豬鏈球菌病及其自家滅活疫苗的制備

摘 要：豬鏈球菌病是由多種致病性豬鏈球菌感染引起的一種人畜共患病，該病臨床上常表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎、淋巴膿腫、關(guān)節(jié)炎等癥狀。由于鏈球菌血清型較多，較有效的預(yù)防方法是分離本場(chǎng)豬鏈球菌，制備成自家滅活苗進(jìn)行免疫。

關(guān)鍵詞：豬鏈球菌病 疫苗制備 自家滅活苗

一、豬鏈球菌病的特點(diǎn)

（一）病原特點(diǎn)

豬鏈球菌是一種革蘭氏陽(yáng)性球菌，呈鏈狀排列，無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，不形成芽胞，但有莢膜。為兼性厭氧菌，但在無(wú)氧時(shí)溶血明顯，培養(yǎng)最適溫度為37℃。菌落細(xì)小，直徑1～2mm，透明、發(fā)亮、光滑、圓形、邊緣整齊，在液體培養(yǎng)基中呈鏈狀。到目前為止，共有35個(gè)血清型（1～34，1/2型），最常見(jiàn)的致病血清型為2型。

（二）致病性

豬鏈球菌的主要毒力因子包括莢膜多糖、溶菌酶釋放蛋白、細(xì)胞外因子以及溶血素等。我國(guó)科研工作者研究比較多的是溶菌酶釋放蛋白（MRP）和細(xì)胞外蛋白 因子（EF），二者均為陽(yáng)性的菌株，一般具有較高的毒力，它們是評(píng)價(jià)豬鏈球菌2型毒力的重要指標(biāo)。CPS是抵抗巨噬細(xì)胞吞噬的重要物質(zhì)，是豬鏈球菌進(jìn)行分型的標(biāo)志，是目前唯一被確認(rèn)的毒力因子。

（三）流行特點(diǎn)

1 病原廣泛存在

豬鏈球菌常污染環(huán)境，可在糞、灰塵及水中存活較長(zhǎng)時(shí)間。該病四季均可發(fā)生，但在炎熱，潮濕季節(jié)多發(fā)。豬鏈球菌經(jīng)呼吸道、消化道、傷口及黏膜感染，也可垂直傳播，昆蟲(chóng)媒介在該病的傳播中也起著重要作用。豬的鏈球菌是條件性致病菌，只有在它適宜的環(huán)境中，豬只抵抗力低下的情況下才能發(fā)病，多呈散發(fā)和地方性流行，偶有暴發(fā)。新疫區(qū)可呈暴發(fā)流行，發(fā)病率和死亡率較高。各種品種，各種年齡的豬均易感染。

2 仔豬發(fā)病死亡率高

仔豬多發(fā)生于1，2月齡，此時(shí)的母源抗體水平相對(duì)較低，本身抵抗力差，在應(yīng)激，其他病原的侵襲等誘因下多發(fā)生；同時(shí)可通過(guò)小豬咬架的傷口，帶菌者的唾液及血液傳播，因此仔豬的發(fā)病率和死亡率較其他生長(zhǎng)階段要高。臨床上仔豬多見(jiàn)于敗血型和腦膜腦炎型。

二、自家滅活苗的制備

（一）病料采集

挑選有典型腦神經(jīng)炎癥狀及有關(guān)節(jié)炎癥狀的產(chǎn)房仔豬及保育仔豬多頭，要求為發(fā)病初期未使用任何抗生素治療，且體溫升高在41℃以上的病豬。剖檢發(fā)現(xiàn)病豬的腦軟膜、肺、肝、淋巴結(jié)有不同程度的出血點(diǎn)，心包、腹腔有纖維素性滲出物。關(guān)節(jié)腔內(nèi)充滿黃色膠樣液體，有的形成干酪樣物附著在關(guān)節(jié)面。無(wú)菌采取病豬的關(guān)節(jié)病變部位的關(guān)節(jié)液，進(jìn)行細(xì)菌的分離和鑒定。

（二）病原分離與鑒定

1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

病料采集，主要采集病豬的關(guān)節(jié)液。將采集的關(guān)節(jié)液分別接種到血液瓊脂平板培養(yǎng)基上和腦心湯液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)12—24 h。該菌培養(yǎng)結(jié)果為有針頭或針尖大小的灰白色、濕潤(rùn)、黏稠、周圍隆起的半透明菌落，在血液瓊脂平板上菌落周圍有β溶血。革蘭染色鏡檢，鏡下可見(jiàn)單個(gè)或成對(duì)排列的圓形或橢圓形革蘭陽(yáng)性小球菌。在培養(yǎng)基上很少形成鏈狀，而在肉湯中可形成長(zhǎng)鏈狀。

