輔助生殖技術(shù)治療不孕不育癥的研究

莎如拉 云志中 田瀟峰 任宇 孫文芳 馬玉珍

近年來不孕不育癥患者呈逐年增長趨勢, 給患者帶來了巨大的精神壓力和家庭的不穩(wěn)定。自從1978年世界上首例“試管嬰兒”誕生以來, 輔助生殖技術(shù)應(yīng)用于不孕不育癥的治療, 到目前為止, 出生的試管嬰兒已經(jīng)達(dá)到500萬人, 輔助生殖技術(shù)成為了不孕不育夫婦重要的治療手段。本研究回顧性分析了2010年6月～2012年12月在內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院用輔助生殖技術(shù)治療不孕不育癥患者的情況, 比較不同助孕方案下卵母細(xì)胞的成熟率、優(yōu)胚率、著床率、妊娠率以及出生嬰兒的健康情況, 研究輔助生殖技術(shù)治療的優(yōu)越性和安全性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年6月～2012年12月在內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院就診的不孕不育癥患者118例, 其中63例行常規(guī)IVF-ET助孕；52例行單精子卵胞漿內(nèi)注射(ICSI-ET)(其中15例行Half-ICSI)助孕, 其中3例取卵后卵母細(xì)胞未受精, 取消移植。115例輔助生殖助孕患者平均年齡為32.22歲,平均不孕年限為3.76年, 基礎(chǔ)卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素 (LH)、雌二醇 (E2)平均值分別為 4.51 mIU/ml、3.37 mIU/ml、40.50 pg/ml；取卵日 E2平均為 2868.81 pg/ml。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 促排卵方案 控制性促排卵方案采用促性腺激素釋放激素(GnRHa, 商品名：達(dá)菲林)長/短方案, 微刺激方案,促排卵藥物為重組FSH(商品名：果納芬)及尿促性腺激素(HMG)。1～2 個(gè)主導(dǎo)卵泡直徑≥18 mm 時(shí) , 注射 hCG 10000 IU或重組 hCG(商品名 ：艾澤 )250 μg, 34～36 h 行陰道 B 超引導(dǎo)下穿刺取卵。

1.2.2 體外受精 取出成熟卵母細(xì)胞復(fù)合體于1 ml受精液中, 5.5% CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。同時(shí)取出精液梯度離心分離活精子, 將適量前向運(yùn)動(dòng)的精子加入卵母細(xì)胞中, 受精4 h,顯微鏡下去顆粒細(xì)胞, 將卵母細(xì)胞移到發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng), 觀察原核確定受精情況。

1.2.3 卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射 取出成熟卵母細(xì)胞復(fù)合體于 1 ml受精液中 , 5.5%CO2、37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2 h, 10% 透明質(zhì)酸酶去顆粒細(xì)胞, 再將卵母細(xì)胞培養(yǎng)2 h, 在顯微鏡下挑選前向運(yùn)動(dòng)精子尾部制動(dòng)后, 將其注射卵母細(xì)胞胞漿中, 移入發(fā)育液中繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.4 胚胎移植 根據(jù)胚胎中細(xì)胞數(shù)、胞質(zhì)碎片以及細(xì)胞均一性將胚胎分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級(jí)。35歲以下患者移植胚胎2枚, 35歲以上患者移植3枚, 有卵巢過度刺激風(fēng)險(xiǎn)者,取消胚胎移植。

1.2.5 胚胎的冷凍保存 移植后剩余胚胎經(jīng)玻璃化冷凍技術(shù)冷凍保存于液氮中。

1.3 觀察指標(biāo) 胚胎移植后14 d測血hCG, 確定是否妊娠,移植后28～30 d B超確定孕囊。并且對(duì)于試管嬰兒進(jìn)行隨訪。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 輔助生殖助孕患者的基本特征 卵母細(xì)胞成熟率為 85.77%, 受精率為 79.78%, 優(yōu)胚率為 61.21%, 著床率為35.66%, 妊娠率為 55.65%, 累積妊娠率為 62.61%, 其中生化妊娠為5例, 流產(chǎn)7例, 宮外孕1例, 持續(xù)妊娠率為51.30%,至2013年8月56例孕婦出生試管嬰兒72例, 雙胎率為28.57%, 活產(chǎn)率為 97.22%, 男嬰 34 例 , 女嬰 38 例 , 所有嬰兒均身體健康, 發(fā)育正常。

