廣西產(chǎn)多花黃精不同炮制工藝研究

周改蓮　李健　徐夢(mèng)云　謝栩　王邱燕

【摘 要】 目的：為研究酒制法、熟地制、黑豆制、清蒸、蔓荊子制等不同炮制工藝對(duì)廣西產(chǎn)藥食同源多花黃精成分含量的影響，優(yōu)選出最佳炮制工藝。方法：采用紫外分光光度法測(cè)定廣西產(chǎn)藥食同源多花黃精不同炮制品中小分子多糖、還原糖、總皂苷、總多糖的含量，并按藥典規(guī)定方法測(cè)其浸出物含量，采用歸一化法計(jì)算其綜合評(píng)分并比較。結(jié)果：6個(gè)指標(biāo)綜合評(píng)分由大到小依次為：蔓荊子制法（87.47）>清蒸（86.67）>九蒸九曝法（83.08）>酒制法（81.31）>黑豆、蜜、酒制法（77.07）>黑豆、姜、蜜制法（72.36）>熟地制法（70.55）>生品（66.16）>黑豆制法（64.35）。結(jié)論：廣西產(chǎn)藥食同源多花黃精不同炮制工藝以蔓荊子制法最優(yōu)。

【關(guān)鍵詞】 多花黃精；炮制；綜合評(píng)價(jià)

【中圖分類號(hào)】R283 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2018）10-0034-04

Abstract：Objective To study the components of Guangxi Polygonatum cyrtonemaprocessed differently， like stir-frying with wine， processing with Rehmanniae Radix Preparata， black beans or Fructus Viticis and steaming processing techniques， and select the best processing method. Methods Components of Polygonatum cyrtonema， including small molecular of polysaccharides， reducing sugar， total saponins and total polysaccharides， were determinated by UV Spectrophotometry， the extracts were determined by the way according to Chinese pharmacopoeia， and normalized method was used to calculate and compare their score. Results Comprehensive scores of the six indexes were arranged according to the order from big to small：Fructus viticis processing （87.47） > Steaming processing （86.67） >Nine steaming and nine exposure processing（83.08） > Liquor processing （81.31） > Black beans， honey， and liquor processing （77.07） > Black beans， ginger， and honey processing （72.36） > Radix Rehmanniae Preparata processing （70.55） > Unprocessed products （66.16） > Black beans processing （64.35）. Conclusion Fructus viticis processing is the best method to process Guangxi edible and medicinal Polygonatum cyrtonema.

Keywords：Polygonatum cyrtonema； Processing； Comp-rehensive Evaluation

黃精為合百科植物滇黃精（Poιygonatum kingianum CoLL.et HemsL.）、黃精（Polygonatum sibiricum Red.）或多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua.）的干燥根莖。黃精屬于藥食兩用中藥材，其化學(xué)成分主要為低聚糖、單糖和多糖，多種氨基酸、多種甾體皂苷和人體必需微量元素、生物堿等[1]。黃精歷代入藥生制兼用，但傳統(tǒng)以黃精生用“刺人咽喉”，故多炮制后入藥[2]。黃精炮制淵源已久，歷代以來(lái)黃精炮制方法有：九蒸九曝法、蔓荊子水蒸法、酒熬法、焙制法、黑豆煮法、酒蒸法、乳浸曬法、熟地制等[3]。目前對(duì)黃精的研究大多數(shù)為黃精及滇黃精，炮制方法為酒制法，而主產(chǎn)在廣西的多花黃精的研究還處于空白，據(jù)筆者調(diào)查，廣西民間百姓多用黑豆炮制法炮制生黃精，而黑豆制法也分為黑豆汁制、黑豆、蜜、酒制，黑豆、生姜、蜜制等。筆者主要研究廣西產(chǎn)多花黃精的酒制、黑豆制、清蒸、蔓荊子制、熟地制等不同炮制工藝，旨在為廣西產(chǎn)多花黃精炮制工藝提供理論參考，為今后黃精黑豆制法規(guī)范化研究提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-L5紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海儀電分析儀器有限公司），KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），DFT-200C萬(wàn)能高速粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司），HH-S6數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠），SHB-B95型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司），分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）。

