調(diào)衡方多糖對(duì)Lewis肺癌荷瘤體紅細(xì)胞免疫功能的影響

白志超，張宏方，于鵬龍，鄭 玉，李文俠，于東波，王媛媛，王希勝

(1.中國(guó)人民解放軍第二五二醫(yī)院腫瘤血液科，保定 071000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)病原微生物及檢驗(yàn)學(xué)教研室，咸陽(yáng) 712046)

扶正與祛邪是中醫(yī)治療惡性腫瘤的重要法則之一，扶正就是扶助正氣，提高機(jī)體的抗病能力，祛邪就是祛除邪氣，以減少荷瘤體的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，提高患者的生存質(zhì)量。調(diào)衡方是以張錫純《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》中的理沖湯為基礎(chǔ)方的古驗(yàn)方，對(duì)調(diào)衡方所做的前期實(shí)驗(yàn)及臨床觀察發(fā)現(xiàn)[1-2]，該方不但對(duì)腫瘤有抑制作用，還有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用。CR1(即C3b受體)是紅細(xì)胞表面的主要標(biāo)志物之一，其化學(xué)組成為蛋白質(zhì)，其主要功能是將機(jī)體內(nèi)的循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)黏附、運(yùn)載及最終將其清除，從而保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)平衡。近年臨床報(bào)道發(fā)現(xiàn)[3-5]，腫瘤病人的固有免疫紅細(xì)胞CR1黏附功能紊亂，且腫瘤的發(fā)生與其CR1黏附功能低下關(guān)系密切。已有研究發(fā)現(xiàn)，多種植物和生物體內(nèi)有大量活性多糖，這些活性多糖對(duì)機(jī)體的免疫功能有廣泛影響[6-15]，且這些活性多糖在抗腫瘤與調(diào)節(jié)機(jī)體免疫方面有廣闊的應(yīng)用前景。調(diào)衡方抑制腫瘤作用是否與其增強(qiáng)和改善荷瘤小鼠紅細(xì)胞免疫功能有關(guān)仍不清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)以Lewis肺癌荷瘤體小鼠紅細(xì)胞補(bǔ)體受體CR1的活性為研究對(duì)象，探討調(diào)衡方多糖(Tiaoheng Prescription Polysaccharides，THPPS)影響荷瘤機(jī)體紅細(xì)胞免疫功能的作用機(jī)制。

1 儀器與材料

1.1儀器 單人雙面超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司)；低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；722E分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，pH值測(cè)定儀(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；手提式壓力蒸汽消毒鍋(江陰濱江醫(yī)療設(shè)備廠)；XD-101倒置顯微鏡(江南光電股份有限公司)；數(shù)顯恒溫水浴箱(金壇市大地自動(dòng)化儀器廠)；MLS-3780全自動(dòng)高壓滅菌器(日本三洋公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板(上海市求精生化試劑儀器有限公司)。

1.2試藥 唾液酸試劑盒(南京建成生物有限公司)；黃芪多糖(astragalus polysaccharides，AGPS，黑龍江省生物制品一廠)；酵母多糖(第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)海醫(yī)院)；戊二醛(北京化學(xué)試劑公司)；瑞氏染液(上海試劑三廠)。

1.3材料 酵母菌種(陜西省微生物研究所)；Lewis肺癌株(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司)。

1.4動(dòng)物 SPF級(jí)雄性C57BL小鼠(購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，體質(zhì)量20±2 g，6～8周齡，在陜西中醫(yī)藥大學(xué)二級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(陜)2012-003。

