毛蕊異黃酮對腦缺血再灌注損傷大鼠神經功能及氧化應激損傷的影響

肖晶 王文波（通訊作者）姚瀚勛 彭志柱 李啟明 曾詩意 夏學巍

（桂林醫學院研究生院 廣西 桂林 541000；桂林醫學院附屬醫院 廣西 桂林 541001）

缺血性腦梗死是具有較高的死亡率及致殘率疾病，在臨床中備受重視。腦缺血再灌注損傷是最主要的病理生理性改變，產生一些有害物質會損傷神經元，更有甚者會造成神經細胞的壞死和凋亡[1-3]。腦缺血再灌注后發生的氧化應激和炎癥反應進一步加重了腦損傷。因此以腦缺血再灌注后炎癥反應途徑為靶點的治療是一種正確可行的治療方案。毛蕊異黃酮具有明顯的植物雌激素特點，前期研究表明具有保護心腦血管和神經細胞，舒張血管平滑肌，激素樣作用等[4]。為此，我們針對毛蕊異黃酮對腦缺血再灌注損傷的保護作用機制進行以下研究。

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要藥品、試劑及儀器 毛蕊異黃酮(中國藥品生物制品檢定所提供)。丙二醛(MDA)測定試劑盒(生產批號：20140117)，超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒(生產批號：20140109)。全自動生化儀。

1.1.2 實驗動物 SD大鼠（SPF級）40只，由桂林醫學院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(桂) 2013-0006。喂養環境：桂林醫學院病理生理學實驗室，分籠喂養，予以12h晝夜節律變化，室溫控制在(22±1)℃，予以自由飲水進食。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組 將40只SD大鼠隨機分為假手術組(n=8)；缺血再灌注組(n=8)；毛蕊異黃酮組：毛蕊異黃酮5mg/kg組（n=8)，毛蕊異黃酮10mg/kg組（n=8），毛蕊異黃酮20mg/kg組（n=8)。毛蕊異黃酮組造模前14天予以腹腔注射給藥，1次/天，造模后缺血2小時再灌注24小時后斷頭取腦，各組未達到規定時間點死亡的SD大鼠要從實驗中剔除。

1.2.2 大鼠腦缺血再灌注模型 動物術前禁食12小時，自由飲水，采用線栓法[5]建立大鼠中動脈腦缺血再灌注模型。

1.2.3 動物神經行為學評分 將蘇醒后的動物放回籠內，使其自由飲食。按改良的Bederson[10]評估并記錄每組大鼠神經功能缺損評分。

1.2.4 腦梗死率計算 以矢狀面切取2mm厚度的大腦切片，用磷酸鹽緩沖液配制成1%的TTC染色液，將腦組織切片置染色液中，取出腦組織切片，并用Image J軟件計算梗死面積。

1.2.5 腦組織中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活力測定 分別采用TBA法、比色法測定腦組織中過氧化產物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性，以上操作均嚴格按試劑盒說明書進行。

2.結果

2.1 毛蕊異黃酮對大鼠缺血再灌注損傷后神經評分的影響見表1。

缺血再灌注組與假手術組相比，意識障礙程度較重（P＜0.01），毛蕊異黃酮組與缺血再灌注組相比，意識障礙程度較輕（P＜0.01或P＜0.05）。

2.2 毛蕊異黃酮對大鼠腦梗死面積的影響 見表1。

缺血再灌注組與假手術組相比，大鼠腦梗死率較明顯（P＜0.01），與缺血再灌注組相比，毛蕊異黃酮組能顯著降低大鼠腦梗死率（P＜0.01或P＜0.05）。

表1

2.3 毛蕊異黃酮對大鼠腦組織中MDA含量及SOD活力的影響 見表2。

與假手術組相比，缺血再灌注組MDA含量增多明顯（P＜0.01），SOD活力顯著降低（P＜0.01）；與缺血再灌注組相比，毛蕊異黃酮組能顯著增加腦組織中SOD活性（P＜0.01或P＜0.05），并降低腦組織中MDA含量（P＜0.01或P＜0.05）。

表2

3.討論

腦缺血再灌注時，腦組織缺血、缺氧在得到緩解的同時產生的活性氧（ROS）與中風相關的腦損傷中起主要作用。由于腦組織中抗氧化酶的活性較低，因此缺血再灌注損傷產生的活性氧（ROS）非常容易致使腦組織受到氧化損傷，從而導致腦脂質、蛋白質和DNA的氧化損傷，導致腦功能障礙和細胞死亡。因為活性氧（ROS）可攻擊神經細胞的不飽和脂肪酸，引發的脂質過氧化作用會產生大量的丙二醛（MDA），所以腦組織中的丙二醛（MDA）含量高低可間接反映神經細胞脂質過氧化反應的程度[6、7]。同時腦組織中的超氧化物歧化酶（SOD）是活性氧（ROS）的特殊底物誘導酶，能將腦缺血再灌注時產生的活性氧（ROS）歧化為H2O2和O2，所以腦組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性的高低也可在一定程度上反映出機體氧自由基的清除能力[8]。

通過本研究發現，毛蕊異黃酮能夠顯著降低缺血再灌注損傷大鼠神經功能評分、降低腦梗死率，并顯著抑制由缺血再灌注損傷誘導腦組織中的MDA含量的升高及增加SOD等抗氧化酶的活力。表明毛蕊異黃酮可通過降低氧自由基水平，負性調節腦組織氧化應激反應，從而改善大鼠腦缺血再灌注后的腦梗死率及神經功能缺損癥狀。