補氣養陰顆粒對特發性血小板減少性紫癜模型小鼠淋巴細胞亞群的影響

李 琳 丁云錄 張蓮珠 張明天 初洪波 牛春風

(長春中醫藥大學附屬醫院，吉林 長春 130021)

特發性血小板減少性紫癜是血液系統常見病，發病率逐年增高，西醫主要以糖皮質激素與免疫調節劑聯合治療，存在療效差，病情反復，副作用大的缺點，中成藥在治療該疾病時優勢明顯，標本同治〔1～4〕。補氣養陰顆粒是以氣陰兩虛理論為指導，以人參為基源研發的用于特發性血小板減少性紫癜治療的中藥復方制劑，臨床應用療效極佳。本研究主要觀察補氣養陰顆粒對特發性血小板減少性紫癜模型小鼠淋巴細胞亞群的影響。

1 材料與方法

1.1實驗材料 BALB/c小鼠，18～22 g，雌雄各半。動物合格證號：SCXK-(吉)2011-0004，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司。藥品及試劑：補氣養陰顆粒，性狀：棕褐色顆粒，批號：20141201，由長春中醫藥大學植物化學研究中心提供。豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)，北京西苑醫院血液病研究室提供。歸脾丸，規格：200丸/瓶，每8丸相當于原生藥3 g，批號：160209，仲景宛西制藥股份有限公司產品。滅菌注射用水，規格：2 ml/支，批號：1605418，國藥集團容生制藥有限公司。紅細胞裂解液、同型對照抗體、分化簇(CD)3-多甲藻黃素葉綠素蛋白(PercP)、CD4-異硫氰酸熒光素(FITC)、CD8-藻紅蛋白(PE)、CD61-PE(美國BD)。儀器及器材：一次性使用人體靜脈血樣采集容器，規格2 ml/支，批號：20161008，河北祥遠醫療器械股份有限公司。流式細胞儀，型號:FACS ARIA Ⅱ，美國BD公司。倒置熒光顯微鏡，型號:IX71，日本OLYMPUS，超純水器，型號:Mili Q，美國Millipore。離心機，型號:LD5-2B，北京雷勃爾離心機有限公司。電子天平，型號:BSA224S，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司。恒溫磁力攪拌器，型號:JB-3A，雷茲互感器(上海)有限公司。

1.2動物造模與分組〔5～9〕特發性血小板減少性紫癜模型小鼠：將BALB/c小鼠適應性飼養3 d后，按體重隨機分為對照組，模型組，陽性組(歸脾丸3.5 g/kg)，補氣養陰顆粒12 g/kg、6 g/kg、3 g/kg 3個劑量組。于第1，3，5，7，9，11天分別腹腔注射1∶6 GP-APS，每只0.1 ml(對照組注射0.1 ml蒸餾水)。給藥，從第1次注射后開始灌胃至造模后第14天。每2天稱重1次，以調整給藥量。

1.3淋巴細胞亞群檢測 取小鼠乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝全血100 μl至流式管中，空白對照管不加熒光抗體，同型對照管加入同型對照熒光抗體，樣品管加入熒光標記的抗體CD3-PercP、CD4-FITC、CD8-PE，混勻，室溫避光孵育 20 min；取出試管，每管加入2 ml 1倍紅細胞裂解液，立即輕輕渦旋混勻，室溫避光孵育15 min，1 200 r/min離心5 min，棄去上清液；每管加磷酸鹽緩沖液(PBS)2 ml洗滌，渦旋混勻，1 200 r/min離心5 min，棄去上清液，每管加0.5 ml PBS，混勻，1 h內上機檢測。

1.4統計學方法 應用SPSS21.0統計軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1各組淋巴細胞亞群統計結果 與模型組比較，補氣養陰顆粒6 g/kg和3 g/kg組CD8+T細胞數量明顯減少(P<0.01)，而CD4+/CD8+比值顯著提高(P<0.01)。見表1，圖1。

2.2不同性別小鼠淋巴細胞亞群統計結果 與對照組比較，雌性小鼠模型組CD3+、CD4+、CD8+T細胞數量顯著降低(P<0.01，P<0.05)，補氣養陰顆粒12 g/kg和6 g/kg有增加雌性小鼠體內CD4+T細胞的趨勢，但差異無顯著性。雄性小鼠模型組CD3+、CD8+T 細胞數量明顯高于對照組(P<0.05)，與模型組比較，雄性小鼠補氣養陰顆粒6 g/kg可明顯降低CD3+、CD4+T 細胞數量(P<0.01，P<0.05)。與模型組比較，雄性小鼠補氣養陰顆粒6 g/kg及3 g/kg組CD8+T細胞顯著降低，CD4+/CD8+比值顯著升高(P<0.01，P<0.05)。見表2。

表1 各組對淋巴細胞亞群的影響

與模型組比較：1)P<0.01

表2 各組不同性別小鼠淋巴細胞亞群的變化

與模型組比較：1)P<0.05；2)P<0.01

3 討 論

正常機體中各T淋巴細胞亞群相互作用，維持著機體的正常免疫功能。當不同淋巴細胞亞群的數量和功能發生異常時，機體就可導致免疫紊亂并發生一系列的病理變化〔10,11〕。CD4+T 細胞即輔助T 細胞，具有協助體液免疫和細胞免疫的功能，也有部分細胞具有免疫抑制和細胞毒作用；CD8+T 細胞即細胞毒性T 細胞，具有細胞毒作用，能夠特異殺傷靶細胞〔12,13〕。本實驗結果表明，補氣養陰顆粒具有維持機體免疫功能穩定的作用，當機體T細胞數量異常減少時，補氣養陰顆粒能夠溫和地增加T細胞數量，反之，當機體中T細胞數量異常增多時，補氣養陰顆粒又可以減少T細胞數量，從而使機體處于相對穩定的免疫狀態。