頂空氣相色譜法測定香菊感冒顆粒中麝香草酚和百秋李醇的含量

許 奇，張華鋒，顧 倩

(蘇州市藥品檢驗檢測研究中心，蘇州 215104)

香菊感冒顆粒由廣藿香、香薷、野菊花和青蒿組成，具有疏風解表、芳香化濕和清暑解熱的作用，主治四時感冒，尤其對夏季感冒發熱、頭痛和胸悶無汗等更為適宜[1]。研究表明，揮發油為其主要的功效成分[1]。據報道，廣藿香和香薷揮發油在心腦血管系統、中樞神經系統、呼吸系統和胃腸道等方面有治療作用，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗病毒及促進藥物吸收等作用[2-5]。香菊感冒顆粒的標準中僅有3個鑒別方法，無含量測定方法，無法對揮發油的質量進行控制。本實驗通過建立頂空氣相色譜法測定其揮發油[6-15]中的百秋李醇和麝香草酚的方法，該方法簡便、準確，重復性好。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 7890A氣相色譜儀，Agilent 7697A頂空進樣器，Openlab色譜工作站(美國Agilent公司)；XS105DC電子天平(美國梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥 環己烷(Fisher公司，色譜純)；純化水；百秋李醇對照品(批號100508-200902，質量分數99.1%)，麝香草酚對照品(批號110772-201206，質量分數99.9%)，均購自中國食品藥品檢定研究院；香菊感冒顆粒(雷允上藥業(蘇州)有限公司，批號：NC12003，NC12005，NC12009)；野菊花和青蒿，雷允上藥業(蘇州)有限公司，打粉備用。

2 方法和結果

2.1色譜條件 毛細管柱[16-19]：Agilent HP-5(30 m×0.32 mm，0.25 μm)；分流比5∶1；進樣口溫度：250 ℃；載氣：N2；流速：2 mL·min-1；程序升溫：在40 ℃下保持5 min，以5 ℃·min-1的速率升至150 ℃，再以10 ℃·min-1的速率升至200 ℃，保持3 min；檢測器：FID(H2：30 mL·min-1，空氣：400 mL·min-1)；檢測器溫度：300 ℃；頂空進樣器爐溫：85 ℃；平衡時間：10 min；定量環溫度：90 ℃；傳輸線溫度：95 ℃；進樣體積：1 mL。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液 精密稱取麝香草酚和百秋李醇對照品適量，用環己烷溶解制成質量濃度分別為2.977和3.141 mg·mL-1的麝香草酚和百秋李醇對照品母液。分別精密吸取上述對照品母液1.0和0.5 mL，置于同一100 mL量瓶中，用環己烷稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液100 μL，置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL頂空瓶中，密封，即得。

2.2.2供試品溶液 將香菊感冒顆粒研細，精密稱取細粉2.5 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，加入純化水10 mL和環己烷100 μL，密封，即得。

2.2.3陰性對照溶液 將野菊花和青蒿2味藥材按照處方制法縮小1/8制成陰性樣品。再按照2.2.2項下方法配制成陰性對照溶液。

2.3方法學考察

2.3.1系統適用性考察 取2.2項下制備的對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液測定，麝香草酚與百秋李醇的保留時間分別為20.9和29.3 min。供試品溶液色譜圖中存在與對照品溶液色譜圖中主峰保留時間一致的色譜峰，且供試品溶液中麝香草酚和百秋李醇的色譜峰與相鄰的峰分離度大于1.5。陰性樣品色譜圖中未出現百秋李醇色譜峰，在麝香草酚相應的保留時間處有峰。色譜圖見圖1。

2.3.2標準曲線 精密吸取麝香草酚對照品母液0.2，0.5，1.0，2.0和10.0 mL以及百秋李醇對照品母液0.1，0.25，0.5，1.0和5.0 mL，分別置于50 mL量瓶中，用環己烷稀釋至刻度，搖勻，作為標準曲線溶液。精密吸取上述標準曲線溶液100 μL，分別置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL頂空瓶中，密封測定，以麝香草酚與百秋李醇的峰面積與其對照品溶液質量濃度(μg·mL-1)進行線性回歸。得回歸方程：麝香草酚y=1 063.7x+1 658 (r=0.999 5)；百秋李醇y=1 207.4x-120.35(r=0.999 6)。結果表明，麝香草酚和百秋李醇的質量濃度在11.908～595.404 和6.283～314.147 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系。

圖1GC圖

A.混合對照品；B.供試品；C.陰性對照樣品；1.麝香草酚；2.百秋李醇。

Fig.1 GC chromatograms

A.mixed reference substances；B.samples；C.negative control samples；1.thymol；2.patchouli alcohol.

