陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)在常見陰道疾病診斷中的應(yīng)用

焦瑞寶，陳 然，周佳麗，劉 娜，章 文，唐吉斌

（銅陵市人民醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，安徽 銅陵 244009）

陰道分泌物檢測(cè)對(duì)陰道炎癥的診斷具有重要的作用，通常采用生理鹽水涂片鏡檢法，也有學(xué)者推薦采用革蘭染色鏡檢法觀察陰道清潔度、滴蟲、真菌以及線索細(xì)胞[1]。近年來(lái)，我國(guó)有不少?gòu)S家開發(fā)出相關(guān)試劑盒，借助陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)來(lái)判斷陰道微生態(tài)及病原體感染的狀況[2-3]。本研究采用干化學(xué)法，對(duì)初診陰道炎患者陰道分泌物5種酶學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。5種酶學(xué)指標(biāo)包括細(xì)菌性陰道病（bacterial vaginosis，BV）相關(guān)酶學(xué)指標(biāo)[脯氨酸氨基肽酶（proline iminopeptidase，PIP）和唾液酸苷酶（saliva neuraminidase，SNA）]以及外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲性陰道炎相關(guān)酶學(xué)指標(biāo)[凝固酶（coagulase，COA）、乙酰氨基葡萄糖苷酶（N-acetylglucosaminidase，NAG）和葡萄糖苷酶（glucosidase，GUS）]。另外，根據(jù)陰道分泌物的pH值，對(duì)滴蟲和真菌進(jìn)行區(qū)分。同時(shí)采用革蘭染色鏡檢法，探討陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)在BV、外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲性陰道炎診斷中的價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年11—12月于銅陵市人民醫(yī)院婦科就診的初診陰道炎患者1 800例，年齡（42.3±8.4）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：24 h內(nèi)有性生活、盆浴、陰道灌洗行為患者的樣本，肉眼可見的血性樣本，經(jīng)期及絕經(jīng)期患者樣本，局部用藥、正在服藥或停藥不超過(guò)1周的患者樣本。所有患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑

陰道炎五聯(lián)檢試劑盒Ⅱ（干化學(xué)酶法）由鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)為20170622-2；革蘭氏染色液（快速法）由珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；全自動(dòng)生殖道分泌物工作站由嘉興凱實(shí)生物科技有限公司生產(chǎn)；日本Olympus CX21生物顯微鏡。

1.3 方法

由銅陵市人民醫(yī)院婦科醫(yī)師常規(guī)采集患者陰道分泌物拭子2份，并送檢，一支陰道分泌物拭子用于革蘭染色鏡檢涂片，另一支陰道分泌物拭子用陰道炎五聯(lián)檢試劑盒Ⅱ?qū)Ｓ孟♂屢合疵摚Ｒ?guī)開啟全自動(dòng)生殖道分泌物工作站，將洗脫后溶液放置在工作站上相應(yīng)的位置，啟動(dòng)儀器進(jìn)行自動(dòng)加樣、溫育和檢測(cè)，通過(guò)工作站軟件對(duì)反應(yīng)板結(jié)果進(jìn)行分析，并給出檢測(cè)結(jié)果。將全自動(dòng)生殖道分泌物工作站5種酶學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果及BV、外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲性陰道炎3種疾病檢測(cè)結(jié)果，與革蘭染色鏡檢法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。率的比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在BV診斷中的比較

1 800例患者陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)BV的陽(yáng)性率低于革蘭染色鏡檢法（χ2=515.24，P＜0.001）。干化學(xué)法在BV診斷中的敏感性為45.39%，特異性為97.14%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為88.18%，陰性預(yù)測(cè)值為79.12%，符合率為80.61%，不符合率為19.39%。見表1。

