早產兒游離肉堿和酰基肉堿代謝變化特點*

楊宇奇，韓小亞，周紅，龍偉，虞斌

（江蘇省常州市婦幼保健院，江蘇 常州 213003）

早產兒是導致新生兒發病和死亡的重要原因之一。真正了解該階段小兒的代謝特征和營養素需要的特殊性，是臨床實施正確營養管理過程中不可忽視的問題[1]。本研究采用串聯質譜技術檢測早產兒游離肉堿和酰基肉堿的代謝水平，分析其特點，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2015年4月-2016年12月該院出生的活產早產兒1 992例，男1 104例，女888例。按是否合并低出生體重將其分為兩大組：單純早產組（孕周＜37周且體重＞2 500 g）765例，早產合并低體重組（孕周＜37周且體重＜2 500 g）1 227例。選擇同期4 035例正常活產新生兒作為正常對照組（孕周＞37周且體重＞2 500 g）。其中，男性2 088例（51.7%），女性1 947例（48.3%）。排除孕婦發生不良妊娠情況。見表1。

1.2 器材和試劑

采用Waters AcquityTMTQD串聯質譜儀，Waters 2777C自動進樣器，Waters 1525 μ HPLC泵，非衍生化多種氨基酸、肉堿及琥珀酰丙酮測定試劑盒（neo base non-derivatized MSMS Kit，美國Perkin Elmer公司）進行篩查檢測。

表1 3組臨床資料比較

1.3 樣本采集

按照新生兒疾病篩查技術規范（2010版）出生72 h后、充分哺乳6次后足跟采集4個血斑（濾紙片Schleicher & Schuell 903）。低出生體重者待2 500 g或出生后20 d采血。血片采集后懸空平置自然干燥成深褐色，塑料袋內封口，在規定時間內送至新生兒疾病篩查中心實驗室，置入4℃冰箱保存備檢。

1.4 實驗操作

按本實驗室串聯質譜新生兒疾病篩查方法進行實驗。首先從濾紙片上打下3.2 mm左右的血斑放入V底微孔板，每孔加入100 μl內標工作液，黏貼膜封板，孵育振蕩45 min，溫度45℃，轉速4 100～4 700 r/m，然后轉移75 μl至V型無包被潔凈微孔板，靜止2 h后上機檢測樣本肉堿水平[包括游離肉堿（C0）、乙酰基肉堿（C2）、丙酰基肉堿（C3）、丙二酰肉堿/3-羥基-丁酰基肉堿（C3DC/C4OH）、丁酰肉堿（C4）、肉堿（C4DC/CSOH）、異戊酰肉堿（C5）、異戊酰肉堿（C5∶1）、戊二酰肉堿/3-羥基-異戊酰肉堿（C5DC/C6OH）、甲基丙二酰肉堿/3-羥基-異戊酰肉堿（C5DC/C6OH）、已二酰肉堿（C6DC）、辛酰肉堿（C8）、辛烯酰肉堿（C8∶1）、癸酰肉堿（C10）、癸烯酰肉堿（C10∶1）、癸二烯酰肉堿（C10∶2）、十二碳酰肉堿（C12）、十二碳烯酰肉堿（C12∶1）、十四碳酰肉堿（C14）、十四碳烯酰肉堿（C14∶1）、十四碳二烯酰基肉堿（C14∶2）、3-羥基-十四碳酰肉堿（C14OH）、十六碳酰肉堿（C16）、十六碳烯酰肉堿（C16∶1）、3-羥基-十六碳酰肉堿（C16OH）、3-羥基-十六碳烯酰肉堿（C16∶1OH）、18碳酰肉堿（C18）、18碳烯酰肉堿（C18∶1）、18碳二烯酰肉堿（C18∶2）、3-羥基-十八碳酰肉堿（C18OH）及3-羥基-十八碳烯酰肉堿（C18∶1OH）]。

1.5 統計學方法

數據分析采用易侕Empowerstats軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，偏態分布以中位數（Median）、第25百分位數和第75百分位數（P25，P75）表示。根據資料分布類型，采用單因素方差分析和Kruskal Wallis秩和檢驗比較多組間差異。多組比較差異有統計學意義后，采用LSD-t檢驗和Mann-WhitneyU檢驗比較兩組變量的差異，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般結果

1 992例活產早產兒中61.6%合并有低出生體重，38.4%出生時體重＞2 500 g。與正常對照組比較（2 843.97g vs 3 413.39 g），差異有統計學意義（P＜0.05）。所有早產病例中，104例（5.2%）分娩孕周＜30周、30～＜34周563例（28.3%）、34～ ＜37周 1 325例（66.5%）。

2.2 早產兒酰基肉堿代謝水平特點

采用單因素方差分析和Kruskal Wallis秩和檢驗比較多組間差異，除C10與C10∶2以外，其余的29種肉堿在早產組與正常對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。早產組與正常組比較，其中C0、C3、C4、C5、C5DC+C6OH、C6、C8及 C18∶ 2指標 升 高；C2、C3DC+C4OH、C4DC+C5OH、C6DC、 C8∶ 1、C10∶ 1、C12、C12：1、C14，C14∶ 1、C14∶ 2、C14OH、C16、C16∶ 1、C16∶ 1OH、C18、C18∶1、C18∶1OH及C18∶OH指標降低（P＜0.05）。當早產合并低體重時，大多上述肉堿與正常新生兒的差異將進一步擴大。見表2。