2 方法

2.1調(diào)衡方多糖的制備 調(diào)衡方由黃芪30 g、山藥30 g、白花蛇舌草30 g、西洋參15 g、天花粉12 g、天門冬10 g、生雞內(nèi)金10 g、莪術(shù)10 g和水蛭3 g等組成，諸藥均經(jīng)生藥學(xué)鑒定，符合《中國(guó)藥典》2015年版規(guī)定。稱取以上調(diào)衡方中藥，用無(wú)水乙醇浸沒(méi)，恒溫水浴85 ℃回流萃取90 min，濾過(guò)后使其在自然條件下干燥，按照料液比為1∶8加純化水400 mL，恒溫水浴96 ℃回流萃取2 h，經(jīng)抽濾獲取濾液，再加入400 mL蒸餾水置于藥渣中，提取2 h，合并2次濾液，將此合并濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，50～60 ℃濃縮得復(fù)方中藥調(diào)衡方水提物。將此水提物用無(wú)水乙醇按照體積比1∶4 混合并不斷進(jìn)行攪拌，用離心機(jī)以4 500 r·min-1離心3 min，沉淀用無(wú)水乙醇洗3次，將獲取的沉淀置于真空干燥箱中(60 ℃干燥90 min)，即得調(diào)衡方復(fù)方中藥多糖，為棕褐色粉末，經(jīng)多糖含量測(cè)定，THPPS含量為56.40%，將此THPPS粉末用雙蒸水配制成質(zhì)量濃度為10 mg·mL-1的溶液，過(guò)濾除菌，密封，低溫保存，備用。

2.2造模、分組及用藥 選用C57BL小鼠，于右側(cè)腋窩皮下接種6.5×106個(gè)·mL-1的Lewis肺癌細(xì)胞，每只0.2 mL制作荷瘤模型，隨機(jī)將模型小鼠60只分為THPPS高、中和低劑量組(200，100和50 mg·kg-1·d-1)，陽(yáng)性組(黃芪多糖100 mg·kg-1·d-1)、Lewis肺癌小鼠模型對(duì)照組和正常組(均給予同體積生理鹽水，NS)。共6組，每組10只。第2 天灌胃給藥，每只0.2 mL，給藥8 d，于停藥后24 h眼球采血。

2.3THPPS觀察指標(biāo)

2.3.1對(duì)荷瘤小鼠抑瘤及脾臟、胸腺指數(shù)的影響 于給藥24 h后，對(duì)荷瘤小鼠行脫臼處死，剝離瘤塊、脾臟和胸腺，并用電子天平稱定質(zhì)量，計(jì)算各組瘤塊、脾臟和胸腺質(zhì)量，按照常規(guī)方法[16]統(tǒng)計(jì)各組瘤塊平均質(zhì)量及脾臟、胸腺指數(shù)。

2.3.2對(duì)荷瘤小鼠腫瘤紅細(xì)胞花環(huán)(RBC-TRR)的影響 在小鼠眼球采血，置于有肝素的玻璃試管中，以1 500 r·min-1離心10 min，棄上清液，按照1∶3加入質(zhì)量濃度為9 g·L-1的氯化鈉注射液，離心3次，洗滌，用適量質(zhì)量濃度為9 g·L-1的氯化鈉液調(diào)整紅細(xì)胞懸液為1×108個(gè)·mL-1，待用。人的新鮮血清制備:于實(shí)驗(yàn)前采人血，以2 000 r·min-1離心8 min，取上清液，置于2～10 ℃冰箱中待用。無(wú)菌操作，取8 d齡Lewis肺癌細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次，調(diào)為1×106個(gè)·mL-1瘤細(xì)胞懸液。取人的新鮮血清0.1 mL與瘤細(xì)胞懸液等體積匯合，37 ℃水浴1 h，洗滌3次，棄上清液，使其成為人血清致敏的瘤細(xì)胞，再將0.05 mL制備好的紅細(xì)胞懸液加入其中，37 ℃水浴30 min后，用質(zhì)量濃度為0.5 g·L-1的戊二醛固定，輕輕吹打，取適量涂片，按照瑞氏試劑盒要求染色，依據(jù)紅細(xì)胞結(jié)合3個(gè)及3個(gè)以上腫瘤細(xì)胞為紅細(xì)胞腫瘤免疫花環(huán)統(tǒng)計(jì)，鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)紅細(xì)胞，計(jì)算紅細(xì)胞腫瘤花環(huán)百分率。

