保健食品中益生菌的檢驗(yàn)方法研究進(jìn)展

周愛華

摘 要：伴隨著國民生活水平逐步提高的同時(shí)，對(duì)于生活品質(zhì)的需求也隨之水漲船高。當(dāng)下人們所熱衷的不僅僅是生活質(zhì)量，還有飲食健康。因此才推動(dòng)保健食品行業(yè)的迅速發(fā)展，對(duì)各類益生菌的使用和研究也在不斷突破和拓展，這必將成為我國食品行業(yè)發(fā)展的一大趨勢。

關(guān)鍵詞：健康飲食；必然趨勢；重要保證；現(xiàn)實(shí)意義

益生菌是一種對(duì)人體能互利共生的有益微生物，存在于宿主體內(nèi)的同時(shí)也在一定程度上保護(hù)著宿主的健康。因此益生菌在保健食品上的應(yīng)用十分廣泛，不同種類的益生菌對(duì)人體有著不同的功效與作用。當(dāng)前益生菌的運(yùn)用活躍在許多產(chǎn)業(yè)上，而其在保健食品中的發(fā)展之快是有目共睹的，這主要得益于其對(duì)人體健康有著重要影響。本文將從對(duì)益生菌的一系列詳細(xì)介紹入手，闡明現(xiàn)階段保健食品中益生菌的檢驗(yàn)方法和研究進(jìn)度。

一、益生菌對(duì)人體的作用

益生菌對(duì)于人體的作用主要有著保護(hù)肝臟、抵抗疲勞、對(duì)抗輻射、潤腸通便、生物拮抗、增強(qiáng)免疫等保健作用。另外，益生菌還能為嬰幼兒的身體提供豐富營養(yǎng)，促進(jìn)其生長發(fā)育[2]。

二、對(duì)于保健品中的益生菌株的選擇標(biāo)準(zhǔn)

作為益生菌的菌株，必須具備以下條件：①能對(duì)宿主產(chǎn)生有益的影響；②具有無毒性并且無對(duì)人體的致病作用；③能在人體內(nèi)的消化道中存活下去；④能適應(yīng)宿主分泌的胃酸和膽鹽；⑤能在人體消化道表面定植并生存下去；⑥能產(chǎn)生對(duì)人體有用的酶類和代謝物等；⑦在對(duì)保健品加工和貯藏的過程中始終保持自身的活性；⑧自身具有良好的感官特性；⑨來源于于人類體內(nèi)，即存在宿主源性。因此，選擇保健品中的益生菌株時(shí)要充分考慮菌株的安全性、有效性和可控性。

三、使用益生菌前必備的研究數(shù)據(jù)

目前，在使用益生菌并應(yīng)用于保健品中之前，有一些必須完成的研究數(shù)據(jù)：①益生菌對(duì)人體內(nèi)的酸和膽汁的抵抗能力；②益生菌對(duì)人體內(nèi)腸道細(xì)胞的黏附力大小；③人體消化攝入該益生菌的安全性；；④此益生菌對(duì)于人體內(nèi)病原菌的抑制作用；⑤益生菌在人體結(jié)腸表皮的短暫的定植時(shí)長；⑥能證實(shí)該益生菌使用的健康效果的臨床研究數(shù)據(jù)；⑦當(dāng)前對(duì)益生菌進(jìn)行檢驗(yàn)的技術(shù)條件。因此，選擇理想的益生菌株的一個(gè)制約因素就是在進(jìn)行人體體外的實(shí)驗(yàn)時(shí)無法很好地預(yù)測該菌株在人體體內(nèi)所能發(fā)揮的性能，但我們通過下文中所闡述的一些方法能部分反映菌株在人體體內(nèi)的性能狀況，因而這些檢驗(yàn)方法能在實(shí)際研究中得以應(yīng)用[3]。

四、當(dāng)前能對(duì)益生菌檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法

（一）研究益生菌株在體外黏附的實(shí)驗(yàn)方法

對(duì)人體腸黏膜的黏附作用是選擇合適的益生菌株的一個(gè)關(guān)鍵的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，也被認(rèn)為是菌株在體內(nèi)能否持續(xù)存活的重要因素。黏附作用被認(rèn)為是免疫調(diào)節(jié)的重要因素，益生菌只有黏附細(xì)菌才可能與人體免疫細(xì)胞有更多的接觸，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)人體產(chǎn)生有益作用。然而，直接研究菌株在人體內(nèi)的黏附不太現(xiàn)實(shí)，因此我們研究了了許多體外模型來檢測益生菌菌株的黏附能力。目前在體外檢測的益生菌黏附模型中，應(yīng)用最為廣泛的是被切除的人體腸組織中的、從人類糞便中分離的以及回腸分泌流出物來源的腸黏液，或組織培養(yǎng)用細(xì)胞。本文中所說的組織用培養(yǎng)細(xì)胞主要指例如讓HT-29、Caco-2作為腸細(xì)胞的模型，這樣做的缺點(diǎn)是覆蓋在腸膜上的黏膜層首先能跟攝入細(xì)菌進(jìn)行接觸，而我們進(jìn)行監(jiān)測所使用細(xì)胞模型無黏膜層。因此在模型中應(yīng)用分泌黏液的HT-29-MTX細(xì)胞，能在某些程度上克服黏膜層首先接觸攝入細(xì)菌的缺點(diǎn)。但是，這種方法中所使用的HT-29MTX細(xì)胞能產(chǎn)生的黏蛋白與腸黏膜來源的黏蛋白的組成不同。前者主要分泌能產(chǎn)生胃酸免疫活性的黏蛋白（MUC3和MUC5）。而當(dāng)我們在模型中應(yīng)用分泌黏液的HT-29-MTX細(xì)胞的話，就會(huì)只產(chǎn)生少量的具有結(jié)腸免疫活性的黏蛋白（MUC2和MUC4）。這種黏膜上細(xì)菌黏附點(diǎn)的數(shù)量和類型也和前者存在一些不同。

