羅氏Cobas6000全自動電化學發光分析儀檢測CA153的性能評價

趙有利 張尚弟 陳麗 劉玉梅（通訊作者）

（蘭州大學第二醫院檢驗醫學中心 甘肅 蘭州 730030）

羅氏Cobas6000型全自動電化學發光分析儀可用于多種腫瘤標志物、心肌損害標志物、貧血標志物等80多種生化指標的檢測，其采用了國際先進的電化學發光免疫技術，具有操作簡單、結果準確、自動化程度高等優點[1-2]。《醫療機構臨床實驗室管理辦法》以及ISO 15189：2012《醫學驗室-質量和能力的專用要求》準則等要求檢測系統在投入臨床使用前必須進行嚴格的性能驗證，即實驗室需要對檢測設備的方法、性能進行分析和驗證，對檢測結果進行判讀，驗證其是否能夠滿足臨床檢驗的需求，是否符合臨床檢驗的相關標準[3-4]。為了保證臨床檢驗結的真實、可靠、準確，本實驗將以ISO15189《醫學實驗室質量和能力認可準則》為準則，檢驗流程參考NCCLS指南文件，并根據工作實際情況和臨床需要設計驗證方案，對羅氏Cobas6000分析儀檢測CA153的性能進行驗證和評價。CA153作為常規檢測項目在臨床廣泛應用，但在Cobas6000上檢測的相關的性能評價研究屈指可數。

1.資料與方法

1.1 一般資料

樣本來自2018年3—4月蘭州大學第二醫院門診、住院患者，且所有血液樣本無嚴重溶血、黃疸、脂血等情況。

1.2 儀器與試劑

羅氏Cobas6000型全自動電化學發光分析，羅氏CA153試劑盒，批號為00270343，配套校準品，批號為243159，通用稀釋液，批號為25534701，PreciControl TM1低值質控品，批號為23719800，PreciControl TM2高值質控品，批號為23719900。

1.3 方法

1.3.1 精密度評價 選擇羅氏公司配套的高低兩個不同濃度水平的質控品，參考 (CLSI) EP15-A2標準[5]，實驗周期為5天，每天檢測一批次樣本，每個批次同一水平重復檢測3次后取平均值，并計算同批次樣本數值的變異系數以及不同批次之間的變異系數。同一批次不同樣本之間的精密度將質量目標設定為CLIA'88允許總誤差的1/4以內，不同批次之間的精密度將質量目標設定為CLIA'88允許總誤差的1/3以內。

1.3.2 線性范圍評價 參考(CLSI)EP6-A2線性評價方法[6]，選取1份低濃度(L)樣本和1份高濃度(H)樣本，分別按照儀器所規定的線性范圍配制成不同系列濃度的血清，即H與L按不同比例配合，如：5L、4L+1H，3L+2H，2L+3H，1L+4H，5H。每個樣本均需重復測定2次，并準確記錄數據，隨后將預期值設為X，將實際值設為Y，并采用多項式回歸方式進行擬合，具體方程為：Y=bX+a，若相關系數（r2）不低于0.975，b值落在了0.97～1.03這一區間內，a與0無統計學差異，結果為可接受，若b＜0.95則提示b和1之間存在統計學差異。

1.3.3 參考區間評價 根據NCCLSC 28-A2推薦方法[7]，選取20名健康體檢者的血樣。按照標準操作程序（SOP）要求在Cobas6000分析儀上進行檢測，統計結果中若超過18例檢測結果在廠商參考區間內，則提示該區間可用于本實驗室。

1.3.4 稀釋倍數驗證[8]取1個高濃度樣本，一管未稀釋不做任何處理，一管進行最佳稀釋倍數稀釋，隨后分別測定兩管樣本的實際數值，同一水平重復測定3次后取均值，計算測定結果與理論值之間的偏差，允許誤差范圍應低于1/2 CLIA'88。

1.4 統計學處理

使用SPSS19.0統計學軟件處理和分析，計算各項指標的x、s和CV值，組內數據和組間數據對比采用t檢驗分析，計數CLIA'88資料采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 精密度結果

