卵巢子宮內膜異位癥女性AMH與免疫水平的研究

季沈杰

(江蘇省啟東市人民醫院檢驗科 226200)

子宮內膜異位癥(EMT)又叫內異癥，主要由于具有生長功能的異位子宮內膜所致，是婦科一種常見的良性疾病[1-2]。其發病率在育齡女性中高達30%，且近年來逐漸上升[3-4]。目前EMT的發病機制說法不一，最經典的理論為1921年SAMPSON提出的經血逆流種植學說理論。該理論解釋，異位的內膜源于子宮內膜組織，而這些組織通過經血逆流、血管播散、淋巴傳播、醫源性種植等方式轉移到宮腔外各部位再生長[5]。

雖然病理組織學表明EMT是一種良性疾病，但也存在浸潤、增生、轉移等不良風險，所以揭示EMT的發病機制是為了更好地進行預防和治療[6]。較多研究者發現EMT患者的免疫水平可能會改變，但目前無系統研究。現探討EMT患者的免疫水平，并進行統計和研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年12月至2017年6月該院收治的EMT患者49例作為觀察組，均經病理學檢查確證，按照修正的AFS分期標準，其中Ⅰ～Ⅱ期為輕度，20例患者，Ⅲ～Ⅳ期為重度，29例患者。對照組為同期住院因輸卵管因素不孕行腹腔鏡手術患者48例。2組患者的年齡、產次等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

表1 2組患者一般資料結果比較

注：―表示無數據

1.2納入與排除標準 納入標準：育齡期女性，月經規律；術前未接受雌、孕激素治療；取得患者及家屬同意，并簽署知情同意書者。排除標準：合并子宮腺肌癥患者；結核性疾病、免疫性疾病及代謝性疾病患者。

1.3標本采集 分別取同一患者標本，同時進行相應處理，術前晨起采集患者外周血、靜脈血，使用肝素鈉管采血，手術直視下采集無血液污染的腹腔液，采集標本應嚴格按照無菌操作進行，避免影響檢測的準確性。

1.4觀察指標及操作方法 (1)抗苗勒管激素(AMH)：酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法(法國Immunotech Beckman Coulter公司)，測定范圍0.06～18.0 ng/mL，相關系數(r)≥0.990 0。(2)輔助性T細胞17 (Th17)及調節性T細胞(Treg)細胞所占比例：細胞流式儀[賽百慷(上海)生物技術股份有限公司]，取全血100 μL加入CD3 FITC、CD8 APC-CY7、CD127 PEMAB抗體各10 μL，避光孵育20 min，溶解紅細胞，固定、破膜50 min，其次加入白細胞介素-17(IL-17)ALEXA647標記的抗體10 μL，繼續避光孵育50 min，洗滌細胞后在PBS液重懸上機檢測Th17及Treg細胞占CD4細胞比例。(3)血清和腹腔液白細胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平：分別取外周血及腹腔液3～5 mL，室溫下3 000 r/min離心10 min，采用ELISA法(上海酶研生物技術有限公司)，按照說明書一次性檢測血清及腹腔液IL-6和TNF-α水平。

2 結 果

2.12組患者血清AMH水平結果比較 不同組別不同年齡段EMT患者的血清AMH水平不同，隨年齡增長其下降。2組AMH水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組患者AMH水平結果比較

注：與對照組比較,bP<0.05

2.22組患者免疫細胞Th17及Treg所占CD4+T細胞比例結果比較 觀察組患者Th17所占CD4+T細胞比例高于對照組，Treg所占CD4+T細胞比例低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 2組患者外周血Th17及CD4+T細胞比例

注：與對照組比較,bP<0.05

2.32組患者血清及腹腔液IL-6、TNF-α水平結果比較 觀察組血清及腹腔液IL-6、TNF-α水平均高于對照組，且Ⅲ～Ⅳ期患者水平高于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 2組患者血清和腹腔液IL-6、TNF-α水平結果比較

注：與對照組比較,bP<0.05;與對照組比較，cP<0.01

3 討 論

近年來，許多研究表明免疫因素參與了EMT的發病，患者血清中很多細胞因子發生了變化，并在疾病中發揮了作用，如AMH、Th17、Treg、IL-6、TNF-α等[7]。AMH是一種新型的、能預測卵巢儲備功能的指標，許多研究通過對AMH指標評估其對EMT的影響。有研究報道，年齡和血清AMH水平密切相關，隨年齡增加患者AMH基礎水平逐漸降低[8]。本研究結果顯示，觀察組Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者血清AMH水平顯著低于對照組(P<0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期患者水平低于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)。同時隨年齡的增長患者AMH水平會降低，說明EMT患者AMH水平會降低，同時年齡越大AMH水平越低。

Th17是新發現的一種能夠分泌IL-17的T細胞亞群，在機體防御反應和自身免疫性疾病中具有重要的意義。Th17的特異轉錄因子為ROR-γt，參與機體炎性反應和適應性免疫反應過程，并在對抗胞外特定病原體上發揮重要作用[8-9]。Treg是一種控制體內自身免疫反應性的T細胞亞群,主要分泌IL-10、轉化生長因子β(TGF-β)。Treg的特異轉錄因子為FoxP3，參與體內自身抗原耐受，保持機體免疫平衡，進而抑制機體免疫疾病的發生。當機體Th17與Treg之間的動態平衡打破，導致自身免疫疾病[10]。本研究結果表明，觀察組患者Th17所占CD4+T細胞比例高于對照組(P<0.05)，Treg所占CD4+T細胞比例低于對照組(P<0.05)，且Th17/Treg觀察組顯著高于對照組(P<0.05)，說明EMT患者Th17/Treg比例更大，更易使機體免疫失衡。

IL-6是參與造血、免疫應答的調節及炎性等反應的細胞因子，其能活化T細胞，使B細胞前體成為產生抗體的細胞，能促進原始骨髓源細胞的生長和分化，增強自然殺傷細胞的裂解功能，并在內分泌和免疫系統中發揮重要作用[11-12]。TNF-α是一種由激活的巨噬細胞產生的、能抑制成刺激破骨細胞和骨細胞的細胞因子。具有殺傷腫瘤細胞、調節代謝，同時還能對女性經期排卵有所調節。另一方面，有研究證實TNF-α通過降低芳香化酶活性抑制雌二醇及酮的生成，影響卵泡發育[13]。本研究檢測2組患者IL-6和TNF-α水平，觀察組患者血清、腹腔液IL-6、TNF-α水平均高于對照組(P<0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期患者IL-6、TNF-α水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，說明EMT患者血清、腹腔液IL-6、TNF-α水平升高，且EMT后期較前期升高。

綜上所述，EMT患者機體AMH水平隨年齡增長逐漸下降，免疫調節細胞Th17及Treg存在紊亂現象。