門靜脈高壓癥大鼠脾臟大小與脾功能亢進關系的初步研究

楊 軍,李向農

(徐州醫科大學附屬醫院普通外科， 江蘇徐州 221002)

脾腫大、脾功能亢進是肝硬化門靜脈高壓癥的常見臨床特點，表現為一系或多系外周血細胞減少，以血小板減少為主并較早出現。脾切除可使大部分患者血細胞成分正常或接近正常,癥狀緩解。然而，肝硬化門靜脈高壓癥時脾功能亢進的原因，尤其是脾臟大小、門靜脈壓力與外周血細胞改變之間的關系尚不清楚。明確脾功能亢進的發病機制是進行有效治療的關鍵。本實驗將對門靜脈高壓癥大鼠門靜脈壓力、脾臟大小、肝功能與外周血細胞減少之間的關系進行初步探討。

1 材料與方法

1.1動物分組 健康雄性SD大鼠28只，體質量200～320 g，由徐州醫學院實驗動物中心提供。稱體質量并隨機分成3組：肝硬化組(A組)10只、門靜脈縮窄組(B組)10只、正常對照組(C組)8只。

1.2動物模型建立 (1)肝硬化模型：A組以0.03%硫代乙酰胺(TAA)作為飲用水初始濃度,飼以顆粒飼料，每周根據體質量變化調整飲用水TAA濃度，共6周[1]。(2)門靜脈縮窄模型：B組正常飼喂3周后，禁食一夜,腹部脫毛。以3%戊巴比妥鈉每千克體質量1 mL腹腔注射麻醉，消毒、鋪巾，自劍突向下作2 cm腹部正中切口,暴露門靜脈主干,從脾靜脈匯入門靜脈處上方將門靜脈主干分離,直至肝門處。以16 G鈍頭直針平行置于門靜脈主干旁,從門靜脈深面穿過兩道3-0絲線,將門靜脈主干與鈍頭針一起結扎,緩慢旋轉抽出鈍頭針,關腹，繼續飼喂3周[2]。C組：正常飼喂6周。飼喂過程中觀察有無肝性腦病出現。

1.3實驗方法 6周后，全部大鼠禁食一夜并稱體質量、脫毛。麻醉后開腹肉眼觀察肝脾形態、腹水量等變化。采用5號頭皮針穿刺脾實質和門靜脈主干，水柱法測量脾髓壓力(SP,cm H2O)和門靜脈壓力(PVP,cm H2O)。抽取下腔靜脈血2～3 mL，分別置入普通試管和含有EDTA的試管中，使用全自動分析儀測定肝功能、凝血酶原時間(s)、血紅蛋白(Hb,g/L)、白細胞(WBC,×109/L)、血小板(PLT,×109/L)等。切除肝脾，稱脾質量。脾臟指數(SI)按公式計算[3]：SI=脾臟質量(mg)/大鼠體質量(g)。肝組織切塊約為15 mm×15 mm×2 mm,HE染色,常規病理檢查。

2 結 果

2.13組大鼠SI、PVP、SP、WBC、PLT、Hb計數結果比較 見表1。

2.23組大鼠PVP、SP、SI與Hb、WBC、PLT的Spearman相關分析結果 見表2。

表1 3組大鼠SI、PVP、SP和外周血細胞計數結果比較

注：與C組比較，#P<0.05;與B組比較，*P<0.05

表2 3組大鼠肝功能、腹水、肝性腦病和凝血酶原時間結果比較

注：與C組比較，#P<0.05;與B組比較，*P<0.05；-表示無數據

2.33組大鼠PVP、SP、SI與外周血細胞的相關性 A組大鼠有2只于實驗第4周時死亡，剩余8只肝臟外觀和病理切片呈肝硬化表現，肝功能也出現不同程度異常。B組大鼠無死亡，肝臟外觀、病理切片和肝功能與C組相似。根據肝功能、凝血酶原時間結果、腹水量和有無肝性腦病等對大鼠肝功能進行Child-Push分級評分[4]。見表3和圖1。

表3 3組大鼠PVP、SP、SI與外周血細胞的相關性

圖1 PLT計數與SI之間的擬合曲線

3 討 論

本實驗結果表明，A組和B組大鼠的SI、PVP、SP相似并明顯高于C組(P<0.05)；血液學改變方面，A組與另外2組之間PLT計數比較，差異有統計學意義(P<0.05)，而3組之間Hb、WBC計數比較，差異無統計學意義(P>0.05)；下降明顯的PLT計數與SI全變量回歸分析結果：PLT=839.14―16.142SI，P=0.71。PLT與SI擬合曲線(圖1)提示PLT減少與脾腫大無直線相關關系。

血液異常是肝臟病變的常見臨床表現,包括血液成分、細胞形態、血漿總容量的改變。肝硬化門靜脈高壓可導致脾腫大，而脾腫大被認為可聚集并破壞血液有形成分，是引起血細胞減少的主要機制[5]。可能與以下幾個過程有關[6]:(1)脾臟對血細胞過分阻留和吞噬破壞。(2)脾臟可能分泌某種已知或尚未證實的“激素”“細胞因子”等,抑制骨髓。(3)脾臟產生某種自身抗體,破壞自身血細胞。(4)脾功能亢進時血液稀釋造成循環血細胞減少。各過程在脾功能亢進發生中所起的作用因引起脾功能亢進的原發病不同而有差異。多年來一直采用切除脾臟治療脾功能亢進，緩解門靜脈高壓，但臨床有時發現切除脾臟后，血細胞計數并未完全恢復正常，因此，脾腫大與外周血細胞減少的關系尚不明確[7]。

本實驗結果顯示，肝硬化、門靜脈縮窄均可造成不同程度的PVP升高、SP升高和脾腫大，血液系統改變出現較早的是PLT減少，這與其他研究結果一致[8]。但本實驗發現脾腫大與血細胞計數減少無明顯相關關系，而肝功能可能在血液系統改變方面發揮著一定的作用。因此，本研究認為脾腫大可能僅是引起血細胞減少的因素之一，肝功能和其他體液因素也可能發揮重要作用。脾切除術對緩解肝硬化門靜脈高壓時脾功能亢進的作用還有待于進一步認識。