2細(xì)菌的鑒定

對(duì)上述分離到的革蘭陽(yáng)性球菌進(jìn)一步做生化反應(yīng)鑒定，該菌能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、水楊苷、海藻糖和菊糖，產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣，過(guò)氧化氫觸酶反應(yīng)陰性。

3動(dòng)物接種

將經(jīng)分離鑒定挑選出的鏈球菌培養(yǎng)液分別給4只家兔腹腔注射，2 mL/只，接種后12—36 h內(nèi)觀察家兔是否死亡，如死亡則從死亡家兔的心、肝、脾等器官分離細(xì)菌。接種后12—36 h內(nèi)家兔全部死亡。從死亡家兔的心、肝、脾等器官中能分離到純化的致病性鏈球菌，可確定該病豬的關(guān)節(jié)炎主要由鏈球菌感染所致。（三）疫苗制備過(guò)程

將上述分離純化的鏈球菌在無(wú)菌操作條件下接種腦心湯培養(yǎng)液增菌培養(yǎng)6—12 h，然后把每支試管培養(yǎng)物接種到3000 mL的腦心湯培養(yǎng)液中，37℃增菌培養(yǎng)18—24 h。菌液離心后，用滅菌的生理鹽水將菌體沉淀稀釋一定倍數(shù)，用0.3%體積的福爾馬林將菌液滅活，福爾馬林要逐滴加入，并且要一邊加入一邊振蕩，然后放入培養(yǎng)箱中37℃恒溫培養(yǎng)48 h。取滅活的培養(yǎng)物在血液瓊脂、沙氏培養(yǎng)基、肝湯液體培養(yǎng)基中37℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察有無(wú)菌落生長(zhǎng)。經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)菌生長(zhǎng)后，與氫氧化鋁佐劑進(jìn)行混勻及分裝。

（四）雜菌檢驗(yàn)和安全檢驗(yàn)

雜菌檢驗(yàn)取滅活的鏈球菌培養(yǎng)物在血液瓊脂、沙氏培養(yǎng)基、肝湯液體培養(yǎng)基中37℃恒溫培養(yǎng)24 h，觀察沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明鏈球菌培養(yǎng)物滅活完全，沒(méi)有鏈球菌及其他細(xì)菌生長(zhǎng)。

安全性檢驗(yàn)疫苗制好后，選5頭仔豬，每頭豬分別注射5 ml自家苗，30 min內(nèi)沒(méi)有出現(xiàn)嘔吐等異常癥狀，說(shuō)明該批疫苗可以使用，若30 min內(nèi)出現(xiàn)嘔吐等異常癥狀者，該批疫苗不能使用。

三、其他

豬鏈球菌病對(duì)于我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)來(lái)說(shuō)并不是一個(gè)陌生的傳染病，從1949年到現(xiàn)在臨診上一直有病例出現(xiàn)。之所以舊病新發(fā)并且來(lái)勢(shì)兇猛，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，甚至嚴(yán)重地威脅到人類的生命，筆者認(rèn)為主要原因是人們對(duì)豬鏈球菌病的預(yù)防不夠全面。豬鏈球菌是一種條件致病菌，所以外界環(huán)境的刺激是導(dǎo)致發(fā)病的一個(gè)重要的原因。事實(shí)上，幾乎所有的動(dòng)物疾病都有一個(gè)共同的發(fā)病原因，就是沒(méi)有做好飼養(yǎng)管理工作。這包括飼料質(zhì)量不佳，如飼料中存在黃曲霉毒素，會(huì)對(duì)肝臟造成嚴(yán)重的損害，動(dòng)物免疫力也就下降。還有環(huán)境消毒不徹底，畜舍擁擠，通風(fēng)不良，夏季溫度過(guò)高等也會(huì)導(dǎo)致發(fā)病率增加。免疫失敗的原因主要有豬藍(lán)耳病、豬圓環(huán)病、偽狂犬病等豬的免疫抑制病存在。豬在接種疫苗之前就患病，也是導(dǎo)致免疫失敗的重要原因。因此，只有綜合解決上述的非疫苗因素的問(wèn)題，再配合自家疫苗的免疫，才能減少或控制豬場(chǎng)鏈球菌病的發(fā)病率。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：劉晨晨 ，1995年-，女，籍貫： 河南省商丘市，河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，牧醫(yī)工程學(xué)院2015級(jí)動(dòng)植物檢疫（動(dòng)物檢疫）專業(yè)在讀本科生。