2.2 不同助孕方式胚胎及妊娠情況分析 115例患者在助孕方式上分別選擇了IVF、ICSI或IVF/ICSI三種方案, 三種助孕方案患者在卵母細(xì)胞成熟率、受精率、優(yōu)胚率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。IVF/ICSI方案著床率、妊娠率和持續(xù)妊娠率均顯著高于IVF方案和ICSI方案, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.3 不同促排卵方案助孕患者胚胎及妊娠情況 三種促排卵方案患者卵母細(xì)胞成熟率、受精率、優(yōu)胚率、著床率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 長方案和微刺激方案妊娠率和持續(xù)妊娠率明顯高于短方案, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。微刺激方案與長方案妊娠率、持續(xù)妊娠率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)。見表 2。

表1 不同受孕方式輔助生殖情況比較(%)

表2 不同促排卵方案輔助生殖情況比較

2.4 試管嬰兒出生情況比較 56例患者經(jīng)輔助生殖技術(shù)生產(chǎn)試管嬰兒72例, 雙胎率為28.57%, 其中早產(chǎn)4例, 56例分娩患者中, 剖宮產(chǎn)47例。胎兒平均體重2911.06 g, 平均身長50.04 cm, Apgar評(píng)分 8.46 分。

3 討論

IVF和ICSI是目前人類輔助生殖領(lǐng)域最常用的技術(shù)。通過數(shù)據(jù)比較發(fā)現(xiàn)IVF、ICSI以及IVF/ICSI方案在受精率、優(yōu)胚率和胚胎著床率等方面沒有顯著性差異, 而IVF/ICSI方案的妊娠率顯著高于IVF和ICSI方案, 因此, 針對(duì)獲卵數(shù)較多且不明原因不孕多年以及IVF受精失敗的患者采用部分ICSI, 避免了周期失敗率 , 獲良好的臨床妊娠結(jié)局［1-3］。

臨床上常用的超促排卵方案包括長、短、超短、超長、1/5長方案各有其優(yōu)勢［4,5］。長方案因其對(duì)LH的抑制迅速并持久而被用于年輕、月經(jīng)周期規(guī)律的婦女；短方案因其有上調(diào)節(jié)作用而用于年齡偏大和既往有排卵障礙的婦女。但短方案促排卵周期中卵泡發(fā)育同步性較差, 可能造成獲卵數(shù)較少；微刺激方案不抑制內(nèi)源性FSH的升高, 模擬生理狀態(tài)下卵子的生長, 減少外源促性腺激素(Gn)的作用, 降低卵巢過度刺激綜合征(OHSS)的發(fā)生, 減少出生缺陷及出生后的遠(yuǎn)期風(fēng)險(xiǎn), 是卵巢儲(chǔ)備能力不足患者的優(yōu)先之選；在本中心115例試管嬰兒周期中長、短、微刺激方案的采用率分別為79.46%、8.93%和6.25%, 在獲卵數(shù)方面長方案顯著優(yōu)于短方案、微刺激方案, 在妊娠率、持續(xù)妊娠率方面短方案較長方案與微刺激方案更高, 長方案與微刺激方案之間比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。由此可見長方案的使用具有優(yōu)越性,獲得了55%以上的臨床妊娠率, 而在處理特殊患者時(shí)采用個(gè)體化的短方案、微刺激方案等能夠很大限度地改善助孕效果,使更多患者獲得生育的機(jī)會(huì)。

試管嬰兒的健康狀況是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。目前, 國外的研究認(rèn)為試管嬰兒的生長和健康與自然受孕兒并無顯著性差異, 慢性疾病和常見病的發(fā)生率未見增加, 其智力、情感和心理發(fā)育也與自然受孕相似；同時(shí), 臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示試管嬰兒的早產(chǎn)率和流產(chǎn)率也接近自然妊娠, 但多胎妊娠率較高［6,7］。本中心 56例分娩患者出生試管嬰兒 72例 , 其中男嬰34例, 女嬰38例。雙胎率為28.57%, 高于自然受孕。新生試管嬰兒的平均出生身長, 體重均達(dá)到正常標(biāo)準(zhǔn), 并且胎兒出生后的生長及健康狀況良好。與同期出生的自然受孕胎兒比較均沒有顯著性差異。雙胎率顯著高于自然受孕婦女。

綜上所述, 試管嬰兒技術(shù)作為一種積極的人工助孕手段不僅能夠?qū)崿F(xiàn)不孕不育夫婦孕育生命的愿望, 而且能夠獲得一個(gè)與自然受孕兒童相同的健康后代。