（二）檢測益生菌黏附的普遍方法

檢測益生菌黏附的最普遍方法就是革蘭染色法、放射性標(biāo)記法以及平板計(jì)數(shù)法，但這些檢測方法都還存在著一定的局限性。例如革蘭染色法對(duì)于區(qū)分同樣著色的益生菌菌株就存在著很大的局限性，無法明確區(qū)分同樣著色的菌株。而放射性標(biāo)記分析雖然相對(duì)來說更加的準(zhǔn)確并且操作簡單，但是其CPM比率不夠穩(wěn)定，并且需要特殊的實(shí)驗(yàn)條件才能有效地減少放射性存在的潛在危害。

（三）攝入益生菌株在體內(nèi)存活的檢測方法

對(duì)于攝入益生菌株在體內(nèi)存活的方法，檢測生存在宿主胃腸道益生菌的傳統(tǒng)方法有菌落形態(tài)學(xué)鑒定、從糞便中分離培養(yǎng)攝入菌、根據(jù)發(fā)酵模式鑒定、根據(jù)血清型鑒定或者幾種方法聯(lián)合應(yīng)用。對(duì)于以嗜熱脂肪芽胞桿菌的孢子作為攝入益生菌運(yùn)輸?shù)臉?biāo)記的方法，主要是由于其不能在人體內(nèi)生長，在胃腸道也不受破壞，且益生菌容易能在瓊攝氏度的瓊脂平板上進(jìn)一步繁衍生長，而在此條件下腸道細(xì)菌卻不能生長。因此在當(dāng)前對(duì)益生菌的檢驗(yàn)研究中，傳統(tǒng)的方法雖然具有一定的局限性，但仍在檢測中被廣泛的使用。

（四）重量之差的檢驗(yàn)方法

對(duì)于重量之差檢驗(yàn)方法，是說要根據(jù)實(shí)驗(yàn)中兩次的重量差值，來進(jìn)一步檢測出其中含有益生菌的質(zhì)量和濃度。具體的方法：先將要進(jìn)行檢驗(yàn)保健食品進(jìn)行烘干冷卻稱量其第一次的重量。做出相關(guān)的實(shí)驗(yàn)記錄之后，再將其放于離心器皿內(nèi)進(jìn)行離心試驗(yàn)。完成后倒出上層液體，然后將剩余的下層液體進(jìn)行烘干并將烘干后的物質(zhì)冷卻，進(jìn)行第二次的稱重并記錄數(shù)據(jù)，最后將兩次稱重的結(jié)果進(jìn)行作差比較就能夠得到一個(gè)重量之差，從而計(jì)算出保健食品中所含益生菌的濃度和數(shù)量。這個(gè)方法是體外研究檢測的方法之中比較容易直接的檢驗(yàn)方法，而且檢測準(zhǔn)確性也較高。該方法作為傳統(tǒng)經(jīng)典的檢驗(yàn)方法之一，其缺點(diǎn)是其操作過程復(fù)雜且步驟繁瑣，過程中容易出現(xiàn)失誤從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確并且會(huì)大量的耗費(fèi)時(shí)間和精力，而實(shí)驗(yàn)者產(chǎn)生疲憊就會(huì)更加容易出現(xiàn)失誤造成檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。

五、現(xiàn)階段益生菌檢測研究中存在的問題及前景展望

（一）現(xiàn)狀及存在的問題

雖然我國關(guān)于益生菌的監(jiān)測研究已經(jīng)進(jìn)行了很多年，也投入了很多的人力物力，但從總體上來說，我國當(dāng)前對(duì)保健品中益生菌的監(jiān)測研究仍然不夠成熟，主要表現(xiàn)為：

1、對(duì)益生菌在人體中的作用機(jī)理未完全研究明確；

2、對(duì)一些研究所得的結(jié)論還不夠不明確，并且缺乏有針對(duì)性的人群跟蹤觀察；

3、由于監(jiān)測研究的結(jié)論來自于不同人群、菌株及劑量，難免產(chǎn)生一些不可避免的誤差。

（二）前景展望

隨著人們對(duì)生活質(zhì)量需求的不斷提高，相關(guān)檢測部門對(duì)益生菌功效、作用和重要性都有了更多的認(rèn)識(shí)。今天，益生菌已被廣泛應(yīng)用于各項(xiàng)保健食品之中。但我國目前保健品行業(yè)中對(duì)益生菌的檢測方法和手段都還不夠成熟完善，仍然需要更多的研究投入。隨著越來越多的人對(duì)保健食品需求加大，人們對(duì)于益生菌類食品保健功效的認(rèn)可度也日益提高，深入研究益生菌檢測方法已成為必然。

結(jié)語：

綜上所述，眼下我國對(duì)保健品中益生菌檢測方法的研究不斷深入，使得益生菌在保健食品行業(yè)中的發(fā)展得到進(jìn)一步的推動(dòng)，作為保健食品中必不可少的一種物質(zhì)，其在人體中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用，甚至直接關(guān)系著人體的生命健康安全問題。隨著社會(huì)對(duì)保健食品安全要求的不斷提高，政府面臨的益生菌類保健食品監(jiān)管安全要求也會(huì)不斷提高，這些都會(huì)推動(dòng)對(duì)于保健品中益生菌檢驗(yàn)方法的研究。

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