2.3.3對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)(RBC-ICR)的影響 實(shí)驗(yàn)前取適量酵母多糖試劑，加1 mL生理鹽水，置于37 ℃水中溫育30 min，吹打混勻，待用。從1 mL抗凝血管中取100 μL紅細(xì)胞液加入100 μL生理鹽水，以1 500 r·min-1離心3次，棄上清液，再加適量生理鹽水，輕輕吹打，混勻，使紅細(xì)胞懸液為1.25×107個(gè)·mL-1，取配好的酵母多糖試劑與紅細(xì)胞液各50 μL，吹打混勻，37 ℃水中溫育30 min，加30 μL質(zhì)量濃度為2.5 g·L-1的戊二醛固定，輕輕吹打，取適量涂片，按照瑞氏試劑盒要求染色，依據(jù)紅細(xì)胞結(jié)合3個(gè)及3個(gè)以上酵母多糖為紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)統(tǒng)計(jì)，鏡下(酵母多糖多呈藍(lán)色，紅細(xì)胞呈紫紅色)計(jì)數(shù)100個(gè)紅細(xì)胞，計(jì)算花環(huán)率。

2.3.4對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞受體花環(huán)率(RBC-C3bRR)的影響 實(shí)驗(yàn)前先配制好補(bǔ)體致敏的酵母菌試劑[17]，從1 mL抗凝血管中取100 μL紅細(xì)胞液，加100 μL生理鹽水，以1 500 r·min-1離心3次，棄上清液，再加適量生理鹽水，輕輕吹打，混勻，使紅細(xì)胞懸液為1.25×107個(gè)·mL-1，取配好的酵母菌懸液與紅細(xì)胞液各50 μL，吹打混勻，37 ℃水中溫育30 min，加30 μL質(zhì)量濃度為2.5 g·L-1的戊二醛固定，輕輕吹打，取適量涂片，按照瑞氏試劑盒要求染色，依據(jù)紅細(xì)胞結(jié)合3個(gè)及3個(gè)以上酵母菌為紅細(xì)胞受體花環(huán)統(tǒng)計(jì)，鏡下(酵母菌多呈藍(lán)色，紅細(xì)胞呈紫紅色)計(jì)數(shù)100個(gè)紅細(xì)胞，計(jì)算其花環(huán)率。

2.3.5對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞唾液酸含量的影響 各組連續(xù)給藥8 d，于末次給藥24 h后，摘眼球取血，參照文獻(xiàn)[4，16]進(jìn)行紅細(xì)胞膜影泡制備。取小鼠血液1 mL，以3 000 r·min-1離心10 min，用生理鹽水-Tris-HCl緩沖液(pH值為7.4)，使紅細(xì)胞溶血1 h，以3 000 r·min-14 ℃離心40 min，棄上清液，紅細(xì)胞膜再用上述緩沖液沖洗3次，得到乳白色紅細(xì)胞膜，存放于-70 ℃冰箱中備用。取制備好的紅細(xì)胞膜影泡懸液1 mL，加Bialsche試劑，嚴(yán)格按照試劑盒中唾液酸的說(shuō)明書，比色法檢測(cè)并計(jì)算唾液酸的含量。

