龜甲膠的現代研究進展

石萍 魯增輝 游華建 陳仕江

【摘 要】 龜甲膠是我國名貴中藥，具有滋陰、養血、止血的功效。目前，國內對龜甲膠的研究十分匱乏，該研究通過查閱近15年有關龜甲膠研究報道，從龜甲膠的化學成分、藥理作用、臨床、真偽鑒定及質量控制研究等方面進行綜述。

【關鍵詞】 龜甲膠；藥理作用；質量控制

【中圖分類號】R282.74 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2018）02-0059-04

Abstract：Testudinis Carapacis et Plastri Colla（TCPC）， an expensive and good kind of Chinese medicine for nourishing yin， nourishing blood and hemostasis， is less studied. The paper summarizes the research development of TCPC about chemical composition， pharmacology， clinic， authenticity and quality control in the past 15 years. The review can provide reference information and ideas for further research and development of TCPC.

Keywords：TCPC； Pharmacology； Quality Control

龜甲膠（Testudinis Carapacis et Plastri Colla，TCPC）為龜科動物烏龜Chinemys reevesii（Gray）的背甲和腹甲經過水煎煮、濃縮而制成的固體膠，歷版《中國藥典》均有收載，為中國名貴中藥，始載于《本草崇源》，屬甲膠范疇，龜甲膠性涼，味咸、甘，歸肝、腎、心經，具有滋陰，養血止血之功效，主治陰虛潮熱、骨蒸盜汗、腰膝酸軟、血虛萎黃、崩漏帶下等[1]。根據歷代本草記載，龜甲膠為常用中藥的補虛藥物之一。

目前，國內對動物膠類藥材的研究主要集中在阿膠及鹿角膠，對龜甲膠的研究十分匱乏，筆者通過查閱近15年有關龜甲膠研究報道，從龜甲膠的化學成分、藥理作用、臨床、真偽鑒定及質量控制等方面進行綜述，旨在為更好地保護利用龜甲膠提供數據和參考。

1 化學成分研究

目前，文獻資料顯示龜甲膠主要成分為蛋白質、多肽、氨基酸及微量元素等，其有效物質基礎尚不明確。

1.1 蛋白質、多肽及氨基酸的含量測定 李春梅等[2]采用激光解析/離子化飛行時間質譜（SELDI-TOF MS），對龜甲膠1500～13000Da區間蛋白質、肽分布以及分子量進行分析，并得到龜甲膠的蛋白質/肽成分質量指紋圖譜，該結果也可作為龜甲膠數字化質控的標準。除了對蛋白質和肽的研究，有學者[3]也對龜甲膠氨基酸的含量進行測定，并得到14種氨基酸含量（羥脯氨酸、絲氨酸、谷氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、丙氨酸、脯氨酸、甘氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸），其測定結果也可作為龜甲膠藥材的鑒別標準，為進一步完善龜甲膠藥材的質量標準提供一定的數據參考。周維等[4]對龜甲的提取物（即龜甲膠經水煎煮、濾過、濃縮、干燥后，并加輔料混合均勻后而制得的顆粒）中6種氨基酸（甘氨酸、L羥脯氨酸、L脯氨酸、瓜氨酸、丙氨酸、亮氨酸）的含量進行測定。萬鳴等[5]對采自不同時間階段，來源于同一產地（湖北荊州）的龜甲進行水煎提取處理后，測定龜甲膠的含氮量，并分析不同時間段的龜甲及不同部位（背甲和腹甲）的出膠率及含氮量，結果表明，不同時間采集龜甲對出膠得率和氮含量結果影響不大，出膠得率在11.10%～14.30%，氮含量在16.14%～17.08%；從不同部位如背甲和腹甲中提取龜甲膠，出膠率分別為13.43%和14.31%，含氮量分別為16.20%和16.31%。提示不同時間及不同部位對龜甲的出膠率及氮含量影響無統計學差異（P>0.05）。