不同濃度的CA153所對應的精密度數值詳見表1和表2。驗證結果顯示高濃度樣本和低濃度樣本的批內CV%均小于1/4 CLIA'88，批間CV%均小于1/3 CLIA'88，顯示該方法的精密度符合標準要求，見表3。

表1 電化學發光法檢測 CA153 精密度驗證低值樣品（U/mL）

表2 電化學發光法檢測 CA153 精密度驗證高值樣品（U/mL）

表3 CA153 批內、批間精密度驗證結果（%）

2.2 線性范圍結果

羅氏公司聲明的電化學發光法測定CA153的線性范圍為1.0～300U/mL, 為驗證其線性范圍對配制好的系列濃度血清進行雙份檢測，其中L 測定值為4.09U/mL，H的測定值為260.40U/mL。結果見表4。預期值為X，測量均值為Y，作折線圖。CA153的相關系數（r2）為0.9988＞0.975，而b值均落在0.9728～1.0176這一區間內，提示標本狀態良好無干擾的情況下CA153的測定結果在1.0～300 U/mL范圍內線性良好。見圖1。

表4 CA153測定值與預期值結果（U/mL）

圖1 線性回歸分析

2.3 參考區間驗證結果

檢測20例健康體檢者的血液樣本后發現所有受檢者的CA153參考區間符合率≥100%，這表明參考區間符合要求。見表5。

表5 20例參考個體 CA153 測量結果（U/mL）

2.4 稀釋倍數驗證結果

CA153的稀釋倍數偏差為 6.94%，小于1/2 CLIA'88。見表6。

表6 稀釋倍數驗證

3.結論

電化學發光免疫分析以其靈敏度高儀器價格低可實現自動化等優勢已被臨床廣泛應用。根據 ISO15189 的要求，說明書中制定的參數均由設備在最為理想的狀態下測定，而每個實驗室的水質、電壓、溫度、濕度等外部環境差異明顯，實驗操作人員習慣不一，因此每個實驗室都需在檢測系統投入使用前對其性能進行分析和驗證。《醫療機構臨床實驗室管理辦法》明確要求為保證檢驗分析系統、分析儀器的質量時必須測試其性能[9]。ISO15189同時規定：實驗室在引入新的檢測系統、檢測設備時必須對其性能進行規范、嚴謹的分析，驗證檢測結果是否符合臨床檢驗的相關標準[10]。

精密度是評價檢測值穩定性的重要指標之一，亦可用于反映系統隨機誤差。精密度的檢測是性能分析和評價的基礎和前提[11-13]，本試驗的精密度檢測主要參照EP15-A2文件。CA153的高低值批內精密度和批見精密度分別低于6.25%和8.33%，符合腫瘤標志物檢測指導文件中對精密度的要求。

線性范圍即樣本在未經濃縮、稀釋等預處理的情況下可被直接測定出檢測物的范圍[14]，其可用于反映方法學性能的評價。本試驗在驗證試劑線性范圍時主要參考NCCLS EP6-A2文件，共分析6個不同系列濃度的標本，這些標本基本可覆蓋預期檢測范圍。驗證結果顯示線性良好，線性范圍與廠家指定的檢測范圍基本一致，結果可被臨床所接受。

生物參考區間即臨床評判患者健康與否的區間，故實驗室需保證所提供的生物參考區間正確適用。本試驗在驗證生物參考區間時主要參考NCCLS C28-A2文件，并在分項目檢測時將健康體檢者分為男女兩組，進行CA153生物參考區間的驗證，結果表明分組參考區間符合率為100%，結果可接受，可用于本實驗室。

試劑廠家推薦稀釋倍數是10，經過測試在此稀釋倍數下偏差小于12.5%，可接受，表明Cobas6000型分析儀有較好的臨床表現。

綜上所述，通過對羅氏公司Cobas6000型全自動電化學發光分析上檢測的CA153測定試劑盒精密度、線性范圍、生物參考區間和最大稀釋倍數4項分析性能進行驗證和評價，結果顯示各個參數均能滿足臨床需要和實驗室的相關要求，能夠為臨床日常檢測、診療、科研數據分析提供準確、可靠的檢測數據。