三七總皂苷聯合雷公藤多苷對膠原誘導關節炎大鼠血清白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α表達及滑膜新生血管的影響*

劉東京，肖穎，吳季霖

（深圳市第三人民醫院暨南方科技大學第二附屬醫院 1.科教科；2.胃腸外科，廣東 深圳 518000）

研究資料顯示，膠原誘導關節炎大鼠模型存在早期動脈粥樣硬化（atherosclerosis, AS）改變，類風濕關節炎動物模型也就是膠原誘導關節炎（collagen induced arthritis, CIA）大鼠模型[1]。類風濕關節炎是一種全身免疫性疾病，類風濕關節炎的發生和發展侵蝕到鄰近關節軟骨組織，與此同時造成關節破壞狀況。相關文獻研究資料顯示，心血管病是造成類風濕關節炎患者死亡的主要原因之一，因此加強對類風濕關節炎的心血管預防成為臨床工作重點之一[2]。現階段對類風濕關節炎的發病病理機制尚不完全明確，大多數學者將類風濕關節炎與高血壓、糖尿病、類風濕關節炎本身炎癥和過度肥胖等傳統因素聯合起來[3]。在新生血管形成因子中，血管內皮生長因子和白細胞介素-6等作用顯著[4]；雷公藤多苷作為免疫制劑，在抗炎和抗氧化中取得顯著進步?；诖?，本文將深入研究分析三七總皂苷聯合雷公藤多苷對CIA大鼠的血清白細胞介素-1β（interleukin-1β, IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）表達及滑膜新生血管的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和藥品

1.1.1 實驗動物 50只清潔級大鼠來自深圳市第三人民醫院肝病研究所，體重（165.25±23.04）g；25只雌性大鼠、25只雄性大鼠，普通喂養7 d后建立膠原誘導關節炎大鼠模型。

1.1.2 藥品 雞II型膠原（生產企業：美國Sigma公司；批號：C-9301）、三七總皂苷（批準文號：國藥準字Z53020825；生產企業：云南三圣藥業有限公司）、雷公藤多苷（批準文號：國藥準字Z42021212；生產企業：遠大醫藥黃石飛云制藥有限公司）、蛋白芯片檢測試劑盒（美國merck millipore公 司， 貨 號 RCVD1-89K）、Luminex 200蛋白液相分析儀（美國Luminex公司）。

1.2 方法

膠原溶液配置，具體為：雞II型膠原 +0.1 mmol/L醋酸溶液配合成0.5 mg/ml溶液，再在無菌環境下充分補充完全佐劑（complete Freund's adjuvant, CFA），分別在50只大鼠尾部和足趾部注射已經配置好的膠原溶液（0.2 ml/ 只），造模3周后，平均關節炎指數（arthritis index, AI）達到11分則表示膠原誘導關節炎大鼠造模成功。將50只大鼠分為正常對照組（正常對照大鼠組為隨機抽取，應用等量生理鹽水灌胃方法，10 只）、三七總皂苷組（應用三七總皂苷灌胃方法，10只）、聯合組（應用三七總皂苷聯合雷公藤多苷灌胃方法，10只）、雷公藤多苷組（應用雷公藤多苷灌胃方法，10只）、甲氨喋呤組（應用甲氨喋呤灌胃方法，10只）；雷公藤多苷10 mg/ （kg·d），三七總皂苷 200 mg/（kg·d），甲氨喋呤1.6 mg/（kg·d）；每組大鼠灌胃1次/d，連續灌胃40 d。

1.3 觀察指標

采用液相蛋白芯片技術檢測膠原誘導關節炎大鼠的腫瘤壞死因子-α表達水平、白細胞介素-1β表達水平和滑膜新生血管（白細胞介素-6、血管內皮生長因子水平、單核細胞趨化蛋白-1的表達量）。

1.4 統計學方法

應用SPSS for windows 13.0軟件對數據進行統計學處理；屬于正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間數據比較采用LSD法；P ＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 5組大鼠腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β表達水平情況比較

三七總皂苷組、聯合組、雷公藤多苷組、甲氨喋呤組的TNF-α表達水平均高于正常對照組（P ＜0.05）；聯合組TNF-α表達水平低于三七總皂苷組、雷公藤多苷組以及甲氨喋呤組（P ＜0.05）；三七總皂苷組、聯合組、雷公藤多苷組、甲氨喋呤組的IL-1β表達水平均高于正常對照組（P ＜0.05）；聯合組IL-1β表達水平低于三七總皂苷組、雷公藤多苷組以及甲氨喋呤組（P ＜0.05）。見表1。

表1 5組大鼠腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β表達水平情況比較 （±s, pg/ml, n =10）

表1 5組大鼠腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β表達水平情況比較 （±s, pg/ml, n =10）

注：1）與正常對照組比較，P ＜0.05；2）與聯合組比較，P ＜0.05。

組別 腫瘤壞死因子-α 白細胞介素-1β三七總皂苷組 160.25±4.321）2） 66.88±4.151）2）聯合組 130.88±3.121） 60.25±2.331）雷公藤多苷組 150.89±5.151）2） 68.96±2.561）2）甲氨喋呤組 143.05±4.001）2） 92.36±6.261）2）正常對照組 123.65±3.79 48.02±4.20

