HPV癌基因E6/E7 mRNA在宮頸癌篩查中的臨床意義

羅佩宜

宮頸癌是繼乳腺癌的全球第二大癌癥, 其發病率位居發展中國家女性婦科腫瘤的首位, 嚴重威脅著我國女性的生命健康［1］。研究顯示, 宮頸癌的發生與 HPV感染密切相關［2］。事實上, HPV感染宮頸上皮細胞后將產生E6和E7兩種癌蛋白, 癌蛋白通過鈍化宿主細胞的抑癌蛋白如 p53、PRb等而導致細胞周期控制失常, 最終引發癌變［3］。因此, 在宮頸癌初步篩查中檢測HPV癌基因 E6/E7 mRNA是否更具有診斷價值是目前臨床研究的熱點。在本項研究中, 作者就HPV癌基因E6/E7 mRNA在宮頸癌篩查中的檢測價值進行了探討,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1～12月于廣東省東莞市清溪醫院進行宮頸病變篩查的400例受試者作為研究對象, 納入標準：①就診癥狀主要表現為陰道分泌物增、異味、異常出血,宮頸炎；②均已婚或有性生活史；③對研究知情同意且經過醫院倫理委員會的批準；④排除存在子宮切除手術史或宮頸手術史和盆腔放射治療史的受試者；⑤在檢查前未接受治療。本研究受試者年齡23～65歲, 平均年齡(46.8±6.6)歲。

1.2 檢測方法 均接受宮頸TCT檢查及高危型HPV-DNA檢測, 并對結果為陽性者進一步進行陰道鏡下宮頸活檢和HPV癌基因E6/E7 mRNA檢測。采集標本前24 h內禁止性生活、陰道檢查、陰道灌洗及用藥。HPV癌基因E6/E7mRNA檢測流程：①填寫送檢單必要信息。②專用采樣器采集送檢：樣本類型分為：a.宮頸脫落細胞：將采樣器的中央刷毛部分輕輕插入子宮頸管, 以便較短的刷毛能夠完全接觸到子宮頸口, 之后柔和的向前抵住采樣器, 并按同一個時針方向轉動采樣器5整周, 切勿來回轉動, 將采樣器按入保存液小瓶底, 迫使刷毛全部散開, 共10次, 然后在溶液中快速擺動采樣器以進一步的將細胞樣本漂洗下來, 取下采樣器,擰緊瓶蓋送檢。標本液需＞5 ml, 專用細胞保存液保存2周。拒檢說明：在HPV-DNA保存液中保存的樣本；與TCT標本共用時, 檢測量＜3 ml。b.蠟塊組織, 3個以上玻片。結果用光子數表示, 經Diaearta計算機軟件轉換為拷貝數。

1.3 分型標準 活檢結果根據世界衛生組織(WHO)分類和診斷標準分為：正常/炎癥、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級以及SCC。所有宮頸活檢結果均采用雙盲法由2名有多年臨床工作經驗的病理科醫生共同確定, 若診斷不一致, 則由2名病理醫師在雙頭鏡下達成共識。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。p＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 TCT、HPV與宮頸活檢結果 TCT檢測顯示陽性139例、陰性261例, HPV-DNA檢測顯示陽性175例、陰性225例。兩種檢測結果陽性者為264例。見表1。宮頸活檢結果顯示正常/炎癥、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級以及SCC例數分別為178例、48例、21例、11例以及6例。見表2。

表1 400例受試者TCT及HPV-DNA檢測結果［n(%)］

表2 264例受試者宮頸活檢結果［n(%)］

2.2 不同宮頸活檢分級的HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性率和拷貝數比較 HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性率及拷貝數隨著病變級別的遞增而增加, 且各CIN分級以及SCC患者HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性率均明顯高于正常/炎癥者, 同時各級宮頸活檢分級者HPV癌基因E6/E7 mRNA拷貝數兩兩比較差異具有統計學意義(p＜0.05)。見表3。

表3 不同宮頸活檢分級的HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性率和拷貝數比較［n(%),］

表3 不同宮頸活檢分級的HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性率和拷貝數比較［n(%),］

注：與正常/炎癥比較, ap＜0.05；與CINⅠ級比較, bp＜0.05；與CINⅡ級比較, cp＜0.05；與CINⅢ級比較, dp＜0.05

宮頸活檢分級 例數 HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性 HPV癌基因E6/E7 mRNA拷貝數(copies/ml)正常/炎癥 178 86(48.31) 176.26±43.05 CIN Ⅰ級 48 41(85.42)a 1168.58±248.05a CIN Ⅱ級 21 21(100.00)a 2975.30±479.44ab CIN Ⅲ級 11 11(100.00)a 4238.35±836.20abc SCC 6 6(100.00)a 7493.16±1654.82abcd

3 討論

研究顯示, 99.7%的宮頸癌患者存在HPV 感染, 而高危型HPV的持續感染可逐步引起CIN 與宮頸癌［4］。TCT檢測和HPV-DNA是目前常用于宮頸癌的篩查手段［5-9］, 前者子宮頸檢測結果與組織病理 CINⅠ～Ⅲ級的診斷符合率較低, 且存在較高的漏診率；后者則存在檢測特異性和陽性預測值低等不足。近年來, HPV癌基因E6/E7 mRNA檢測成為宮頸癌篩查的研究熱點, HPV的 E6、E7為HPV的兩條癌基因片段,其中E6 蛋白與抑癌蛋白p53 結合, 通過阻斷異?；蚣毎牡蛲? 導致細胞永生化和宮頸病變的發生；E7 蛋白通過特異性結合pRb蛋白而抑制細胞周期的進展, HPV E6/E7 mRNA過度表達可使細胞生長抑制劑失活, 加速異常細胞的過度增殖, 導致宮頸癌的發生發展［10］。本項研究結果發現TCT檢測顯示陽性139例、陰性261例, HPV-DNA檢測顯示陽性175例、陰性225例。宮頸活檢結果顯示正常/炎癥、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級以及SCC例數分別為178例、48例、21例、11例以及6例。HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性率及拷貝數隨著病變級別的遞增而增加, 且各CIN分級以及SCC患者HPV癌基因E6/E7 mRNA表達陽性率均明顯高于正常/炎癥者, 同時各級宮頸活檢分級者HPV癌基因E6/E7 mRNA拷貝數兩兩比較差異具有統計學意義(p＜0.05)。提示HPV癌基因E6/E7 mRNA 表達量與宮頸癌的發生發展有關聯。

綜上所述, HPV癌基因E6 /E7 mRNA拷貝數與宮頸病變程度相關, HPV癌基因E6/E7 mRNA可作為本地區宮頸癌的篩查手段之一, 對于預測宮頸病變的發生發展具有重要意義。