3 結(jié)果

3.1THPPS對(duì)荷瘤小鼠抑瘤及脾臟、胸腺指數(shù)的影響 黃芪多糖組和THPPS各劑量組對(duì)荷瘤小鼠的抑瘤作用均低于荷瘤模型組，抑瘤率分別為48.44%，21.58%，40.30%和49.78%。THPPS中、高劑量組及黃芪多糖組瘤體質(zhì)量均低于荷瘤模型組(P<0.01)，而與調(diào)衡方低劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與荷瘤模型組相比，THPPS各劑量組與黃芪多糖組的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均明顯提高，其中THPPS中劑量組和黃芪多糖組脾臟指數(shù)提高較顯著(P<0.05)；而THPPS高劑量組對(duì)脾臟、胸腺指數(shù)提高最顯著(P<0.01)；其他各組脾臟、胸腺指數(shù)與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1THPPS對(duì)荷瘤小鼠抑瘤及脾臟、胸腺指數(shù)的影響

組別劑量/mg·kg-1瘤塊質(zhì)量/g脾臟指數(shù)/mg·g-1胸腺指數(shù)/mg·g-1正常組NS—3.97±0.303.07±0.23荷瘤模型組NS1.14±0.223.32±0.24##2.56±0.22黃芪多糖組1000.59±0.21**3.77±0.42*2.77±0.23調(diào)衡方低劑量組500.89±0.29△3.55±0.182.54±0.26△調(diào)衡方中劑量組1000.68±0.23**3.64±0.23*2.73±0.17調(diào)衡方高劑量組2000.57±0.21**3.86±0.28**2.96±0.23**

注：正常組與荷瘤模型組比較##P<0.01；荷瘤模型組與各給藥組比較*P<0.05，**P<0.01；黃芪多糖組與調(diào)衡方各劑量組比較△P<0.05。-表示無(wú)瘤塊。

3.2THPPS對(duì)荷瘤小鼠腫瘤紅細(xì)胞花環(huán)(RBC-TRR)的影響 與正常組比較，荷瘤模型組表現(xiàn)出紅細(xì)胞腫瘤花環(huán)率極度降低，而THPPS干預(yù)各組的紅細(xì)胞腫瘤花環(huán)率，均有不同程度升高。與荷瘤模型組比較，THPPS高、中劑量組及黃芪多糖100 mg·kg-1組的花環(huán)率顯著提高(P<0.01)，THPPS低劑量組花環(huán)率有所提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2和圖1。

表2THPPS對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞RBC-TRR和RBC-ICR的影響

組別劑量/mg·kg-1腫瘤紅細(xì)胞花環(huán)數(shù)/%RBC-ICR數(shù)/%正常組NS17.24±2.9040.23±4.27荷瘤模型組NS4.98±2.56##7.89±3.46##黃芪多糖組10010.95±2.71**32.47±3.71**調(diào)衡方低劑量組507.79±3.4411.56±4.41△△調(diào)衡方中劑量組10014.03±3.56**34.48±4.15**調(diào)衡方高劑量組20014.36±4.68**35.22±4.70**

注：正常組與荷瘤模型組比較##P<0.01；荷瘤模型組與各給藥組比較**P<0.01；黃芪多糖組與調(diào)衡方各劑量組比較△△P<0.01。

3.3THPPS對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)實(shí)驗(yàn)(RBC-ICR)的影響 與正常組比較，荷瘤模型組紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率極度降低，而THPPS干預(yù)各組的紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率，均有不同程度升高。與荷瘤模型組比較，THPPS高、中劑量組及黃芪多糖100 mg·kg-1組的花環(huán)率顯著升高(P<0.01)，THPPS低劑量組花環(huán)率有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2和圖2。

3.4THPPS對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞C3b花環(huán)(RBC-C3bRR)的影響 與正常組比較，荷瘤模型組紅細(xì)胞C3b黏附花環(huán)的能力下降，經(jīng)過(guò)調(diào)衡方的治療后各組均有不同程度的提高。與荷瘤模型組比較，THPPS 高、中劑量組及黃芪多糖100 mg·kg-1組的花環(huán)率顯著升高(P<0.01)，THPPS低劑量組花環(huán)率有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表3和圖3。