1.2 材料 人參皂苷Rb1（批號(hào)：wkq16060402，四川省維克奇生物科技有限公司），無(wú)水葡萄糖（批號(hào)wkq16082202，四川省維克奇生物科技有限公司），其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的炮制與制備

2.1.1 生黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，切厚片，曬干[4]。

2.1.2 九蒸九曝法制黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈。①拌黃酒：與適量（約10 %用量）黃酒與凈黃精拌勻，并悶潤(rùn)至酒吸盡。②第1次蒸制、曬干：要求第1次“蒸至黃精中央發(fā)虛為度”（蒸制過(guò)程中注意收集黃精汁），取出“曬至外皮微干”，然后將黃精拌入黃精汁和適量黃酒，并“悶潤(rùn)至輔料吸盡”。③反復(fù)蒸制、曬干：按第1次蒸制、曬干方法；再蒸，曬至外皮微干，再拌入黃精汁，適量黃精，如此反復(fù)，蒸制曬8次。第2次至第8次制需要使用黃酒的70 %用量。④第9次蒸制、曬干：最后將剩余（20 %用量）黃酒及黃精汁一起拌入，“蒸至外表棕黑色，有光澤，中心深褐色，質(zhì)柔軟，味甜為度”；最后曬至八成干，然后切成片狀[5-6]。

2.1.3 黑豆制黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，加米泔水泡透心，淘凈，取黑豆100 g熬取濃汁，與黃精共入鍋中，加水與藥平；煮沸后，用微火煮至微干，取出，篩去黑豆，曬至半干，又入蒸鍋蒸至上氣，取出日曬夜露，隔天又蒸至上氣，再曬再露，每次蒸前，加入前次的蒸出液于盛裝器皿中與黃精一起蒸，反復(fù)5次，曬干[7]。

2.1.4 黑豆、蜜、酒制黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，浸泡2 d，每日換水1次，取出。取黑豆50 g水煮，取汁，與黃精合煎12 h，取出，曬至半干，再加熟蜜25 g及白酒25 g，共兌化拌勻后，蒸24 h，蒸至黑色，無(wú)麻味，曬干，即可[7]。

2.1.5 黑豆、生姜、蜜制黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，加水泡透后，再加水煮沸，去水，加生姜250 g，黑豆50 g煮2 h，曬半干，加蜂蜜75 g與水拌勻，蒸至黑亮為度，取出，曬干[7]。

2.1.6 熟地制黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，切厚片，蒸至略帶黑色，曬半干，露一夜。如此反復(fù)3次，至第4次與熟地膏120 g拌勻，潤(rùn)一夜，次日蒸至里面黑透，再曬、露一次，曬干[7]。

2.1.7 酒制黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，加酒拌勻，置蒸籠內(nèi)，密閉，隔水加熱蒸至黑透，取出，稍晾，曬干[7]。

2.1.8 清蒸黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，蒸6 h，曬八成干，加蒸出液浸潤(rùn)，再蒸6 h，至內(nèi)心成黑色，曬半干，再加蒸出液拌勻，曬至六成干，在悶潤(rùn)均勻。蒸格上墊編織袋，蒸一夜，悶一夜（12 h），次日取出剖視，以內(nèi)外發(fā)黑為度，切片，曬干[7]。

2.1.9 蔓荊子制黃精 取黃精500 g，除去雜質(zhì)，洗凈，置適宜的容器內(nèi)，加入蔓荊子汁及適量水拌勻，浸潤(rùn)過(guò)夜，置蒸制容器內(nèi)蒸24 h，取出，曬干[7]。

