蛭龍活血通瘀膠囊對氯化鋰－匹羅卡品致癇大鼠海馬組織炎性因子表達的影響*

吳 英 ，鄭 直 ，劉 麗 ，趙立志

（1.西南醫科大學附屬中醫醫院，四川 瀘州 646000； 2.四川省瀘州市人民醫院，四川 瀘州 646000）

癲癇（Epilepsy）是腦部神經元高度同步化異常放電所致的一組中樞神經系統功能失常綜合征，發病率為5‰～8‰。70% ～80%的患者服用抗癲癇藥物后可控制發作，但約30%患者對抗癲癇藥物耐藥[1]。中藥制劑蛭龍活血通瘀膠囊在前期動物及臨床實驗研究中，已證實具有保護腦細胞、改善神經功能、減少神經細胞凋亡、改善血液流變性等作用[2－4]。本研究中通過觀察氯化鋰－匹羅卡品（毛果蕓香堿）致癇大鼠腦組織中海馬區細胞因子的變化，探討蛭龍活血通瘀膠囊抗癲癇的機制。

1 材料與方法

1.1 主要藥物及試劑

蛭龍活血通瘀膠囊（西南醫科大學附屬中醫醫院制劑室，批號為川藥Z20070528）；丙戊酸鈉片（湖南省湘中制藥有限公司，國藥準字H43020874，規格為每片0.2 g）；鹽酸匹羅卡品（上海邁瑞爾化學技術有限公司，批號為1538902CAS，規格為每瓶5 g）；氯化鋰（北京智杰方遠科技有限公司，批號為B00199301，規格為每瓶100 g）；硫酸阿托品（遂成藥業股份有限公司，國藥準字H41021257，規格為每瓶 0.5 mg）。酶聯免疫吸附（ELISA）試劑盒（上海邦奕生物科技有限公司）。

1.2 實驗動物與分組

成年健康雄性SD大鼠48只，體質量200～250 g，由西南醫科大學實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK（川）2013－063，室溫、普通飼料喂養。隨機分為對照組、癲癇組、蛭龍活血組、丙戊酸鈉組，各12只。

1.3 造模方法

氯化鋰及匹羅卡品溶于生理鹽水，質量濃度分別為42.39 g／L和10 g／L。癲癇模型大鼠首日腹腔注射氯化鋰（127 mg／kg），24 h后予以腹腔注射匹羅卡品（30 mg／kg），匹羅卡品注射前 30 min，予硫酸阿托品（1 mg／kg）腹腔注射，以減輕匹羅卡品的不良反應。對照組：僅腹腔注射等量生理鹽水。蛭龍活血組：蛭龍活血通瘀膠囊溶于生理鹽水中，制備成100 g／L的母液，使用時按照0.8 mg／（kg·d）劑量腹腔注射給藥，大鼠癲癇發作開始后2 h予以第1次給藥，每24 h重復腹腔注射等量藥物1次，連續給藥3次。丙戊酸鈉組：將200 mg丙戊酸鈉加蒸餾水溶解至質量濃度為20 g／L[5]，大鼠癲癇發作開始后2 h第1次腹腔注射給藥，每24 h重復腹腔注射等量藥物1次，連續給藥3次。根據Racine分級標準[6]，密切觀察發作情況，造模成功標準為發作達Ⅳ～Ⅴ級。若大鼠在造模過程中死亡，則按隨機原則補足數量。

1.4 行為觀察及指標檢測方法

行為學觀察：造模成功后使用視頻監測錄像記錄存活癲癇大鼠行為，用苦味酸分別標記大鼠以區別。于癲癇發作開始至第3次治療結束，觀察大鼠癲癇發作的時間、形式、級別、持續時間及次數。

腦電圖變化：將大鼠連接電極，置透明玻璃籠，籠子放置于屏蔽室，以避免噪聲、靜電及電磁信號的干擾，記錄并分析腦電波形。

炎性因子：癲癇后72 h，用水合氯醛深度麻醉大鼠至對疼痛刺激無反應，0℃生理鹽水50mL心臟灌注至流出液清涼，斷頭處死。取大鼠海馬組織加入蛋白裂解液，勻漿收集上清液，腫瘤壞死因子－α（TNF－α）、白細胞介素1b（IL－1b）檢測嚴格按照ELISA試劑盒說明書步驟操作。

1.5 統計學處理

應用SPSS17.0統計學軟件分析。計量資料以中位數±四分位數間距表示，采用秩和檢驗，等級資料的統計分析采用非參數秩和檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

結果見表1和表2。

表1 各組大鼠癲癇發作程度比較（只，n＝12）

表2 各組大鼠海馬組織中炎性因子水平比較（± s，pg／mL，n ＝12）

表2 各組大鼠海馬組織中炎性因子水平比較（± s，pg／mL，n ＝12）

注：與對照組比較，▲P＜0.01，★P＜0.05；與癲癇組比較，●P ＜0.05。

組別對照組癲癇組蛭龍活血組丙戊酸鈉組TNF－α 679.86±25.92 759.73±22.53▲718.83±23.01★●721.14±22.87★●IL－1b 269.48±31.61 425.23±31.03▲351.04±28.46★●349.31±29.03★●

3 討論

目前，越來越多的證據支持炎癥和免疫反應在癲癇產生的病理生理機制中起重要作用，且癲癇持續狀態所致腦損傷引起的炎性反應應答與癲癇復發有密切關系[7－9]。炎性反應在腦組織癲癇病灶形成中的作用，已在顳葉癲癇耐藥和灰質發育異常有關的癲癇患者中體現[10－14]。動物研究證實，炎性介質包括細胞因子、補體因子等參與癲癇發作，且干預這些分子或其相應的受體可減輕癲癇發作的頻率和程度[15]。Gomes等[16]研究發現，長春西汀和卡馬西平的抗癲癇機制可能與減少大鼠海馬組織內IL－1b和TNF－α表達有關。

本研究結果發現，蛭龍活血通瘀膠囊預處理癲癇大鼠可減少癲癇發作次數和發作程度，對控制癲癇發作有較好的療效。肖倩等[17]研究發現，炎性因子IL－1b和TNF－α水平在癲癇發作后6 h內快速升高。本研究中ELISA檢測結果也顯示，蛭龍活血組大鼠海馬組織中TNF－α和IL－1b表達量較癲癇組明顯下降。

綜上所述，蛭龍活血通瘀膠囊可能通過抑制炎性因子TNF－α和IL－1b的產生，抑制神經元變性、興奮性增高及血腦屏障破壞，從而控制癲癇發作。