2.2 PIP和SNA在BV診斷中的比較

261例BV患者陰道分泌物PIP的陽(yáng)性率高于SNA（χ2=11.52，P＜0.001）。見表2。

表1 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在BV診斷中的比較

表2 PIP和SNA在BV診斷中的比較

2.3 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

1 800例患者陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)外陰陰道假絲酵母菌病的陽(yáng)性率高于革蘭染色鏡檢法（χ2=142.36，P＜0.001）。干化學(xué)法在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的敏感性為44.68%，特異性為85.70%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為36.73%，陰性預(yù)測(cè)值為89.29%，符合率為79.28%，不符合率為20.72%。見表3。

2.4 COA、NAG和GUS在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

126例外陰陰道假絲酵母菌病患者陰道分泌物COA均陽(yáng)性，NAG和GUS檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.36，P=0.547）。見表4。

表3 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

表4 NAG和GUS在外陰陰道假絲酵母菌病診斷中的比較

2.5 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在滴蟲性陰道炎診斷中的比較

1 800例患者陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)滴蟲性陰道炎的陽(yáng)性率高于革蘭染色鏡檢法（χ2=537.70，P＜0.001）。干化學(xué)法在滴蟲性陰道炎診斷中的敏感性為92.31%，特異性為96.20%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為34.95%，陰性預(yù)測(cè)值為99.82%，符合率為96.11%，不符合率為3.89%。見表5。

表5 干化學(xué)法與革蘭染色鏡檢法在滴蟲性陰道炎診斷中的比較

2.6 COA、NAG和GUS在滴蟲性陰道炎診斷中的比較

36例滴蟲性陰道炎患者陰道分泌物COA均陽(yáng)性，NAG的陽(yáng)性率略高于GUS（χ2=5.36，P＜0.050）。見表6。

表6 NAG和GUS在滴蟲性陰道炎診斷中的比較

3 討論

生殖道感染是婦科門診常見多發(fā)病，陰道分泌物檢測(cè)對(duì)其診斷具有重要的作用，常用檢測(cè)方法有生理鹽水涂片鏡檢法、革蘭染色鏡檢法。然而，陰道分泌物干化學(xué)法檢測(cè)能否完全替代顯微鏡鏡檢法，目前結(jié)論尚不一致。

BV主要由陰道加德納菌、擬桿菌和動(dòng)彎桿菌等多種微生物引起，是一種無(wú)陰道粘膜炎癥表現(xiàn)的臨床綜合征[4]。唐吉斌等[5]認(rèn)為在BV微生態(tài)中，普雷沃菌和擬桿菌是SNA活性增加的主要病原菌，加德納菌和動(dòng)彎桿菌則具有PIP活性。PIP和SNA可作為診斷BV的指標(biāo)。外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲性陰道炎是由真菌或滴蟲感染引起的陰道炎癥。陰道炎五聯(lián)檢試劑盒Ⅱ與第1代試劑盒比較，除了包括原來(lái)就有的NAG檢測(cè)之外，還增加了COA和GUS檢測(cè)，共計(jì)3種酶學(xué)指標(biāo)，另外可根據(jù)滴蟲感染pH值升高的特點(diǎn)來(lái)對(duì)真菌和滴蟲感染進(jìn)行區(qū)分[6]。

本研究結(jié)果顯示，干化學(xué)法在BV、外陰陰道假絲酵母菌病和滴蟲性陰道炎診斷中的敏感性分別為45.39%、44.68%和92.31%，特異性分別為97.14%、85.70%和96.20%；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為88.18%、36.73%和34.95%，陰性預(yù)測(cè)值分別為79.12%、89.29%和99.82%；符合率分別為80.61%、79.28%和96.11%，不符合率分別為19.39%、20.72%和3.89%。

本研究革蘭染色鏡檢法檢測(cè)BV的陽(yáng)性率為31.94%（575/1 800）、檢測(cè)外陰陰道假絲酵母菌病的陽(yáng)性率為15.67%（282/1 800）、檢測(cè)滴蟲性陰道炎的陽(yáng)性率為2.17%（39/1 800），均低于余曉燕[7]報(bào)道的35.65%、18.13%和12.18%。這可能與二者研究例數(shù)、地區(qū)衛(wèi)生條件以及患者衛(wèi)生習(xí)慣不同有關(guān)。

