高效液相色譜法測定毛黃堇不同部位脫氫卡維丁含量

吳 佳

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121）

毛黃堇 Corydalistomentella Franch.系罌粟科紫堇屬植物，產于湖北西部、四川東部至南部、重慶、陜西南部，又名干巖矸，全草皆可入藥，為民間貴重中草藥[1－2]。其具有抗菌、消炎、鎮痛和強安定作用，主治瘡癰腫毒、肝炎、肝硬化、肝癌等癥[3－4]。毛黃堇與石生黃堇?5－6?均含有明確的藥理活性成分脫氫卡維丁，且含量較高[7]。本研究中建立了測定毛黃堇中脫氫卡維丁含量的高效液相色譜（HPLC）法，考慮毛黃堇為全草入藥，各部位之間的脫氫卡維丁含量可能存在差異[5]，故對其不同部位葉、葉柄及根莖進行了定量分析。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（包括四元泵、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器，Agilent 1260工作站），BP221S型、MSA225S－100－DU 型電子天平（德國賽多利斯公司）；KQ－500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；烘箱（德國Binder公司）。

1.2 試藥

脫氫卡維丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111732－200904）；毛黃堇由重慶市藥物種植研究所提供，采集地為南川金佛山，由本院蔣萬浪主任中藥師鑒定為正品；乙腈為色譜純，二乙胺、甲醇、鹽酸、磷酸二氫鉀、磷酸均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

取五氧化二磷中減壓干燥至恒重的脫氫卡維丁對照品適量，精密稱定，加1%鹽酸甲醇溶液制成每1 mL含0.200 4 mg的對照品溶液[8]。取本品粉末（過2號篩）約0.2 g，精密稱定，至具塞錐形瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液50 mL，稱定質量，超聲處理（功率為250 W，頻率為40 kHz）30 min，置室溫，用甲醇補足減失的質量，搖勻，經0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：磷酸鹽緩沖溶液（每1 L含20 mmol磷酸二氫鉀，10 mmol二乙胺，0.1%磷酸）－乙腈（72 ∶28）；流速：1 mL ／min；柱溫：35℃；檢測波長：347 nm；進樣量：10μL。在此色譜條件下，分別進樣對照品溶液和供試品溶液各10μL，色譜峰峰形良好，達到較理想的分離結果，理論板數按脫氫卡維丁峰計算大于4 000，具有較好的專屬性，分析條件可行。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取對照品貯備液0.2，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0，12.0 μL，按擬訂色譜條件進樣測定。以質量濃度的對數（X）和對應峰面積的對數（Y）計算回歸方程，得 Y＝2 833.6 X＋99.236，r＝0.999 1（n＝7），線性范圍為 0.040 08～2.404 80μg。

精密度試驗：取同一對照品溶液，按擬訂色譜條件重復進樣6次。結果的 RSD為0.32%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，室溫下放置，分別于 0，2，4，8，12 h 時按擬訂色譜條件進樣測定。結果的RSD為0.9%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定。結果的 RSD為1.8%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的毛黃堇（3.028 2 mg／g，未除水分）9份，精密稱定0.1 g，分別精密加入低、中、高濃度的對照品貯備液，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

將毛黃堇全草進行部位拆分，分別得葉、葉柄、根及根莖3個部位，將上述3份樣品置硅膠中干燥48 h，取上述3份樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，同時按2015年版《中國藥典（四部）》通則0832第二法測定水分。結果見表2。

表1 脫氫卡維丁加樣回收試驗結果（n＝9）

表2 樣品含量測定結果（n＝3）

3 討論

曾嘗試用以下2種溶劑制備供試品溶液：1%鹽酸甲醇溶液；流動相溶液[磷酸鹽緩沖溶液（每1 L含20 mmol磷酸二氫鉀，10 mmol二乙胺，0.1%磷酸）－乙腈（72∶28）][9]。結果采用第1種溶劑，有效成分提取更完全，且雜質較少。試驗了0.05 mol／L磷酸二氫鉀溶液－乙腈的流動相系統[10]，但脫氫卡維丁峰對稱性較差，易拖尾。

經過對脫氫卡維丁的二極管陣列掃描，發現有2個較大的紫外吸收峰，最強吸收峰在274 nm波長處[11]，次吸收峰在347 nm波長處。但采用274 nm為檢測波長時雜質干擾較多，而選用347 nm作為檢測波長時干擾較小[12－13]，故最終選用347 nm作為檢測波長。

綜上所述，通過對毛黃堇植物各部位脫氫卡維丁含量的考察發現，在根及根莖中脫氫卡維丁的含量最高，葉柄次之，葉中含量最低，僅為根及根莖中的1／10。根據上述試驗，不僅掌握了毛黃堇中脫氫卡維丁的含量分布，更為制訂毛黃堇質量標準及限度提供了參考依據。HPLC法測定毛黃堇中脫氫卡維丁含量，操作簡便，結果可靠，色譜圖可反映毛黃堇的特征，對其質量控制具有重要意義。