3.5THPPS對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞唾液酸含量的影響 見(jiàn)表3。由表3可知，與正常組比較，荷瘤模型組紅細(xì)胞唾液酸含量極度降低(P<0.01)，與荷瘤模型組比較，THPPS干預(yù)各組的紅細(xì)胞唾液酸含量，均有不同程度升高，高、中劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與黃芪多糖組比較，THPPS高、中劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。

圖1不同組Lewis肺癌荷瘤小鼠紅細(xì)胞RBC-TRR的花環(huán)圖

A.正常組(×100)；B.荷瘤模型組(×100)；C.黃芪多糖組(×100);D.調(diào)衡方低劑量組(×100)；E.調(diào)衡方中劑量組(×100)；F.調(diào)衡方高劑量組(×100)。

Fig.1 Comparison of tumor-bearing mice RBC-TRR garlands between different groups

A.control group (×100)；B.model group (×100)；C.AGPS group (×100)；D.THPPS low dose group (×100)；E.THPPS middle dose group (×100)；F.THPPS high dose group (×100).

圖2不同組Lewis肺癌荷瘤小鼠紅細(xì)胞RBC-ICR的花環(huán)圖

A.正常組(×100)；B.荷瘤模型組(×100)；C.黃芪多糖組(×100);D.調(diào)衡方低劑量組(×100)；E.調(diào)衡方中劑量組(×100)；F.調(diào)衡方高劑量組(×100)。

Fig.2 Comparison of tumor-bearing mice RBC-ICR garlands between different groups

A.control group (×100)；B.model group (×100)；C.AGPS group (×100)；D.THPPS low dose group (×100)；E.THPPS middle dose group (×100)；F.THPPS high dose group (×100).

圖3不同組Lewis肺癌荷瘤小鼠RBC-C3bRR的花環(huán)圖

A.正常組(×100)；B.荷瘤模型組(×100)；C.黃芪多糖組(×100);D.調(diào)衡方低劑量組(×100)；E.調(diào)衡方中劑量組(×100)；F.調(diào)衡方高劑量組(×100)。

Fig.3 Comparison of tumor-bearing mice RBC-C3bRR garlands between different groups

A.control group (×100)；B.model group (×100)；C.AGPS group (×100)；D.THPPS low dose group (×100)；E.THPPS middle dose group (×100)；F.THPPS high dose group (×100).

表3THPPS對(duì)荷瘤小鼠RBC-C3bRR及紅細(xì)胞唾液酸含量的影響

Tab.3 The effects of THPPS on the content of sialic acid in red blood cells and RBC-C3bRR in tumor bearing mice

組別劑量/mg·kg-1RBC-C3bRR數(shù)/%唾液酸含量/mmol·L-1正常組NS43.80±5.182.10±0.29荷瘤模型組NS27.64±4.35##0.85±0.25##黃芪多糖組10034.13±3.35**1.35±0.27**調(diào)衡方低劑量組5028.57±2.06△△1.11±0.30調(diào)衡方中劑量組10037.35±4.16**1.79±0.35**△△調(diào)衡方高劑量組20037.71±5.07**1.82±0.50**△