2.2 浸出物的含量測(cè)定 取粉碎過(guò)篩后的黃精樣品4 g，精密稱定，按2015版《中國(guó)藥典》四部附錄通則2201項(xiàng)下熱浸法[8]，用稀乙醇、蒸餾水作溶劑，測(cè)定醇溶性浸出物、水溶性浸出物，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 供試品溶液的制備 取黃精樣品各200 g，60℃干燥至恒重，粉碎，過(guò)80目篩，備用。取黃精樣品粉末各1.00 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇100 mL，水浴回流提取1 h，趁熱過(guò)濾，濾渣用80 %乙醇洗3次，每次10 mL，取濾液，揮盡乙醇，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻后用于小分子總糖和還原糖含量測(cè)定[1]。將藥渣與濾紙置圓底燒瓶中，加蒸餾水100 mL，水浴加熱回流提取1 h，趁熱過(guò)濾，濾渣用水洗3次，將濾液轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，用于總多糖的含量測(cè)定[1]。

2.4 還原糖的含量測(cè)定

2.4.1 葡萄糖對(duì)照溶液的制備 取經(jīng)105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品55.0 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得[1]。

2.4.2 DNS溶液的配制 取0.650 g 3，5-二硝基水楊酸，精密稱定，加水50 mL溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL棕色容量瓶中，加入32.5 mL的2 mol/mL的NaOH溶液，再加入4.5 g丙三醇，加水至刻度，搖勻，即得[9]。

2.4.3 還原糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置10 mL具塞刻度試管中，各加水至4 mL，再各加入5 mL DNS溶液，搖勻后置沸水浴中加熱6 min，冰浴冷卻至室溫，加水至刻度，以空白管為對(duì)照，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在540 nm處測(cè)定吸光度[9-10]。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.0067X+0.0353（r=0.9997），表明無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液在22～132 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，用于DNS法測(cè)定還原糖含量。

2.4.4 樣品的測(cè)定 精密量取“2.3”項(xiàng)下方法制備的供試品溶液各1.0 mL稀釋到50 mL，精密量取4 mL，分別置10 mL具塞試管中，按照“2.4.3”項(xiàng)下方法自“再加入5 mL DNS溶液”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算還原糖含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 多糖、總糖的含量測(cè)定

2.5.1 苯酚溶液的制備 取2.5 g苯酚，精密稱定，加水溶解并定容于50 mL棕色容量瓶中[10]。

2.5.2 多糖、總糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，然后分別精密量取上述稀釋后的葡萄糖對(duì)照品溶液各1 mL，置10 mL具塞試管中，加水至2mL，搖勻，再加1 mL的5%苯酚溶液和7 mL濃硫酸溶液，混勻，靜置5 min，水浴加熱20 min，并與冷卻至室溫，以空白管為對(duì)照，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在490 nm處測(cè)定吸光度[9-10]。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.0696X-0.0223（r=0.9998）， 表明無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液在2.2～13.2 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，用于苯酚-硫酸法測(cè)定多糖、總糖含量。

2.5.3 樣品的測(cè)定 精密量取2.3項(xiàng)下方法制備的供試品溶液各0.5 mL，置10 mL具塞試管中，按照“2.5.2”項(xiàng)下方法自“加水至2 mL”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算多糖含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

精密量取2.3項(xiàng)下方法制備的供試品溶液各1.0 mL稀釋到50 mL，精密量取1 mL，置10 mL具塞試管中，按照“2.5.2”項(xiàng)下方法自“加水至2 mL”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算小分子總糖含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.6 總皂苷含量測(cè)定

