雙丹明目膠囊對糖尿病視網膜病變大鼠血糖 血脂及血液流變學的影響

符超君　凌艷君　顏家朝

〔摘要〕 目的 觀察雙丹明目膠囊對糖尿病視網膜病變（diabetic retinopathy， DR）大鼠血糖血脂及血液流變學的影響，探討其可能的治療機制。方法 SD大鼠經一次性尾靜脈注射STZ（50 mg/kg）誘導DR模型，隨機分為模型組，雙丹明目膠囊高、中、低組，導升明組，同時以正常大鼠為對照。連續干預30 d后，生化法檢測大鼠血糖、血脂水平，全自動血液流變快測儀檢測大鼠全血粘度（WBV）、血漿粘度（PV）、紅細胞沉降率（ESR）、紅細胞壓積（HCT）、纖維蛋白原（FIB）等血液流變指標。結果 與正常組比較，模型組大鼠血糖、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平均顯著升高（P<0.01），高密度脂蛋白（HDL-C）水平顯著下降（P<0.01），WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平均顯著升高（P<0.01或P<0.05）；雙丹明目膠囊干預后，模型大鼠血糖、TC、TG、LDL-C水平均下降（P<0.05），HDL-C上升（P<0.05），WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平均下降（P<0.05）。結論 雙丹明目膠囊治療DR的機制可能與有效改善DR大鼠血糖血脂紊亂、血液流變異常狀態有關。

〔關鍵詞〕 糖尿病視網膜病變；雙丹明目膠囊；血糖；血脂；血液流變學

〔中圖分類號〕R285.5；R774.1；R587.1 〔文獻標志碼〕A 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.05.001

Effects of Shuangdan Mingmu Capsule on Blood Glucose， Blood Lipid and Blood Rheology in Diabetic Retinopathy Rats

FU Chaojun1， LING Yanjun2， YAN Jiazhao1， ZHAO Yongwang1， LIU Zhengrong2， QIN Yuhui1*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China； 2. Hunan Academy of Chinese medicine， Changsha， Hunan 410006， China）

〔Abstract〕 Objective To observe the effects of Shuangdan Mingmu capsule on blood glucose， blood lipid and blood rheology， and to explore its possible mechanism of treatment. Methods SD rats were injected with STZ （50 mg / kg） into the tail vein to induce diabetic model with retinopathy. The rats were randomly divided into model group， high dose， medium dose and low dose of Shuangdan Mingmu capsule groups and positive drug group， normal rats as controls. After continuous administration for 30 days， the blood glucose and blood lipid of rats were measured by biochemical method. The hemorrheological indexes were tested such as whole blood viscosity （WBV）， plasma viscosity （PV）， erythrocyte sedimentation rate （ESR）， hematocrit （HCT） and fibrinogen （FIB）. Results Compared with the normal group， the levels of blood glucose， total cholesterol （TC）， triglyceride （TG） and low density lipoprotein （LDL-C） in model group increased significantly （P<0.01） and high-density lipoprotein （HDL-C） levels decreased significantly （P<0.01）. The levels of WBV， PV， ESR， HCT， FIB increased obviously （P<0.01 or P<0.05）. After administration of Shuangdan Mingmu capsule， blood glucose， TC， TG， LDL-C levels of model rats decreased （P<0.05）， HDL-C increased （P<0.05）， the levels of WBV， PV， ESR， HCT， FIB declined （P<0.05）. Conclusion The mechanism of Shuangdan Mingmu capsule in the treatment of DR might be related to the effective improvement of blood glucose and lipid disorders， and abnormal blood rheology in DR rats.

〔Keywords〕 diabetic retinopathy； Shuangdan Mingmu capsule； blood glucose； blood lipid； blood rheology

糖尿病視網膜病變（diabetic retinopathy， DR）是糖尿病最嚴重、發生率最高的并發癥之一，據報道，約20%～40%的糖尿病患者有不同程度的視網膜病變情況，且發生率隨著糖尿病病程的發展而明顯增高[1]。目前，DR的治療尚缺乏有效的藥物，較公認的治療藥物是西藥導升明，但考慮到其依賴性高、副作用較大等缺點以及中藥的優勢，尋找一種能有效控制DR發生發展的中藥復方具有重要的臨床價值。