2.3 5組大鼠白細胞介素-6、血管內皮生長因子、單核細胞趨化蛋白-1的表達量情況比較

5組大鼠白細胞介素-6、血管內皮生長因子水平、單核細胞趨化蛋白-1的表達量比較差異均有統計學意義（P ＜0.05），見表2。

表2 5組大鼠白介素-6、血管內皮生長因子、單核細胞趨化蛋白-1的表達量情況比較 （±s）

表2 5組大鼠白介素-6、血管內皮生長因子、單核細胞趨化蛋白-1的表達量情況比較 （±s）

組別 白介素-6/(pg/ml) 血管內皮生長因子/(ng/L) 單核細胞趨化蛋白-1/(pg/ml)三七總皂苷組 93.02±4.55 18.74±2.96 4993.65±452.15聯合組 73.68±4.85 10.06±3.33 3208.74±142.36雷公藤多苷組 80.15±5.22 15.15±3.22 5022.32±230.17甲氨喋呤組 105.01±5.41 18.99±3.32 4777.33±420.21正常對照組 66.89±4.77 9.02±1.70 2566.63±159.26

3 討論

類風濕關節炎主要侵犯關節滑膜，其病理變化主要為：①滑膜細胞增生引起血管壁變性、肥厚；②滑膜細胞充血引起血管壁變性[5]。研究資料顯示，通過降低類風濕關節炎患者體內血管內皮生長因子水平，以及減少患者體內新生血管的增生，對治療有一定的效果[6]。類風濕關節炎所增生的滑膜需要更多血供來充分滿足對營養物質的基本需求，在維護血管新生的血管翳形成過程中具有重要價值[7]。血管內皮生長因子是一種多功能的糖蛋白，在胚胎血管發育過程中能夠形成控制血管生成和控制血管發育因子，因此血管內皮生長因子被看作血管生成中最為重要的因子之一[8]。血管內皮生長因子具有以下兩個方面的功能：①加強血管的通透性，②促進血管增生[9]。腫瘤壞死因子-α與腫瘤壞死因子受體互為結合后，會提高血管內皮生長因子的水平表達，與此同時減弱血管平滑肌的增殖能力，抑制蛋白酶，最終導致血液中的三酰甘油水平顯著上升。上述種種變化均會導致機體血管內皮受到嚴重損害，腫瘤壞死因子-α作用在類風濕性關節炎患者的滑膜組織中，會生成血管翳。研究資料顯示，對類風濕性關節炎患者給予抗腫瘤壞死因子-α的治療之后，不僅能顯著改善類風濕性關節炎患者的內皮功能，而且能改善類風濕性關節炎患者的炎癥癥狀，降低心血管發生率[10]。

血管內皮生長因子與類風濕關節炎疾病的形成機制最早是國外學者所提出，該學者對類風濕關節炎的滑膜組織切片和免疫組化染色后發現，類風濕關節炎的滑膜為陰性，而對照研究結果顯示炎癥類風濕關節炎關節中的血管因子水平顯著高于正常骨關節炎，數據比較差異有統計學意義（P ＜0.05）[11]。本文研究結果也顯示正常對照組的血管內皮生長因子水平低于其他4組大鼠（P ＜0.05），與國外學者的研究結果保持高度一致[12]。上述研究數據充分說明，在類風濕關節炎的滑膜組織中，血管內皮生長因子通過受體促進炎癥的發生和發展，從而加重類風濕關節炎患者的基本病情，導致關節發生畸形。白細胞介素-6在類風濕關節炎的相關作用未有血管內皮生長因子明確，學者普遍認為白細胞介素-6對細胞的基因表達有一定程度的影響[13]。白細胞介素-6是類風濕關節炎中的炎癥介質，是引起炎癥發生的重要細胞因子之一[14]。白細胞介素-6的活化細胞產生， 會合成類風濕因子。單核細胞趨化蛋白-1是一種促炎因子，作用在血液的單核細胞之內，導致內皮受損；單核細胞趨化蛋白-1參與到動脈粥樣硬化疾病的發生發展過程中，研究資料顯示，單核細胞趨化蛋白-1與冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┟芮邢嚓P[15]。抑制單核細胞趨化蛋白-1的含量表達會阻止血管早期病變，因此具有一定價值[16]。

在治療類風濕性關節炎患者過程中，新型藥物的出現使得類風濕性關節炎患者的病情得到顯著改善[17]。雷公藤多苷能夠積極抑制巨噬細胞移動因子的水平表達，雷公藤多苷還能夠降低炎性因子表達水平，誘導類風濕性關節炎滑膜組織細胞的凋亡，積極改善微循環作用 ，降低外周血的阻力。三七總皂苷具有消腫止痛和化瘀止血等基本功能，現代醫學研究表明，三七總皂苷還具有以下幾個方面的藥理作用：①延長凝血時間；② 清除自由基；③抑制血小板快速凝聚；④抗氧化、抗炎[18-20]。本文研究結果顯示三七總皂苷組、聯合組、雷公藤多苷組、甲氨喋呤組的腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β表達水平均高于正常對照組（P ＜0.05），聯合組腫瘤壞死因子-α、白細胞介素-1β表達水平均低于三七總皂苷組、雷公藤多苷組以及甲氨喋呤組（P ＜0.05）；5組大鼠白細胞介素-6、血管內皮生長因子、單核細胞趨化蛋白-1的表達量比較差異均有統計學意義（P ＜0.05）。

綜上所述，三七總皂苷聯合雷公藤多苷成分配伍可以有效調節膠原誘導關節炎大鼠的白細胞介素-1β、腫瘤壞死因子-α表達水平，抑制滑膜新生血管的生成，具有保護心血管的功能，達到抗炎和抗氧化的效果。