食管鱗癌中DNA結合/分化抑制蛋白-1和血管內皮生長因子-D表達及意義

祁艷娟 秦愛萍 龍啟福 陳 凡 馬建青 周 毛 常巧梅

(青海大學附屬醫院腫瘤放療科，青海 西寧 810001)

食管鱗癌主要見于中老年人。上皮細胞在腫瘤性因素刺激下癌變后形成浸潤性癌，進展時常伴有淋巴結播散〔1〕。腫瘤在進展時間質可以伴有淋巴管新生后并形成有功能的淋巴管，這被認為是與腫瘤細胞最近的淋巴管，且易于被腫瘤細胞生長時侵襲。與淋巴管生成最重要的因子是血管內皮生長因子(VEGF)-D，其與受體(VEGFR)3結合后使淋巴管內皮細胞增殖，為轉移提供重要的管腔結構〔2,3〕，DNA結合/分化抑制蛋白(ID)-1是重要影響因素之一。ID-1與腫瘤細胞的增殖和轉移有關〔4〕。本文關注食管鱗癌中ID-1和VEGF-D的表達，分析其相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2016年10月至2017年12月青海大學附屬醫院住院治療、經病理學確診、行手術根治的食管鱗癌患者87例為觀察組，納入標準：①臨床資料完整；②符合WHO中的診斷標準；③患者或家屬簽署知情同意書。排除標準：①伴有其他器官惡性腫瘤；②有先天性疾病或遺傳性疾?。虎塾邢朗中g史；④術前放、化療。其中男45例，女42例，年齡55～86歲，平均63.8歲。食管切緣(距腫物邊緣>2 cm)的黏膜組織23例為對照組。其中男12例，女11例，年齡57～83歲，平均61.4歲。兩組性別構成和年齡差異無統計學意義。

1.2ID-1和VEGF-D表達 ID-1和VEGF-D檢測均基于術后石蠟切片，應用免疫組化二步法完成，ID-1和VEGF-D試劑均購自北京博奧森生物技術有限公司。實驗中ID-1濃度為1∶100，VEGF-D濃度為1∶300。操作中切片均有陽性質控，嚴格按說明書進行。

1.3ID-1和VEGF-D結果的判讀 ID-1和VEGF-D以細胞質中染成棕黃色為陽性。按著色強度和著色百分率的乘積進行評分。著色強度：無著色0分；弱著色1分，中等程度著色2分，強著色3分。著色百分率：選擇4個高倍視野，以<5%為0分，5%～10%為1分，以11%～30%為2分，以31%～50%為3分，以>50%為4分。最終以≤3分為陰性，以>3分為陽性。

1.4統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組ID-1和VEGF-D的比較 兩組ID-1和VEGF-D陽性差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 兩組ID-1和VEGF-D陽性表達的比較〔n(%)〕

2.2ID-1和VEGF-D在觀察組不同臨床特征中表達差異 觀察組中ID-1和VEGF-D表達與脈管累犯和淋巴結轉移相關，ID-1表達與腫瘤的增殖指數和分化程度相關。二者與炎細胞浸潤無相關性。見表2。

表2 ID-1和VEGF-D在觀察組不同臨床特征中陽性表達〔n(%)〕

2.3觀察組中ID-1和VEGF-D表達的相關性 ID-1和VEGF-D呈正相關(r=0.46，P=0.030)。

3 討 論

食管癌起源于黏膜的鱗狀上皮，與形成上皮的干細胞有一定關系，出現異型增生、癌變，進展時表現出腫瘤細胞對間質的侵襲作用，并對轉移起促進作用。腫瘤在進展過程中，可以伴有淋巴道播散，也是上皮源性腫瘤重要的轉移途徑〔5,6〕。間質中的脈管結構對轉移起重要的輔助作用。其中間質的小淋巴管是最易受侵襲的。研究認為在腫瘤進展過程中，新生腫瘤組織的間質可以有淋巴管的新生，這種淋巴管為腫瘤轉移提供了最便捷的通路〔7,8〕。引起淋巴管增殖的有淋巴管生成因子，其中VEGF-D是主要因子，其在腫瘤進展過程中由腫瘤細胞產生，并可以激活其受體，與受體結合后促進淋巴管內皮細胞的增殖，形成枝芽狀的生長，在淋巴液的沖擊作用下形成管腔，形成具有特異性結構和功能的淋巴管〔9,10〕。腫瘤細胞可以通過此途徑發生淋巴管轉移。調節淋巴管生成因子的因素較多，其中ID-1可能是重要的調控因子。ID-1是螺旋-環-螺旋(HLH)轉錄因子的主要成員，具有癌基因的特征〔11〕。研究顯示ID-1陽性表達的腫瘤細胞具有細胞小、細胞核小、核染色深等特征，認為其具有干細胞的“永生化”的特征和功能〔12〕。ID-1表達升高時，可以阻止細胞的分化，使其處于原始狀態，并具有異源性生長的特征，此種腫瘤細胞表現為高增殖和高遷移狀態。腫瘤中ID-1過度表達的細胞能使其老化時間增強，與抑制凋亡的作用相似，使腫瘤細胞持續對機體進行破壞和侵襲〔13〕。ID-1的作用也可能具有多樣性，如對脈管生成的調控作用等〔14〕。

本研究結果顯示ID-1和VEGF-D高表達是促進腫瘤形成的重要因素，也是引起腫瘤細胞異型的重要蛋白因素，二者是促癌生成的基因。ID-1和VEGF-D是腫瘤細胞播散的重要因素。ID-1具有引起腫瘤失控性增生的特征，并抑制細胞由幼稚分化為成熟的細胞〔15〕。本文結果提示ID-1和VEGF-D與腫瘤細胞進展時的間質反應無關。ID-1 表達升高時可以調節鱗狀細胞分化，這是腫瘤細胞內在調節過程，使腫瘤細胞停滯于增殖的不同時期，也使腫瘤停滯在不同原始階段，此時細胞異型程度明顯，與起源組織的差別小，形成接近幼稚的干細胞形態，具有明顯增殖活性。本文提示ID-1和VEGF-D呈正相關，ID-1高表達是促進淋巴管生成因子形成的因素之一〔16〕，ID-1可能是上游基因，調節VEGF-D、表皮生長因子受體(EGFR)和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)等信號通路，引起細胞增殖和遷移〔17〕。但ID-1/VEGF-D/VEGFR-3是否作為淋巴管生成直接通路有待證實。