雙丹明目膠囊是湖南中醫藥大學秦裕輝教授結合多年臨床經驗及現代研究成果而研發的國家準字號新藥（國藥準字Z20080062），主治肝腎陰虛、瘀血阻絡所致的糖尿病視網膜病變，經臨床驗證，其療效顯著，臨床使用安全[2-3]。臨床和實驗研究表明，雙丹明目膠囊能明顯改善DR患者視網膜病變狀況，降低DR模型大鼠視網膜中血管內皮生長因子（VEGF）表達，抑制微血管生成，減緩視網膜損傷[4-5]。然而，雙丹明目膠囊能否有效改善模型大鼠的血糖血脂紊亂情況以及血液流變狀態，尚未進行相關研究。本研究擬在前期基礎上，進一步以血糖、血脂及血液流變學指標為切入點，探討雙丹明目膠囊治療DR的療效，對于糖尿病微血管病變的臨床防治具有借鑒意義。

1 材料與方法

1.1 藥物

雙丹明目膠囊由女貞子、旱墨蓮、三七、山茱萸、山藥、牡丹皮、茯苓、紅土茯苓、牛膝、丹參、澤瀉11味藥材組成，飲片購自湖南上藥九旺醫藥有限公司。導升明（羥苯磺酸鈣）膠囊購自奧地利依比威藥品有限公司，批號：170603，制備藥物濃度為0.58 mg/mL。

1.2 實驗動物

SPF級雄性SD大鼠68只，體質量220～240 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物公司，生產許可證號為SCXK（湘）2013-0004，飼養于湖南省中醫藥研究院SPF級實驗動物中心。大鼠購入后先適應性喂養5 d，期間自由攝食飲水。

1.3 試劑與主要儀器

鏈脲佐菌素（STZ）購自美國Sigma公司；總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）試劑盒購自中生北控生物科技股份有限公司；纖維蛋白原含量測定試劑盒購自北京世帝科學儀器公司；血糖測量儀、血糖試紙購自美國Johnson公司；5417R低溫高速離心機購自德國Eppendorf公司；FASCO-3010D全自動血液流變快測儀購自瑞士Roche公司；MK3型酶標儀購自美國Thermo公司。

1.4 造模與干預

68只SD大鼠首先隨機分為正常組（10只）和糖尿病組（58只）。糖尿病組在高脂灌胃14 d后，采用一次性尾靜脈注射STZ（50 mg/kg）方法建立糖尿病模型，于STZ注射72 h后測定所有大鼠空腹血糖值。根據血糖測定結果，選取≥16.70 mmol/L的大鼠作為糖尿病模型大鼠。繼續飼養一周后，對所有糖尿病大鼠進行眼底熒光血管造影，選取視網膜具有微血管病變的大鼠視為DR模型成功（48只）。然后，選取45只DR大鼠隨機分為模型組，雙丹明目膠囊高、中、低劑量組，導升明組，每組9只。雙丹明目膠囊高、中、低劑量組分別對應臨床等效劑量的2倍、1倍、0.5倍，對應藥物劑量分別為11.2、5.6、2.8 g/kg，導升明組等效給藥劑量為5.8 mg/kg，正常組與模型組均給予等容量的蒸餾水，持續給藥30 d。末次給藥后，所有動物進行血糖值測定后麻醉大鼠，腹主動脈取血保存于抗凝管中。

1.5 空腹血糖值測定

測定前所有大鼠禁食6 h，采用剪尾取血法剪取大鼠尾根部動脈血，血糖儀測定各組大鼠的空腹血糖值。

1.6 血脂四項檢測

取抗凝管中的血液，于3 000 r/min離心10 min后，取上層血液即為大鼠血漿樣本，然后嚴格按照試劑盒說明書檢測血漿中TC、TG、HDL-C、LDL-C的含量。

1.7 血液流變學指標檢測

采用血液粘度測試儀，取切速1 s-1，自動測定全血粘度（WBV）值；WBV測試完成后，全血于3 000 r/min離心10 min吸取血漿，取切速200 s-1，測定血漿粘度（PV）值；另吸取1 mL全血置于壓積管中靜置1 h讀數記錄紅細胞沉降率（ESR）值；ESR值記錄完成后，于3 000 r/min離心30 min，讀數記錄紅細胞壓積（HCT）；血漿纖維蛋白原（FIB）的測定嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.8 數據分析處理

