反應的增敏功能強大，檢出限為7.5 ng/ml，相對標準偏差為4×10-3%，與本研究結果相符[18]。試驗顯示，在體積50 ml內有混合表面活性劑2 ml時，吸光度出現峰值且較平穩。酸性環境中，過氧乙酸對三價鐵離子的水解進行抑制，應用2.0～4.0 ml硫酸時，△A逐漸平穩，本研究選擇3.0 ml；在反應的初始階段吸光度隨著反應時間的增加而增大，但其達到最大吸光度值及趨于恒定的時間不等；當PCH3COOOH=0 μg/ml時，非阻抑體系5～8 min（A值）緩慢上升，9 min后逐漸穩定；當PCH3COOOH=1.0 μg/ml時，在1～5 min內阻抑體系A值增高顯著，6 min后趨于平穩。按實驗方式檢測且加標回收1 ml待測液，加入、回收量大體相同，樣品回收率為97.0%～101.7%。綜上所述，鐵（II）-鄰二氮雜菲分光光度法檢測過氧乙酸效果確切。