2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取人參皂苷Rb1對(duì)照品11.3 mg，精密稱定，加甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中。取人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液40、80、120、160、200 μL，置10 mL具塞試管中，揮盡溶劑，加0.2 mL 5%香草醛-冰醋酸溶液（新鮮配制），冰浴時(shí)加0.8 mL高氯酸，混勻，60℃水浴加熱15 min，再冰浴2 min，加5 mL冰醋酸，混勻，靜置5 min，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在550 nm處測(cè)定吸光度[9]。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，人參皂苷Rb1的質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸處理，得回歸方程：Y=0.0039X+0.0305（r=0.9997），結(jié)果表明人參皂苷對(duì)照品溶液在45.2～226 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.6.2 樣品的測(cè)定 取黃精樣品粉末各1.00 g，精密稱定，加14倍量水飽和正丁醇，40℃超聲提取50 min，過(guò)濾，濾渣再提取1次，合并兩次濾液，置25 mL容量瓶中，加水飽和正丁醇至刻度，搖勻[11]。取上述供試品溶液各100 μL，按照“2.6.1”項(xiàng)下方法自“置10 mL具塞試管中”起操作，測(cè)定吸光度，計(jì)算總皂苷含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.7 數(shù)據(jù)處理及綜合評(píng)分 以多花黃精不同炮制品的浸出物、還原糖、多糖、小分子總糖、總皂苷含量為指標(biāo)，采用綜合評(píng)分法評(píng)定。評(píng)分時(shí)以各指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)最大值作為參照，將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理，再根據(jù)各指標(biāo)的炮制工藝特性和成分重要性，給予糖類成分含量加權(quán)系數(shù)為0.4，總皂苷含量加權(quán)系數(shù)為0.3，浸出物加權(quán)系數(shù)為0.3，以行歸一化處理后的數(shù)值加權(quán)求和，即得綜合評(píng)分，其關(guān)系式為：（還原糖含量/還原糖含量最大值+多糖含量/多糖含量最大值+小分子總糖含量/小分子總糖含量最大值）/3×40+（總皂苷含量/總皂苷含量最大值）×30+（醇溶性浸出物含量/醇溶性浸出物含量最大值+水溶性浸出物含量/水溶性浸出物含量最大值）/2×30[1]，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

糖類是多花黃精中含量最高的成分，歷代以來(lái)黃精炮制方法有九蒸九曝法、蔓荊子水蒸法、酒熬法、焙制法、黑豆煮法、酒蒸法、乳浸曬法、熟地制等，研究不同炮制工藝對(duì)廣西產(chǎn)多花黃精成分含量的影響，優(yōu)選出最佳炮制工藝，為廣西產(chǎn)多花黃精制法規(guī)范化研究提供參考依據(jù)。且在2015版《中國(guó)藥典》中對(duì)黃精藥材及飲片檢查項(xiàng)皆有要求“含黃精多糖以無(wú)水葡萄糖（C6H12O6）計(jì)，不得少于4.0%”[4]。不同炮制品與生品對(duì)照，多糖含量均有所增加，還原糖含量除熟地制多花黃精有所降低外，其它炮制品還原糖含量均有所增加；而不同炮制品的總糖、小分子總糖、非還原性低聚糖含量均比生品低。不同炮制工藝炮制的多花黃精之間的含量有所不同，其質(zhì)量也存在一定差異，其功效是否也存在一定的差異，有待于進(jìn)一步的深入研究。甾體皂苷是多花黃精的主要活性成分之一，初步研究表明，不同炮制工藝炮制的多花黃精之間的總皂苷含量差異不大，但與生品總皂苷含量對(duì)比，均比生品總皂苷含量高，其中以蔓荊子制多花黃精含總皂苷量最高。

采用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)，蔓荊子制多花黃精得分最高為87.47，其它炮制品依次為：清蒸（86.67）>九蒸九曝法（83.08）>酒制（81.31）>黑豆、蜜、酒制（77.07）>黑豆、姜、蜜制（72.36）>熟地制（70.55）>生品（66.16）>黑豆制（64.35）。根據(jù)多花黃精有效成分及綜合評(píng)分考察，蔓荊子制法為廣西產(chǎn)多花黃精的最佳炮制工藝，其次為清蒸、九蒸九曝法，酒制。

廣西產(chǎn)多花黃精經(jīng)不同炮制工藝炮制后，其水溶性浸出物、醇溶性浸出、糖類、總皂苷等成分含量均與生品有所差異，其中以水溶性浸出物、醇溶性浸出物及非還原型低聚糖尤甚；且黑豆制多花黃精取自《現(xiàn)代中藥炮制手冊(cè)》記載，但其結(jié)果與生品比較，差異尤甚，故有待于對(duì)多花黃精炮制工藝做進(jìn)一步的深入研究。

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（收稿日期：2018-03-22 編輯：陶希睿）