采用SPSS 17.0軟件進行數據分析，計量資料用“x±s”表示，組間差異采用單因素方差分析（Oneway-ANOVA），t檢驗，雙側檢驗，以α=0.05作為檢驗水準。

2 結果

2.1 雙丹明目膠囊對DR大鼠血糖、血脂四項的影響

與正常組比較，模型組大鼠血糖值、TC、TG、

LDL-C水平均顯著升高（P<0.01），HDL-C水平顯著下降（P<0.01）；與模型組比較，雙丹明目膠囊高劑量組大鼠血糖值、TC、TG、LDL-C水平均有不同程度的下降，HDL-C水平上升，差異均有統計學意義（P<0.05），且中劑量組也有一定的降血糖效果（P<0.05）；然而，導升明組大鼠血糖值、TC、TG、HDL-C、LDL-C水平均與模型大鼠差異無統計學意義（P>0.05）。結果見表1。

2.2 雙丹明目膠囊對DR大鼠血液流變學指標的影響

與正常組比較，DR模型組大鼠WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平均顯著升高（P<0.01或P<0.05）；在給予高劑量的雙丹明目膠囊干預后，大鼠上述指標均得到不同程度的逆轉（P<0.05）；此外，導升明也有改善模型大鼠血液流變狀態的功效（P<0.01或P<0.05）。結果見表2。

3 討論

DR是糖尿病微血管病變中最常見、也是最嚴重的并發癥之一，臨床多以視網膜微血管生成、出血、水腫、滲出等為主要特征[6]。DR的中醫病機可理解為肝腎陰虛、瘀血阻絡，其中陰虛為本、腎虛為根、血瘀為標。中醫治療DR以滋陰、補腎、活血為基本法則，雙丹明目膠囊則是基于此理法并結合多年臨床經驗成方，臨床療效顯著。前期研究表明，雙丹明目膠囊能減緩DR患者視網膜病變程度，改善DR大鼠視網膜微血管損傷，通過抑制視網膜VEGF表達而減少微血管的生成，保護視網膜組織。本研究在前期臨床和實驗基礎上，以DR模型大鼠為研究對象，探討雙丹明目膠囊對DR大鼠血糖血脂及血液流變學的影響。

血糖值作為糖尿病的核心指標，與糖尿病患者視網膜病變的發生率密切相關，DR多發生于長時間未能有效控制血糖值的情況下[7]。脂類代謝紊亂是導致胰島素抵抗產生的重要原因，是2型糖尿病及其并發癥后期發生發展至不可控的關鍵因素[8]。血糖血脂的紊亂程度是影響糖尿病并發癥，尤其是微血管并發癥治療的重要阻力。然而，治療DR的臨床首選藥物導升明無降糖降脂效果，必須與其他西藥聯用以控制血糖值，而這加重了藥物的依賴性及潛在的風險性[9]。中藥立足于整體，能多環節、多途徑作用于疾病，改善患者依從性，增加用藥安全。本研究結果確證了導升明無降糖降脂作用，并發現雙丹明目膠囊能有效改善DR大鼠的血糖血脂紊亂狀態，具有獨特的治療優勢。

DR的發生發展是多因素協同作用的結果，研究表明，糖尿病患者普遍存在血液流變學指標的改變，而DR的發生與血液流變性紊亂密切相關[10]。糖尿病患者紅細胞聚集性增強，壓積增大，易導致視網膜微血管中微血栓形成，阻塞微血管并形成微血管瘤，進一步加重視網膜組織缺血缺氧，加速疾病的惡化[11]。糾正患者血液流變性異常可顯著降低DR的發生率，是DR治療的靶點之一[12]。本實驗結果表明，雙丹明目膠囊和導升明均能顯著降低DR大鼠WBV、PV、ESR、HCT、FIB水平，降低血液粘度，抑制紅細胞聚集，其治療作用可能是通過改善大鼠血液流變異常狀態實現的。

綜上，本研究發現雙丹明目膠囊能有效改善DR疾病下血糖血脂紊亂、血液流變異常狀態，其可能與雙丹明目膠囊保護視網膜組織、治療DR的機制有關。本研究對于糖尿病微血管并發癥的中醫藥防治有一定的借鑒價值，但藥物更多深入的療效機制仍有待進一步研究。

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