經(jīng)典免疫學實驗教學的一些體會

◆趙漢寧 吳 瑗 米 娜

(廣東醫(yī)科大學微生物免疫學教研室)

經(jīng)典免疫學抗原抗體反應實驗課開展多年，授課教師如能靈活采用不同授課方法，也有助于學生加深對深奧抽象的醫(yī)學免疫學理論內(nèi)容的理解掌握，并且能加強學生的實驗操作技能，提高動手能力，激發(fā)其學習興趣。

一、凝集反應

經(jīng)典免疫學凝集反應實驗中，玻片凝集是重點操作內(nèi)容之一，適合采用以教師提出問題引導，學生主導自行設計實驗路線并開展操作。教師如何設置問題并引導學生開展實驗呢？首先結合實際情況，每班進行分組操作，實驗材料按照分組發(fā)放到臺面上。帶課老師首先簡要講述凝集反應概念，然后進入主題，圍繞如何開展玻片凝集實驗設置如下幾個問題，通過玻片凝聚實驗如何鑒定出斜面培養(yǎng)基上的未知細菌？如何設計好實驗路線？應該設立哪些對照組？操作過程要注意哪些事項？觀察實驗結果除了凝集塊還注意哪些現(xiàn)象？對實驗結果如何分析？如何判斷結果中假陽性或假陰性？提示參考實驗指導教材相關內(nèi)容和結合桌面上分發(fā)的試劑材料等來設計實驗，實驗操作結束后每一組派代表發(fā)言并把實驗結果畫在黑板上，然后教師針對實驗進行總結，還可結合玻片凝集反應講述抗原抗體結合反應的特點和討論抗原抗體反應的影響因素。

教師作用主要是引導同學們提出問題，分析問題，解決問題，教師作用從臺前變成幕后，盡管角色改變，但工作量不減，教師課前必須做好充分準備，對實驗設計、操作注意事項、如何結果分析及討論做到心中有底。問題提出后，同學們就開始積極活動起來，首先是同學們組內(nèi)討論如何設計實驗，觀察桌面上有哪些器材試劑？學生查資料的查資料，思考的思考，觀察的觀察，討論的討論，都動起來，最后大家統(tǒng)一確定實驗方案，有些組存在疑問就跟老師及時溝通討論，對于同學們提出問題，教師耐心解答，試管凝集實驗也可通過類似教學方法開展。

二、沉淀反應

對流免疫電泳是沉淀反應的重點內(nèi)容之一，要求同學們動手操作。與凝集反應教學方法有所不同，沉淀反應授課方式教師先講解示范，然后同學們再進行實驗操作。教師上課首先開始講解沉淀反應概念，本次實驗主要是凝膠內(nèi)沉淀試驗，對流免疫電泳為重點操作實驗之一。以對流免疫電泳為例，時間安排上先講解這部分內(nèi)容。緊接著馬上進行此實驗操作，跑電泳期間再講解其他的沉淀反應，如單項擴散，火箭電泳，雙向擴散，免疫固定電泳等示教內(nèi)容。這里特別強調(diào)教師講解對流免疫電泳整個過程，包括從制板、打孔、加樣、搭橋、電泳，都要演示操作給同學們看，邊演示邊講解，關鍵地方特別強調(diào)。比如瓊脂制板中要趁熱吸取4ml瓊脂，倒板一氣呵成。等幾分鐘膠凝固才可打孔，如何才能打好孔？首先捏緊膠頭把空氣盡量排出來，放開膠頭吸瓊脂時動作要迅速。加樣時，可用毛細吸管或微量進樣器，保證樣品加到孔；加樣要加滿，但不能溢出，絕不能讓兩個孔之間樣品溢出串在一起，如何鑒定小孔加滿樣品呢？一方面可以從側(cè)面觀察，另一方面也可以用微量進樣器定量10微升樣品加入，當然前提是孔必須打好。搭橋濾紙片必須濕潤才能導電，可用鑷子夾濾紙片，要求盡量一次性就搭好橋。電泳前特別提醒陰陽極不能放錯，抗原放陰極端，可記諧音“原因”。特別強調(diào)注意用電安全，關電才能拿出玻片觀察結果。分析結果可采用提問題方式，例如出現(xiàn)和不出現(xiàn)沉淀線說明什么？沉淀線粗細又說明什么？為什么要求抗原放在陰極，抗體放在陽極？電壓、緩沖液PH值對結果有何影響？利用對流免疫電泳原理并結合操作過程來分析這些問題。特別強調(diào)，教師注意控制講解示范時間，要留給同學們足夠時間來操作實驗。

三、結果

四、討論

玻片凝集反應實驗操作更適合采用教師提出問題引導，同學們自行設計實驗路線并完成實驗操作的教學方法。首先，無菌操作等基本實驗技術同學們前面做微生物實驗時已經(jīng)學過；其次，免疫學抗原抗體特異結合理論課已經(jīng)講過；最后，玻片凝集實驗是本次實驗重點內(nèi)容之一，玻片凝集實驗操作內(nèi)容是用已知診斷血清檢測未知細菌，實驗設計不復雜，操作相對簡單，結果容易出現(xiàn)，操作時間不是太久，整個實驗過程從設計，操作，結果，討論分析是完整的。另外，同學們?nèi)绻鍪』蜻€想重復做，還有時間再做。對流免疫電泳實驗為什么特別強調(diào)教師詳細講解示范然后同學再操作呢？理由如下。

首先，沉淀反應實驗原理比較抽象復雜、操作要求更精細準確、對流免疫電泳注意事項比較多，相對繁瑣等；其次，對流免疫電泳過程需要40～60分鐘左右才能出現(xiàn)結果，如果實驗失敗沒有出現(xiàn)預想結果，這堂課就沒有時間重復做了；最后，理想的實驗結果不容易出現(xiàn)，稍不注意某個細節(jié)，實驗現(xiàn)象不像凝集反應結果那么明顯，所以操作之前，教師要強調(diào)注意事項，那些關鍵細節(jié)特別指出，一定要先邊示教邊講解。對流免疫電泳由老師先詳細地講解實驗內(nèi)容和實驗步驟，十分有利于學生短時間內(nèi)掌握實驗注意事項等基礎知識，規(guī)定時間內(nèi)能順利完成實驗。

五、結語

針對經(jīng)典免疫學抗原抗體反應實驗，教學方法要因地制宜，根據(jù)具體的實驗內(nèi)容以及操作要求來采用不同的教學方法，值得一提的是，經(jīng)典免疫學內(nèi)容略顯陳舊，課時偏少等，如何深化免疫學實驗教學改革，以使學生更好地掌握相關知識并培養(yǎng)綜合能力，值得進一步探討。