注：正常組與荷瘤模型組比較##P<0.01；荷瘤模型組與各給藥組比較**P<0.01；黃芪多糖組與調(diào)衡方各劑組比較△P<0.05，△△P<0.01。

4 討論

自20世紀(jì)50年代發(fā)現(xiàn)真菌多糖抗腫瘤活性以來(lái)，對(duì)植物多糖的研究便成為一大熱點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)許多中藥多糖除有抗腫瘤、抗衰老和調(diào)控細(xì)胞增殖分化外，還對(duì)紅細(xì)胞免疫功能有促進(jìn)和調(diào)節(jié)作用[3-5]，如對(duì)黃芪、黨參、當(dāng)歸和茯苓多糖研究發(fā)現(xiàn)，這些中藥多糖均可提升機(jī)體紅細(xì)胞表面CR1的數(shù)量與活性，尤其是黃芪多糖效果最明顯。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，THPPS具有一定的抗腫瘤作用，其高劑量對(duì)Lewis肺癌的抑瘤率為49.78%。同時(shí)THPPS還能明顯提升脾臟、胸腺指數(shù)，說(shuō)明其對(duì)脾臟、胸腺的發(fā)育有一定的促進(jìn)作用。對(duì)調(diào)衡方已有的研究表明，該方不但對(duì)腫瘤有抑制作用，還有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用[1-2]。機(jī)體自身抗腫瘤過(guò)程除淋巴的細(xì)胞免疫、體液免疫之外，紅細(xì)胞也具有免疫和抗腫瘤作用，故本實(shí)驗(yàn)把固有免疫紅細(xì)胞表面CR1受體作為研究核心靶標(biāo)，以探討調(diào)衡方多糖對(duì)荷瘤小鼠固有紅細(xì)胞免疫黏附功能的影響。

紅細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分之一，大量研究顯示，機(jī)體內(nèi)紅細(xì)胞也具有一定的免疫功能[18]。血循環(huán)中紅細(xì)胞數(shù)為有核細(xì)胞數(shù)的1 000倍，分布于紅細(xì)胞上95%的CR1存在于血液循環(huán)中，因此紅細(xì)胞是IC(免疫復(fù)合物)主要清除者而非白細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞除清除IC外，還能直接增強(qiáng)NK細(xì)胞的抗腫瘤活性，同時(shí)紅細(xì)胞可使人T細(xì)胞活性增加及表面IL-2受體表達(dá)增多，可增加TNF(腫瘤壞死因子)與IFN-γ(干擾素)的產(chǎn)生[19]。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)許多不同腫瘤患者(乳腺、胃、大腸、肝、卵巢癌)體內(nèi)CR1(補(bǔ)體C3b受體)活性降低[20]，荷瘤體瘤塊小，機(jī)體無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，紅細(xì)胞免疫功能受抑制較輕，反之，紅細(xì)胞免疫受抑顯著增強(qiáng)。影響荷瘤體紅細(xì)胞免疫功能抑制的因素：荷瘤體內(nèi)抑制性T細(xì)胞(Treg)增多，而釋放抑制性因子，使CR1的活性受抑，如腫瘤微環(huán)境中產(chǎn)生的TGF-β和IL-10等抑制免疫活性的因子升高，而抑制紅細(xì)胞在骨髓中CR1的合成；荷瘤體內(nèi)CR1的數(shù)量?jī)H為正常機(jī)體的一半，使紅細(xì)胞黏附腫瘤細(xì)胞的能力降低，加之瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗原如CEA、AFP釋放增多，即所產(chǎn)生大量的IC占用了CR1，使有用的CR1減少；荷瘤體免疫功能紊亂，產(chǎn)生針對(duì)CR1的自身抗體，使CR1減少，同時(shí)，紅細(xì)胞在循環(huán)中，將結(jié)合在其上的IC遞交給肝、脾中的巨噬細(xì)胞處理時(shí)，CR1損傷丟失。CR1的降低意味著紅細(xì)胞免疫黏附促吞噬調(diào)理作用及清除IC功能低下，使IC在血液循環(huán)中增多，隨著體內(nèi)IC的升高，使機(jī)體抗腫瘤免疫遭受嚴(yán)重的破壞，這種惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移與免疫逃逸的后果。而多糖類可能修飾改變紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，從而使CR1活性增強(qiáng)。