2.3.3精密度 精密吸取對照品溶液100 μL，6份，置于已加入蔗糖2.15 g和水10 mL的20 mL頂空瓶中，密封測定，結果麝香草酚峰面積的RSD值為1.7%(n=6)、百秋李醇峰面積的RSD值為2.0%(n=6)。結果表明，儀器精密度良好。

2.3.4重復性 取同一批(批號CN12005)香菊感冒顆粒樣品，分別制成6份供試品溶液，測定。測得麝香草酚平均含量為2.438 4 μg·g-1，RSD值為1.5%(n=6)；百秋李醇平均含量為0.499 6 μg·g-1，RSD值為1.7%(n=6)。結果表明，重復性良好。

2.3.5穩定性 另取香菊感冒顆粒樣品(批號CN12005)制備供試品溶液。分別在0，2，4，6和8 h時測定，測得麝香草酚含量的RSD值為2.0%(n=5)；百秋李醇含量的RSD值為2.0%(n=5)。結果表明，溶液在8 h內穩定。

2.3.6加樣回收率 精密吸取2.2.1項下制備的麝香草酚和百秋李醇對照品儲備液各1 mL，置于同一100 mL量瓶中，加環己烷稀釋至刻度，作為對照品加入溶液。取與重復性實驗同一批號的香菊感冒顆粒細粉6份，每份1.3 g，精密稱定，置于20 mL頂空瓶中，加入1.07 g的蔗糖和10 mL的純化水，再精密吸取100 μL對照品加入溶液，置于頂空瓶中，密封，作為回收率供試品溶液，測定，按照外標法分別計算麝香草酚和百秋李醇的加樣回收率。結果見表1和表2，麝香草酚的平均回收率為97.0%，RSD值為2.0%(n=6)；百秋李醇的平均回收率為99.3%，RSD值為1.5%(n=6)。

2.4樣品測定 按照2.2.2項下方法，分別測定3批香菊感冒顆粒的含量。測得麝香草酚的平均含量分別為0.99，2.44和1.31 μg·g-1，百秋李醇的平均含量為0.80，2.54和1.14 μg·g-1。

表1麝香草酚回收率實驗結果

Tab.1 The results of recovery test of thymol

(n=6)

表2百秋李醇回收率實驗結果

Tab.2 The results of recovery test of patchouli alcohol

(n=6)

3 討論

香菊感冒顆粒由處方中的4味藥用水蒸氣蒸餾法提取揮發油，藥渣加水煎煮濃縮成清膏，與蔗糖按照1∶6的比例混勻，干燥，制粒，再加入揮發油及薄荷油，混勻，即得。由此可知，可以通過萃取方法得揮發油后直接進樣。但通過預實驗發現萃取法使得揮發油質量濃度低，導致實驗的靈敏度過低、準確度低。后選用頂空進樣法后，能使得測定的成分滿足要求，故采用頂空進樣的方法。參考文獻和預實驗后，確定采取程序升溫能很好地滿足色譜峰的分離要求。采用頂空法后考察了不同的頂空平衡溫度(75，80，85和90 ℃)和不同的平衡時間(5，10，15，20，25，30，35，40和45 min)后，最終確定了2.1項下色譜條件。

查文獻時未發現野菊花和青蒿揮發油中有麝香草酚和百秋李醇，故只用青蒿和野菊花制成陰性對照。但實驗中發現陰性結果中卻有麝香草酚，后用GC-MS法確認，4種藥材中均有麝香草酚，故該陰性溶液只為確認百秋李醇。

本實驗采取頂空氣相色譜法測定香菊感冒顆粒中的麝香草酚和百秋李醇，前處理方法簡單，且結果相對精確，可作為提高香菊感冒顆粒標準的依據。