1.2 微量元素及有害元素含量的測定 曹繼華等[6]對包括龜甲膠在內的6味中藥進行微量元素的測定，結果顯示，龜甲膠中含有鈣、鎂、鐵、鋅、磷、錳、銅、鍶等多種微量元素，并且鈣和鐵的含量要明顯高于其它兩種膠類藥材如鹿角膠和阿膠。有研究者對龜甲膠中有害元素的含量進行測定，袁利杰等[7]利用微波消解-電感耦合等離子質譜（ICP-MS）測定龜甲膠中6種有害元素（砷、銅、鉻、鉛、鎘、汞）的含量，王海波等[8] 采用電感耦合等離子體光譜，對9批龜甲膠樣品中鉻元素的含量進行測定，鉻含量在0.15～1.24 mg·kg-1之間。查閱我國歷版藥典及相關醫藥法規，尚未對龜甲膠中鉻元素及其它有害元素的含量及限度進行規定，因此建立有害元素檢測的方法及含量的控制對安全用藥具有十分重要的意義。

2 藥理作用研究

2.1 促進細胞增殖 藥理研究表明，龜甲膠通過上調或下調一系列基因的表達，可促進軟骨細胞的增殖，抑制細胞的凋亡，從而修復受損軟骨，最終延緩骨關節炎的病理進程。

林嘉輝等[9]選取3月齡豚鼠骨關節炎軟骨細胞作為實驗對象，分別用龜甲膠、鹿角膠、鹽酸氨基葡萄糖（GHC）含藥血清和生理鹽水對其進行干預，比較含藥血清對軟骨細胞的促增殖作用情況，并且采用QPCR檢測干預后軟骨細胞JNK及p38 MAPK基因的表達差異情況。結果表明，龜甲膠和鹿角膠均下調JNK及p38 MAPK基因的表達，從而減少JNK和p38 MAP在軟骨細胞內的合成，進而減少基質降解，抑制細胞的凋亡，最終延緩骨關節炎病理進展，其中龜甲膠組抑制JNK和p38 MAPK基因的表達作用最強。陳澤華等[10]、陳炳藝等[11]也進行了類似的實驗，區別是選取的試驗對象不同，為3月齡豚鼠膝關節軟骨細胞，檢測干預后軟骨細胞增殖情況，并采用SABC免疫組化檢測干預后軟骨細胞MKK的表達。結果表明，龜甲膠、鹿角膠均能顯著性上調膝關節軟骨細胞MKK的表達，促進軟骨細胞增殖，修復受損軟骨、緩解骨關節炎。

2.2 抑制細胞凋亡 李楠等[12-13]通過試驗研究龜鹿二仙膠及其拆方對大鼠及豚鼠軟骨細胞Collagen-Ⅱ和GAG的表達，結果發現，龜鹿二仙膠全方可明顯促進軟骨細胞Collagen-Ⅱ和蛋白多糖的表達，抑制軟骨細胞凋亡，其作用明顯強于各個拆方，且君藥龜甲膠和鹿角膠的作用強于臣藥人參和枸杞的作用。該團隊在后續試驗中選取第三代4周齡SD大鼠關節軟骨細胞，采用SNP誘導凋亡后，用免疫組化染色法以及實時熒光定量PCR檢測研究了龜鹿二仙膠及其拆方含藥血清對軟骨細胞bax、bcl-2的表達[14]，結果顯示，龜鹿二仙膠及其各個拆方均能上調bcl-2表達及下調bax的表達，即龜甲、鹿角、人參、枸杞均具有抑制軟骨細胞凋亡的作用，并且研究發現，君藥龜甲和鹿角較臣藥人參和枸杞有明顯加強抑制凋亡的作用。

2.3 提高血清雌二醇（E2）水平 杜江等[15]研究表明，龜甲膠與鹿角膠在提高血清雌二醇（E2）濃度及促進膝關節軟骨基質Ⅱ型膠原表達方面具有顯著性的作用。李楠等[16]研究龜鹿二仙膠及其各個拆方對SD大鼠膝關節軟骨退變的影響，結果證實，龜甲和鹿角配伍人參可明顯提高血清雌二醇（E2）濃度水平，抑制關節軟骨產生炎癥反應，促進軟骨細胞Collagen-Ⅱ的合成及增殖。