紅細(xì)胞對(duì)腫瘤的免疫是通過(guò)其表面CR1免疫黏附(瘤細(xì)胞)以達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的目的。腫瘤紅細(xì)胞免疫的機(jī)制是荷瘤體的瘤細(xì)胞一方面激活旁路途徑產(chǎn)生C3b，另一方面能與補(bǔ)體C3b黏附，使RBC(紅細(xì)胞)通過(guò)C3b與腫瘤細(xì)胞形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬，發(fā)揮抗腫瘤作用，因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察THPPS對(duì)荷瘤小鼠紅細(xì)胞黏附腫瘤細(xì)胞的能力，與正常組比較，荷瘤模型組表現(xiàn)出紅細(xì)胞腫瘤花環(huán)率極度降低。這與臨床報(bào)道基本一致。經(jīng)過(guò)THPPS的治療后，THPPS干預(yù)各組的紅細(xì)胞腫瘤花環(huán)率，均有不同程度升高。

CR1是Fearon(1979年)從人RBC膜上純化分離得到的一種糖蛋白，作為RBC免疫重要物質(zhì)基礎(chǔ)的CR1(C3b受體)，其可黏附循環(huán)免疫復(fù)合物，通過(guò)提升吞噬細(xì)胞吞噬而增強(qiáng)荷瘤體對(duì)循環(huán)免疫復(fù)合物的清除能力[20]。荷瘤體內(nèi)因抗原產(chǎn)生的免疫復(fù)合物急聚增多，大大超出紅細(xì)胞免疫黏附清除的能力，導(dǎo)致荷瘤體紅細(xì)胞CR1的數(shù)量降低并失去活性，從而使荷瘤體抗腫瘤免疫力出現(xiàn)障礙，最終導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)紅細(xì)胞C3b受體的量降低。與正常組比較，荷瘤模型組紅細(xì)胞C3b黏附花環(huán)的能力下降，經(jīng)過(guò)調(diào)衡方的治療后各組均有不同程度的提高。結(jié)果表明，該方多糖能提升荷瘤小鼠紅細(xì)胞C3b受體數(shù)量，使其紅細(xì)胞免疫黏附作用增強(qiáng)，從而促進(jìn)紅細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的調(diào)理吞噬能力，可及時(shí)將循環(huán)免疫復(fù)合物清除。通過(guò)荷瘤體紅細(xì)胞C3b受體活性酵母花環(huán)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Lewis肺癌荷瘤小鼠模型對(duì)照組的花環(huán)率較正常組明顯降低，說(shuō)明荷瘤小鼠體內(nèi)RBC C3b受體活性與數(shù)量均降低，經(jīng)過(guò)THPPS的治療后，Lewis肺癌荷瘤小鼠的C3b受體活性及數(shù)量較模型對(duì)照組均有不同程度的升高，且與劑量呈正相關(guān)，提示THPPS可提升荷瘤小鼠紅細(xì)胞CR1的數(shù)量和活性，以抑制瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

唾液酸是紅細(xì)胞膜上CR1組分的重要構(gòu)成之一，其化學(xué)本質(zhì)是由膜糖蛋白構(gòu)成，紅細(xì)胞的許多功能與其含量密切相關(guān)，如膜表面受體功能、免疫應(yīng)答等均與其相關(guān)，因此，一旦紅細(xì)胞CR1唾液酸的含量降低，紅細(xì)胞免疫功能就降低，最終導(dǎo)致清除循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)出現(xiàn)障礙，CIC劇增，之后補(bǔ)體被激活而致病理免疫損傷。實(shí)驗(yàn)觀察了該方多糖對(duì)紅細(xì)胞膜唾液酸量的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組比較，荷瘤模型組紅細(xì)胞唾液酸含量極度降低，而THPPS干預(yù)各組的紅細(xì)胞唾液酸含量均有不同程度升高，與荷瘤模型組比較，THPPS高、中劑量組差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，荷瘤小鼠紅細(xì)胞膜上的唾液酸通過(guò)THPPS的干預(yù)，可使其含量及功能增強(qiáng)，使紅細(xì)胞膜上CR1的數(shù)量與活性得到提升，從而使荷瘤小鼠紅細(xì)胞免疫黏附能力增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖受到抑制，從而起到抗腫瘤的作用。