臨床生化檢驗中改良終點法的研究應用

李國強,屈學斌

(廣東省廣州市番禺區中醫院檢驗科 511400)

臨床生化檢驗作為臨床檢驗中最常見的檢查項目之一，其結果能為許多疾病的臨床診斷及治療提供具有較高價值的參考依據[1]。臨床生化檢驗的方法中，終點法的應用非常普遍，原始終點法主要通過手工完成操作，不僅操作麻煩、耗時，且會影響檢測結果的準確性[2]。為了獲得更好的檢驗結果，現對原始終點法進行改良，并將其應用于臨床生化檢驗中，臨床實踐表明，改良終點法的檢測效果顯著。本研究對比分析改良終點法與原始終點法在臨床生化檢驗中的應用價值，評估改良終點法的臨床優勢。報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 100例血清標本均為該院患者檢驗標本，符合質量要求，無溶血、脂血等不良情況。試劑盒選用液體單試劑型葡萄糖，規格為111 mmol/L，由北京科美東雅生物技術有限公司提供。檢測儀器為日立7180全自動生化分析儀。

1.2方法

1.2.1線性濃度評價 參照美國國家臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)制定的評價方案，將液體單試劑型葡萄糖加入血清基質中，配制濃度為29.96 mmol/L的5號高值標本與濃度為2.59 mmol/L的1號低值標本，將其混勻，配制2～4號標本，5號高值標本與1號低值標本的比例依次為3∶1、2∶2、1∶3，其濃度為5號高值標本與1號低值標本總和與其體積的比值[3]。

1.2.2相關性檢驗 血清標本進行定標，室內質量控制在控。原始終點法的測光點是33，線性范圍是0～16 mmol/L，樣品量4 μL，反應方向為上升，波長505 nm，試劑量R1是300 μL，單點定標是1-point。改良終點法的測光點是33，線性范圍是0～20 mmol/L，樣品量2 μL，反應方向為上升，波長505 nm，試劑量R1是150 μL，單點定標是1-point。根據NCCLS方法，將100例血清標本中的葡萄糖濃度分為高、中、低3個級別，按照葡萄糖濃度從小至大的序列進行終點法檢測，再從大至小進行第2次終點法檢測，最終結果取2次檢測結果的平均值。選取100例標本，連續監測10 d，運用配對χ2檢驗與直線回歸分析其檢測結果。

1.2.3精密度檢測 參照NCCLS方法進行精密度計算，取出正常濃度與異常濃度2例質控血清，參照說明書進行復溶，分裝于塑料管中，每支250 μL，封閉管口并置于―20 ℃冷凍封存，使用前后將其融化至室溫，所有質控血清使用期間均行2例檢測，并定時、定點測試，1 d 2批，上、下午各1次，連續監測10 d。監測期間室內質控在控，計算其批內的不精密度，并計算總不精密度。

2 結 果

2.12種方法線性濃度結果比較 原始終點法的線性回歸方程：Y=1.440 4X―2.939 7，r=0.979 1，改良終點法的線性回歸方程：Y=1.070 5X―0.218 3，r=0.998 2；低、中濃度下2種檢驗方法的線性濃度均良好，差異無統計學意義(P>0.05)；高濃度下改良終點法的線性濃度檢測范圍明顯大于原始終點法，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2種方法線性濃度檢測結果比較(mmol/L)

2.2相關性分析 回歸方程：Y=1.011 2X―0.038 2，r=0.999 2(n=100)，2種方法檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3精密度結果比較 正常濃度下，改良終點法的批內CV、總CV均明顯高于原始終點法，差異有統計學意義(P<0.05)；異常濃度下，改良終點法的批內CV、總CV均明顯低于原始終點法，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2種方法的精密度結果比較

注：與原始終點法正常濃度比較，*P<0.05；與原始終點法異常濃度比較，#P<0.05

3 討 論

終點法檢驗期間，通過把標本和試劑進行混勻，一定時間后，當反應獲得平衡則為終點，此時可獲得相應的呈色反應[4]。反應平穩后，先進行吸光度檢測，再根據其數值進行計算，能獲得較準確的標本濃度。從理論上分析，檢測期間標本會通過反應出現變化，慢慢達到反應終點，但從本質上分析，標本并未出現變化，而是和產物之間維持平穩的化學狀態[5]。從吸光度方面進行分析，到達反應終點會獲得平穩的反應時，吸光度則達到平穩狀態，因此不會再出現變化。

臨床生化檢驗過程中，葡萄糖氧化酶和總蛋白的檢測最常見，且具有一定的代表性。原始終點法一般通過手工操作完成檢測，改良終點法參照原始終點法的檢測原理，在保證標本與試劑配比保持平衡的前提下，通過減半混合標本與試劑量，于終點前將等量的水加入其中并進行混勻稀釋，進而檢測吸光度；當加入第2、3試劑時，全自動生化分析儀檢測可使單試劑終點法與雙試劑終點法之間進行轉換[6]。隨著全自動生化分析儀在臨床生化檢驗中的普遍運用，生化分析的準確率逐漸提高，智能化、微量化越來越明顯，不僅縮短檢測時間，也極大地減少了試劑成本[7]。

本研究運用改良終點法進行臨床生化檢驗時，室內質控在控，也對室間質量進行綜合評價，結果均較為理想，檢驗過程中無需稀釋高濃度標本，便可獲得較寬的線性濃度范圍[8]。本研究比較2種方法在臨床生化檢驗的應用效果，線性濃度結果顯示，低、中濃度下2種檢驗方法的線性濃度均良好，差異無統計學意義(P>0.05)，而高濃度下改良終點法的線性濃度檢測范圍明顯大于原始終點法，差異有統計學意義(P<0.05)，提示低、中濃度下2種方法檢測均可獲得良好效果，而高濃度下改良終點法的檢測效果明顯優于原始終點法。相關性分析結果表明，2種方法的檢測結果相近。精密度分析說明，正常濃度下，改良終點法的批內CV、總CV均明顯高于原始終點法(P<0.05)，異常濃度下，改良終點法的批內CV、總CV均明顯低于原始終點法(P<0.05)，提示改良終點法在臨床生化檢驗中的精密度高于原始終點法。

綜上所述，低、中濃度標本的臨床生化檢驗，改良終點法與原始終點法均可獲得良好的效果，而高濃度標本的臨床生化檢驗，改良終點法的線性濃度檢測范圍明顯加大，精密度顯著提高，所以改良終點法值得在臨床生化檢驗中推廣運用。