HBV DNA定量與乙肝血清學(xué)標(biāo)志物定量聯(lián)合檢測乙肝病毒感染的效果分析

趙 棉, 張 力, 趙亞妮

(1. 陜西省西安市第一醫(yī)院 檢驗科, 陜西 西安, 710002; 2. 陜西省友誼醫(yī)院 檢驗科,陜西 西安, 710068; 3. 陜西省西安市第五醫(yī)院 檢驗科, 陜西 西安, 710082)

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染所致的疾病。目前, HBV DNA定量與HBV血清學(xué)標(biāo)志物是測定HBV傳染性與感染程度的主要方法，其中血清學(xué)標(biāo)志物可以快速獲取到結(jié)果，操作簡便，適用于大批量篩查。血清學(xué)標(biāo)志物卻無法有效反映HBV的復(fù)制狀態(tài)。HBV DNA定量具有靈活度高、觀察直接等特點，可以有效監(jiān)測HBV DNA的復(fù)制狀態(tài)，清楚識別不同時期乙肝的感染情況，診斷乙肝突變株[1]。HBV DNA定量與HBV血清學(xué)標(biāo)志物均有獨特的優(yōu)勢，但二者聯(lián)合應(yīng)用的相關(guān)研究較少[2]。本研究分析HBV DNA 定量與乙肝血清學(xué)標(biāo)志物定量聯(lián)合檢測HBV感染的效果，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

回顧性分析2017年1—12月本院988例乙型肝炎患者的臨床資料，根據(jù)HBV血清學(xué)標(biāo)志物定量檢測水平將其分為3組，即大三陽組[乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)、核心抗體(抗HBc)陽性]285例，小三陽組[HBsAg、抗HBc、е抗體(抗HBe)陽性]358例，以及其他模型組[表面抗體(抗HBs)、抗HBc、抗HBe陽性，抗HBc、抗HBs陽性，抗HBc、抗HBe陽性，抗HBs陽性，抗HBc陽性, HBsAg與全陰性等]245例。大三陽組: 男145例，女140例; 年齡18～68歲，平均年齡(40.5±5.3)歲。小三陽組: 男180例，女178例; 年齡18～66歲，平均年齡(40.3±4.8)歲。其他模型組: 男125例，女120例; 年齡18～67歲，平均年齡(39.8±4.8)歲。3組性別與年齡構(gòu)成比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn): 符合《乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》(WS299-2008)[3]中對乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn); 近3個月內(nèi)未采取過抗病毒藥物治療。排除標(biāo)準(zhǔn): 合并嚴(yán)重心腦血管疾病; 伴有肝囊腫與腫瘤; 有精神疾病史。

1.2 方法

所有患者均行乙肝血清學(xué)標(biāo)志物定量與HBV DNA 定量檢測。采集患者空腹靜脈血，放置3 h后，分離血清，并置于-20 ℃冰箱內(nèi)待檢。HBV DNA定量: ① 選擇血清100 μL加入DNA濃縮液100 μL內(nèi)，充分混勻，上離心機以12 000 轉(zhuǎn)/min的速度離心10 min, 棄上清，在管底沉淀中加入HBV DNA提取液20 μL, 強烈振蕩充分混勻，在恒溫狀態(tài)下煮沸10 min, 再以1 200 轉(zhuǎn)/min的速度離心8 min, 取上清備用。② 選擇PCR反應(yīng)管，加入處理完畢的2 μL標(biāo)準(zhǔn)品與2 μL樣品，以5 000 轉(zhuǎn)/min的速度離心30 s, 放入儀器樣品槽。③ 調(diào)節(jié)反應(yīng)參數(shù), 1個循環(huán), 93 ℃預(yù)變2 min; 40個循環(huán), 94 ℃變性30 s; 40個循環(huán), 94 ℃～60 ℃退火、延伸30 s; 讀取熒光值。血清學(xué)標(biāo)志物的定量檢測: 通過ELISA人乙肝血清學(xué)標(biāo)志物試劑進行檢測，具體操作嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。