表2 早產兒全血肉堿代謝水平 （μmol/L）

表3 胎齡分組 （μmol/L）

2.3 早產兒酰基肉堿與孕周的關系

將765例單純早產兒按出生胎齡進行分組分析發現，血片中檢測到的C0、C3、C5及C18∶2的值隨胎齡的增長而遞減，而C10、C10∶1、C14∶1隨胎齡的增加也遞減。見表3。

3 討論

3.1 游離肉堿

肉堿的功能在20世紀50年代已經被闡明[2]，人體內的肉堿分為兩類（即游離肉堿和酰基肉堿），其分布在能量供應需求高的組織中，是細胞內能量代謝的必須物質。其中游離肉堿作為長鏈脂肪酸進入線粒體的載體，在脂肪酸氧化代謝過程中起著重要的作用。本研究發現，早產兒組與正常新生兒組比較，血片中的游離肉堿濃度有差異，早產兒組游離肉堿高于正常對照組，且當合并低體重時差異增大；同時按胎齡統計765例早產兒發現，血漿游離肉堿隨著胎齡的增加逐漸降低。有文獻報道[3]，孕后期胎兒體內肉堿主動向組織內轉運，因此血漿肉堿逐漸下降而組織中肉堿逐漸上升。而早產兒尚未完成體內游離肉堿向組織轉運，血漿游離肉堿下降的過程，因此早產兒血漿游離肉堿高于足月兒，本研究結果與此相符。EMAMINAINI等[4]認為，出生低體重兒血漿游離肉堿水平的增高還可能預示著組織攝入肉堿不足，出生后轉運到肝臟、骨骼肌和腦組織的肉堿增加。

3.2 酰基肉堿

酰基肉堿是肉堿是與氨基酸或脂肪酸代謝物結合的一類酯類物質。本研究將早產兒組酰基肉堿與正常對照組比較，除C10與C10∶2外，其他均有差異。早產兒組中大部分短鏈、中鏈酰基肉堿指標高于正常對照組，絕大不部分長鏈酰基肉堿早產組低于正常對照組。有報道認為[5]，早產組血液中中鏈脂肪酸的濃度高于足月兒反應機體的一種自我調節狀態，而長鏈脂肪酸在血液中的濃度反應機體的生理和營養狀態，早產組血漿長鏈酰基肉堿大部分低于足月組。人體中肝和肌肉是進行脂肪酸氧化最活躍的組織，圍產期新生兒脂肪分解迅速利用的是皮下棕色脂肪組織而并非像營養不良患兒一樣利用的肌肉組織，因此圍產期新生兒肝細胞內中鏈酰基輔酶相對充足，而粒體內膜的肉堿棕櫚酰基轉移酶Ⅱ（CPTⅡ）相對不足[6]。由此筆者推斷分析，早產兒由于中鏈酰基輔酶相對充足，因此中鏈酰基C10變化差異并不大。

本研究與國內外許多文獻報道的情況大致相符但也有部分指標存在差異。如董麗萍等[7]發現，山東魯中地區早產兒C0、C3、C4、C5、C5∶ 1、C5DC+C6OH、C8、C18∶2高于足月兒，而C3DC+C4OH、C4DC+C5OH、C6DC、C10、C10∶ 1、C12、C12∶ 1、C14∶ 1、C14OH、C16、C16∶ 1、C16∶ 1OH、C16OH、C18、C18∶1OH及C18OH低于足月兒；而本研究發現單純早產兒C3高于正常組且隨胎齡增加而逐漸降低，但當合并低體重時均值反而會低于正常組，這與山東魯中地區統計的C3低體重兒高于正常組相反。吳鷹軍等[8]研究101例新生兒發現C0、C4DC、C14、C16、C16∶ 1、C18及 C18∶ 1隨 著妊娠時間的增加而升高，結果中C0指標與本研究結果相反。而IMAN MANDOUR等[9]統計131例早產兒出生后第5天和第14天以及足月第5天后的發現早產兒中血漿肉堿中大部分在過早組（第5天）中提高（C0，C4，C5，C6，C8，C10∶1，C18∶1-OH），其中C10∶1和C18∶1-OH的結果又與本研究及董麗萍、吳鷹軍等相悖。該差異可能是因為生物樣本的復雜性（人群、種族及地區差異等），加上分析技術和方法學的差異造成。由于代謝組學分析技術和操作條件的多樣化，使得大量產生的數據和結果缺乏規范性，這給代謝組學數據的采集、存儲、查詢、比較、共享及整合等帶來諸多不便[10]。因此如果想比較或共享早產兒代謝組學數據就必須構建一個完善的早產兒代謝產物數據庫，同時需標準化代謝數據的處理和研究。

本研究的樣本均來自常州地區2015年-2016年出生的早產兒，樣本量有限，且由于標本數量少尚未采取本地化的參考值，因此研究結果存在一定的局限性。如要為臨床醫生提供更為可靠的早產兒肉堿代謝變化的特點，需要收集更多的臨床數據并通過長期隨訪來進行驗證。