不同溫度及保存時間對糖化血紅蛋白檢測結(jié)果的影響

黃艷萍，祝 峰

HbA1c作為糖尿病血糖控制、干預(yù)治療、療效觀察及并發(fā)癥預(yù)測風險的有效指標[1]，檢測結(jié)果的準確性至關(guān)重要。近年來，HbA1c檢測方法和標準化已逐漸完善。實際工作中，筆者發(fā)現(xiàn)HbA1c的檢測不僅要依靠標準化操作[2]，標本的溶血時間、保存條件也起著重要的作用[3]。文獻[4]發(fā)現(xiàn)反復(fù)凍融對檢測結(jié)果沒有顯著影響。不同儀器對標本溶血時間、保存溫度、保存時間有不同的要求，本研究以O(shè)LIMPO特定蛋白分析儀為研究對象，探討預(yù)處理(溶血處理)標本不同溶血時間，未經(jīng)預(yù)處理的標本在不同溫度及不同保存時間的條件下，測定結(jié)果的穩(wěn)定性。

1 材料與方法

1.1 標本采集及保存 選取我院門診糖尿病患者10例，各抽取EDTA-k2抗凝全血2 ml。均無脂血、溶血、凝血及血紅蛋白變異體。每份標本充分混勻后立即溶血處理(取5 μl全血加入900 μl溶血液)后，分裝成6份，每份150 μl。在室溫下分裝成6組，每組共10個標本。A組立即檢測，B、C、D、E、F組分別在分裝后1、2、3、4、5 h檢測。同時，取上述新鮮標本5例各2 ml充分混勻后，每管分裝0.5 ml，共20管，分4組保存。A1組室溫(18～22 ℃)、B1組冷藏(2～8 ℃)、C1組冷凍(-18～-20 ℃) 、D1組低溫冷凍(-80 ℃以下)下保存，在1、2、3、8、10、15、16、40、80、180 d進行檢測。

1.2 試劑與儀器 OLIMPO特定蛋白分析儀及配套試劑(包括抗血清、溶血液和乳膠)、HbA1c校準品及質(zhì)控品。OLIMPO特定蛋白分析儀先進行定標，然后將室內(nèi)質(zhì)控與待測標本同時上機檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS22.0 統(tǒng)計軟件，不同溶血時間組與立即測定組的比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 HbA1c檢測結(jié)果 溶血后不同時間HbA1c檢測結(jié)果：A組(7.98±1.61)%；B組(7.97±1.61)%；C組(7.95±1.60)%；D組(7.94±1.61)%；E組(7.77±1.61)%；F組(7.46±1.57)%。與A組比較，F(xiàn)組差異有統(tǒng)計學意義(t=1.57,P<0.05)，其他各組與A組比較差異無統(tǒng)計學意義。表明預(yù)處理標本隨著溶血時間的延長，檢測結(jié)果逐漸降低。

2.2 -80 ℃以下保存標本HbA1c的檢測結(jié)果 -80 ℃條件下保存標本，HbA1c檢測結(jié)果的穩(wěn)定性好。標本1～5可接受范圍分別是6.45～6.73，6.77～7.08，5.05～5.39，7.20～7.47，8.27～8.59，見表1。

表1 -80 ℃以下保存不同時間標本HbA1c的檢測結(jié)果 (%)

2.3 室溫、冷凍條件下不同時間HbA1c結(jié)果 室溫保存標本，前2 d 5例標本檢測結(jié)果均在可接受范圍內(nèi)，第3天有2例不在可接受范圍內(nèi)，因此OLIMP檢測糖化血紅蛋白室溫下保存標本的結(jié)果可穩(wěn)定2 d。冷凍保存標本，前3 d 5例標本檢測結(jié)果均在可接受范圍內(nèi)，第4天有2例不在可接受范圍內(nèi)，因此OLIMP檢測糖化血紅蛋白冷凍保存標本的結(jié)果可穩(wěn)定3 d。見表2。

2.4 冷藏條件下不同時間HbA1c結(jié)果 冷藏(2～8 ℃)保存標本，前15 d 5例標本檢測結(jié)果均在可接受范圍內(nèi)，第16天有2例不在可接受范圍內(nèi)，因此OLIMP檢測糖化血紅蛋白冷藏保存標本的結(jié)果可穩(wěn)定15 d。

表2 室溫、冷凍條件下5例保存標本不同時間HbA1c檢測結(jié)果 (%)

注：表中打①為不可接受結(jié)果

表3 冷藏保存標本不同時間HbA1c檢測結(jié)果 (%)

注：表中打①為不可接受結(jié)果

3 討 論

目前，我國使用的糖尿病診斷標準是1999年世界衛(wèi)生組織(WHO)公布的基于血糖水平的診斷標準[6]，葡萄糖代謝水平受到進食、應(yīng)激等多種因素的影響。中老年糖尿病患者普遍存在血脂代謝紊亂、各器官功能下降等現(xiàn)象，血糖水平波動較大[7,8]，對糖尿病治療效果產(chǎn)生較大的影響。美國糖尿病協(xié)會(ADA)于2010年首次正式批準HbA1c作為糖尿病診斷標準之一[9]，其診斷界值為≥6.5%。目前HbA1c檢測已高度標準化，不需禁食，檢測便利且較血糖結(jié)果更為穩(wěn)定。ADA將HbA1c水平為5.7%～6.4%的患者歸類為“糖尿病高危人群”，用以取代“糖尿病前期診斷”。 在我國，雖然反對HbA1c作為糖尿病診斷標準的觀點依然存在，但HbA1c仍是糖尿病患者血糖控制的金標準[10，11]。HbA1c的形成是不可逆的，其濃度與紅細胞壽命和該時期內(nèi)血糖的平均濃度有關(guān)，不受血漿葡萄糖濃度波動而變化，也不受運動或食物的影響。HbA1c可反映過去6～8周的平均血糖濃度，為評估血糖的控制情況提供了可靠的實驗室指標。因此我們在實際工作中要高度重視HbA1c檢測結(jié)果的準確性，如需備檢，應(yīng)充分考慮標本預(yù)處理的溶血時間、保存溫度、保存時間等因素對結(jié)果的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，HbA1c預(yù)處理標本檢測結(jié)果室溫下可穩(wěn)定4 h；OLIMPO檢測HbA1c結(jié)果標本保存的時間分別為，室溫2 d，冷藏15 d，冷凍3 d，低溫冷凍穩(wěn)定半年以上。一般認為保存溫度越低，結(jié)果穩(wěn)定時間越長，但冷凍組比冷藏組結(jié)果的穩(wěn)定時間要短得多，可能由于冷凍溫度不夠低，導(dǎo)致血紅蛋白在冰凍過程中發(fā)生輕微的蛋白質(zhì)變性，再次復(fù)融時造成蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)改變，致使結(jié)果的穩(wěn)定性降低。而-80 ℃是一個極凍的過程，不會造成血紅蛋白的變性，復(fù)融后依然保持蛋白質(zhì)的活性。另外，血紅蛋白變異體、鐵、維生素B12、葉酸缺乏引起貧血等因素可導(dǎo)致HbA1c測定結(jié)果出現(xiàn)假性升高或降低[12]，不能真實反映患者的平均血糖水平。