1.3 觀察指標(biāo)

分析HBV DNA定量對HBV感染的檢測結(jié)果，對比血清標(biāo)志物定量與HBV DNA定量檢測的陽性率，分析不同血清學(xué)標(biāo)志物定量模式與不同HBV DNA定量水平的檢測結(jié)果。HBV DNA定量評價標(biāo)準(zhǔn): HBV DNA<5.0 lg copies/mL為陰性，水平≥5.0 lg copies/mL為陽性。血清學(xué)標(biāo)志物評價標(biāo)準(zhǔn): HBsAg<0.2 ng/mL為陰性, ≥0.2 ng/mL為陽性; 抗-BHs濃度<10.00 mIU/mL為陰性，抗-BHs濃度≥10.00 mIU/mL為陽性; HBeAg<0.5 PEIU/mL為陰性, ≥0.5 PEIU/mL為陽性; 抗-HBc<0.9 PEIU/mL為陰性, ≥0.9 PEIU/mL; 抗HBe<0.3 PEIU/mL為陰性, ≥0.5 PEIU/mL為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 HBV DNA對HBV感染的檢測結(jié)果

大三陽組285例, HBV DNA陽性280例(98.25%); 小三陽組358例, HBV DNA陽性185例(51.68%); 其他模型組245例, HBV DNA陽性25例(10.20%)。3組對HBV DNA檢測的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 即大三陽組HBV DNA檢測的陽性率>小三組>其他模型組。大三陽組HBV DNA定量檢測結(jié)果為(7.30±1.38) lg copies/mL, 小三陽組為(4.38±1.28) lg copies/mL, 其他模型組為(3.58±1.70) lg copies/mL。3組HBV DNA定量檢測水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 即大三陽組>小三陽組>其他模型組。

2.2 血清標(biāo)志物與HBV DNA陽性率對比

490例HBV DNA陽性樣本中, HBeAg檢出率為48.98%(240/490), HBsAg檢出率為96.94%(475/490)。見表1。

表1 血清標(biāo)志物與HBV DNA陽性結(jié)果對比

2.3 不同血清學(xué)標(biāo)志物定量模式與不同HBVDNA檢測水平的結(jié)果分析

HBV DNA水平>7 lg copies/mL時，以大三陽組居多，占77.24%; 5～7 lg copies/mL時，以大三陽組居多，占66.04%; 2.7～<5 lg copies/mL時，以小三陽組居多，占44.66%; <2.7 lg copies/mL時，以其他模型組居多，占55.83%。見表2。

表2 不同血清學(xué)標(biāo)志物定量模式與不同HBV DNA檢測水平的結(jié)果分析[n(%)]

3 討 論

乙型肝炎屬于臨床常見的慢性傳染性疾病，臨床表現(xiàn)為畏食、乏力、腹脹、惡心、肝區(qū)疼痛等，肝質(zhì)地中等硬度、肝大，嚴(yán)重者伴有蜘蛛痣、慢性肝病面容、脾大、肝掌、肝功能異常等[4]。中國乙型肝炎的發(fā)病率高居世界首位，每年因乙型肝炎及乙肝所致肝衰竭等相關(guān)性疾病死亡的病例可達(dá)25萬，不僅給人們的健康帶來了嚴(yán)重的影響，同時也給社會造成了沉重的負(fù)擔(dān)[5]。因此，采取可靠的檢驗手段盡早明確診斷乙型肝炎，并積極采取有效的治療措施十分必要。