3 臨床研究

龜甲膠在臨床上主要用于滋陰養血、止血補血、益腎健骨等方面。

俞紅麗等[17]利用益血生膠囊（阿膠、鹿角膠、龜甲膠、白芍、當歸等成分）治療48例缺鐵性貧血，治療3個月后，治療組復發率、不良反應均低于對照組（P<0.05）。賽漢其其格[18]利用補腎固沖（熟地黃、制首烏、山茱萸、山藥、龜甲膠、生龍骨、牡蠣等）治療268例更年期宮血，治愈164例，好轉75例，總有效率達89.18%。陳淑萍[19]運用補腎基本方（熟地黃、懷山藥、龜甲膠、鹿角膠等主要成分）治療功能性子宮出血35例，痊愈21例，顯效9例，好轉4例，總有效率高達97%。蔡忠鳳等[20]利用龜鹿補腎丸（龜甲膠、鹿角膠、菟絲子炒、淫羊藿、續斷等主要成分）治療陽萎86例，總有效率達100%。李文順等[21]運用龜鹿二仙膠湯治療肝腎虧虛型膝骨性關節炎60例，總有效率98.3%，臨床療效明顯。

4 真偽鑒定及質量控制研究

4.1 基原動物鑒定及質量控制 中藥基原鑒定是中藥鑒定的基礎，確保應用中藥材來源及品種的準確性，對中藥材的繼承、研究、生產、開發利用均具有十分重要的意義[22]。

唐敏等[23]選取以巴西龜和中華草龜為來源的龜甲膠作為實驗對象，采用超高效液相色譜-電噴霧四級桿飛行時間質譜法，并且以牛皮特征肽離子為檢測對象對兩種來源的龜甲膠進行測定，結果顯示，該方法可區別巴西龜龜甲膠和摻雜牛皮成分的龜甲膠，也可用于龜甲膠的質量控制。彭婷婷等[24]采用超高效液相色譜-質譜聯用法（UPLC-MS），以不同品種龜甲為原料分別熬制成龜甲膠，并測定其牛皮源的含量，結果表明，純草龜龜甲熬制的龜甲膠檢測結果為牛皮源陰性，摻雜巴西龜龜甲的龜甲膠檢測結果為牛皮源陽性，該方法可有效控制龜甲膠質量。

4.2 幾種動物膠類藥材鑒定及質量控制 目前，研究較多的動物膠類藥材有3種，即龜甲膠、鹿角膠和阿膠。殷學毅[25]選用包括龜甲膠在內的3種動物膠類樣品，分別置于熱分析儀樣品室，在空氣氣氛下，以5℃/min的速度從20℃勻速升至550℃，獲得不同樣品的微商熱重（DTG）曲線和差熱分析（DTA）曲線，根據其曲線的特征差異進行鑒別，結果顯示，利用熱分析方法可以將該幾種動物膠類藥材（龜甲膠、鹿角膠、阿膠）進行區分鑒定。錢瑛等[26]將阿膠、龜甲膠、鹿角膠3種樣品，經加熱、研磨粉碎后，放入同步熱分析儀樣品室中進行熱分析鑒定，對每種樣品分別做3次有效生物學重復測定，將得到的原始數據取平均值后，做DTG、DTA數據分析表，并分析該方法與感官鑒定法、水試法、圓二色譜鑒定法的成功率。結果顯示，熱分析法能夠準確并快速鑒定區別龜甲膠、阿膠、鹿角膠這3種膠類藥材，且具有直觀簡便、成功率高的優點，能夠在中藥材鑒定中推廣并加以運用。于海英等[27]采用高效液相色譜（HPLC），建立東阿阿膠、龜甲膠脂溶性成分的指紋圖譜，為藥用動物膠類藥材的鑒別及質量控制提供了依據。

歷版中國藥典中，動物膠類藥材均無專屬性鑒別，且性狀描述較粗略，對膠類的真偽及優劣很難做出客觀、準確的判斷。因此對動物膠類中藥鑒定及質量控制方面應當予以加強研究，確保動物膠類中藥及其制劑的質量，保證用藥安全。

5 其他

林芳花等[28]將海螵鞘與龜甲膠藥材提取液添加至培養基中飼養果蠅，記錄果蠅產生F1代和F2代數量。結果顯示，龜甲膠和海螵蛸都能顯著性提高果蠅的繁殖力。

6 小結

龜甲膠為我國傳統滋補類名貴中藥，臨床療效明確。但其有效活性物質尚不明確，因此，應加強對龜甲膠活性物質的挖掘以及對其質量控制方法，對制備工藝的標準進行相關研究，并在龜甲膠真偽鑒定研究方面應當予以加強，以期更有效地利用該藥材資源，確保用藥安全。

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