本研究中干化學(xué)法有BV假陰性314例，其中219例革蘭染色鏡檢法結(jié)果弱陽(yáng)性，這可能是由于陰道分泌物中存在少量厭氧菌，革蘭染色鏡檢法可直接觀察到陰道分泌物細(xì)菌種類的變化，而酶含量較低未達(dá)到檢測(cè)閾值造成的。PIP和SNA同時(shí)陽(yáng)性者占BV患者的63.98%（167/261），單純1種酶陽(yáng)性者占36.02%（94/261），PIP陽(yáng)性率高于SNA。這可能與加德納菌和動(dòng)彎桿菌比普雷沃菌和擬桿菌更容易引起B(yǎng)V有關(guān)。

干化學(xué)法有外陰陰道假絲酵母菌病假陽(yáng)性217例，這可能是由于外陰陰道假絲酵母菌病患者治療后真菌消失，但真菌死亡后所釋放的生化標(biāo)志物仍部分存在于陰道分泌物中所致，也可能是因?yàn)榇嬖诰哂蠫US活性的微生物無(wú)乳鏈球菌、大腸埃希菌等，或存在具有COA活性的微生物金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、大腸埃希菌等，進(jìn)而導(dǎo)致儀器誤判為真菌感染[8]。282例外陰陰道假絲酵母菌病患者中有156例干化學(xué)法結(jié)果為陰性，這可能與陰道感染真菌中只有白色念珠菌和熱帶念珠菌產(chǎn)生NAG，而克柔念珠菌、光滑念珠菌等非白色念珠菌均不產(chǎn)生NAG有關(guān)[9]；或者是因?yàn)殛幍婪置谖镏姓婢^少，涂片可以偶見孢子，但生化標(biāo)志物含量極低，從而導(dǎo)致干化學(xué)法結(jié)果為假陰性。

1 761例革蘭染色鏡檢法滴蟲性陰道炎陰性患者中有67例干化學(xué)法結(jié)果為陽(yáng)性，其中15例是由于陰道分泌物pH值＞4.8，儀器誤將真菌判為滴蟲所致；其他可能是由具有GUS和COA活性的無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、大腸埃希菌等雜菌造成[10]。

126例外陰陰道假絲酵母菌病患者和36例滴蟲性陰道炎患者陰道分泌物COA的陽(yáng)性率均為100.00%，分別有52.38%（66/126）和66.67%（24/36）的患者NAG和GUS同時(shí)陽(yáng)性，這說(shuō)明無(wú)論是假絲酵母菌感染還是滴蟲感染，都會(huì)產(chǎn)生COA，導(dǎo)致干化學(xué)法檢測(cè)COA結(jié)果陽(yáng)性，滴蟲感染比假絲酵母菌感染更容易產(chǎn)生上述2種酶。

綜上所述，革蘭染色鏡檢法可直接觀察菌群密集度、多樣性和優(yōu)勢(shì)菌[11]，干化學(xué)法可實(shí)現(xiàn)儀器自動(dòng)化以及加樣、孵育等檢測(cè)過(guò)程的統(tǒng)一化、標(biāo)準(zhǔn)化。儀器通過(guò)檢測(cè)陰道分泌物中化學(xué)組分水平，進(jìn)而推算病原體的存在，容易受病原體水平的影響，也可受陰道分泌物中混雜微生物的干擾，從而影響干化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果；也可受已死亡病原體內(nèi)化學(xué)成分的干擾，從而影響檢測(cè)結(jié)果。因此，陰道疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷目前尚不能用干化學(xué)法完全替代革蘭染色鏡檢法，需充分利用2種方法的各自優(yōu)勢(shì)，互相補(bǔ)充，以提高臨床檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。