在機體感染HBV的過程中，免疫應(yīng)答會形成免疫殺傷作用，其中免疫功能對HBV感染病程與程度具有直接的影響。機體免疫功能較低的情況下, HBV可發(fā)生持續(xù)性復(fù)制，并生成HBeAg, 而當(dāng)病情好轉(zhuǎn)或免疫功能較高時, HBV停止復(fù)制，抗HBe呈陽性，而HBeAg呈陰性。還有學(xué)者[6]發(fā)現(xiàn)，乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物可以有效評估HBV的免疫狀態(tài)，而HBV DNA卻可以直接提示乙型肝炎病毒的復(fù)制狀態(tài)。目前，血清學(xué)標(biāo)志物與HBV DNA分子生物學(xué)檢測是診斷HBV的重要手段。

乙型肝炎的血清標(biāo)志物包括抗HBs、抗HBe、抗HBc、HBsAg、HBeAg, 現(xiàn)主要采用ELISA法檢測，具有操作簡單、快速、價廉等優(yōu)勢，可以間接反映出HBV感染[7]。然而，血清標(biāo)志物定量檢測無法動態(tài)與及時的評價出HBV的復(fù)制情況，以及傳染風(fēng)險性[9]。通過熒光定量實施的HBV DNA定量檢測可以有效彌補血清標(biāo)志物上述的不足之處[10-11]。為了進一步完善乙型肝炎患者的診療方案，本研究采用血清標(biāo)志物定量與HBV DNA定量聯(lián)合檢測HBV感染，結(jié)果顯示, 3組對HBV DNA檢測的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 即大三陽組HBV DNA檢測的陽性率>小三組>其他模型組。3組HBV DNA定量檢測水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 即大三陽組>小三陽組>其他模型組。可見, HBeAg陽性患者HBV復(fù)制狀態(tài)十分活躍，具有較強的傳染性。在490例HBV DNA陽性患者中, HBeAg檢出率為48.98%, HBsAg檢出率為96.94%。說明HBV DNA陽性主要存在于HBsAg攜帶者中。不同血清學(xué)模式觀察中, HBV DNA水平>7 lg copies/mL時，以大三陽組居多，占77.24%; 5～7 lg copies/ml時，以大三陽組居多，占66.04%; 2.7～<5 lg copies/mL時，以小三陽組居多，占44.66%; <2.7 lg copies/mL時，以其他模型組居多，占55.83%。HBV DNA水平>7 lg copies/mL時，大三陽組HBV DNA陽性率明顯高于其他模式。HBeAg高度與HBV DNA水平有關(guān)，具有較佳的一致性，即HBeAg陽性時，其指標(biāo)越高, HBV DNA水平也隨之增高，這與部分研究結(jié)果[12-13]相符。可見，通過檢測HBeAg能夠間接識別HBV的傳染活躍度與復(fù)制狀態(tài)，但并不代表HBeAg轉(zhuǎn)陰, HBV即會停止復(fù)制。有研究[14-17]發(fā)現(xiàn)，乙型肝炎患者HBV DNA指標(biāo)>5 lg copies/mL時, HBV具有較高的活躍度，而≤5 lg copies/mL時，感染狀態(tài)較低，所以在臨床上也應(yīng)同時給予HBV DNA定量測定，以便掌握病毒的復(fù)制情況。有研究[18-20]認(rèn)為，通過PCR技術(shù)測定HBV DNA定量指標(biāo)，利于HBsAg陰性者盡早識別HBV感染。此外, PCR具有較高的靈敏度，不僅可以檢測出低指標(biāo)的HBV感染，且在無法提示HBsAg指標(biāo)的情況下，可以識別出可能因S基因突變導(dǎo)致HBV無法顯示HBsAg而出現(xiàn)血清學(xué)標(biāo)志物全陰的HBV感染情況。

總之，血清標(biāo)志物可以有效反映HBV的感染情況，但多種陰性血清學(xué)標(biāo)志物患者出現(xiàn)了HBV DNA陽性顯示，說明HBV DNA定量檢測可以有效補充血清學(xué)標(biāo)志物定量測定的缺陷，二者聯(lián)合檢測能夠有效增強HBV的診斷準(zhǔn)確率，為評價HBV傳染性與感染程度提供有效的參考。