高遷移率族蛋白B1在類風濕關節炎中的表達水平研究*

（吉林大學第一醫院 風濕免疫科，吉林 長春 130021）

類風濕關節炎是常見的系統性自身免疫性疾病，以滑膜炎和血管炎為主要病理特點[1-2]。近年來，隨著對類風濕關節炎的深入研究，發現高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein1, HMGB1）是新型的人類慢性關節炎相關炎癥介質[3]。HMGB1具有介導致死性全身炎癥反應的“晚期”炎癥介質作用，可表達在細胞核及釋放于血清中[4-5]。因此，認為HMGB1在類風濕關節炎的發生、發展中發揮重要作用[6]。本文研究旨在探討HMGB1在類風濕關節炎中的表達。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年5月-2018年5月在吉林大學第一醫院行關節置換術或滑膜清理術的類風濕關節炎患者49例作為研究組。其中，男性18例，女性31例；年齡36～72歲，平均（53.42±6.47）歲。另選取該院同期行手術治療的骨關節炎患者30例作為對照組。其中，男性11例，女性19例；年齡39～71歲，平均（54.83±7.25）歲。所有研究對象經本院倫理委員會審核，且獲得知情同意，簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 血清標本采集 所有研究對象入院后第3天清晨空腹采集外周靜脈血，分離血清，離心半徑15 cm，2 500 r/min離心10 min，置于-20℃待測，采用酶聯免疫吸附法測定HMGB1含量，嚴格按照人HMGB1試劑盒（上海晶抗生物工程有限公司）說明書進行操作。

1.2.2 鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結（streptavidin-perosidase, SP）法 取保存的所有研究對象的病損關節滑膜組織石蠟病理切片標本，嚴格按照說明書進行操作，DAB顯色，蘇木精復染、脫水、透明、封固。HMGB1單克隆抗體（美國RD公司），HMGB1一抗工作濃度1∶40，二抗即為免疫組織化學HistostainTM染色試劑盒（北京中杉金橋生物技術有限公司）。每張切片取5個400倍視野，由本院2名資深病理科醫生采用盲法評分。HMGB1表達主要在細胞核，染色評分標準：①3分，染色呈棕褐色；②2分，染色呈黃色；③1分，染色呈淡黃色；④0分，無染色。陽性細胞率評分標準：①4分，陽性細胞率＞75%；②3分，陽性細胞率51%～75%；③2分，陽性細胞率為26%～50%；④1分，陽性細胞率≤25%；⑤0分，無陽性細胞。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 22.0統計軟件，計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗；計數資料以率表示，比較用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

兩組血清HMGB1水平比較，經t檢驗，差異有統計學意義（P＜0.05），研究組高于對照組。兩組HMGB1陽性表達率比較，經χ2檢驗，差異有統計學意義（P＜0.05），研究組高于對照組。兩組SP法染色評分比較，經t檢驗，差異有統計學意義（P＜0.05），研究組高于對照組。見附表和附圖。

附表 兩組患者血清HMGB1水平、HMGB1陽性表達率及SP法染色評分比較 （±s）

附表 兩組患者血清HMGB1水平、HMGB1陽性表達率及SP法染色評分比較 （±s）

組別 HMGB1/（ng/ml）HMGB1陽性表達率/% 染色評分研究組（n =49） 17.83±2.17 41（83.67） 6.73±0.91對照組（n =30） 7.27±0.93 14（46.67） 2.13±0.54 t/χ2值 25.225 12.049 25.079 P值 0.000 0.000 0.000

附圖 兩組滑膜組織HMGB1的表達

3 討論

類風濕關節炎臨床表現涉及關節局部和全身癥狀，而其病理改變中關節損傷最常見的[7]。目前，類風濕關節炎具體發病機制尚不清楚，發現自身免疫反應介導的免疫功能紊亂和炎癥因子在類風濕關節炎的發病中發揮重要作用[8-9]。

HMGB1是近年來發現的一種新型晚期炎癥因子，廣泛存在于真核細胞內，并在大部分真核細胞中表達豐富[10-11]。HMGB1主要由215個氨基酸殘基組成，具有雙重職能，當機體細胞處于穩態時其主要存在于細胞核，其功能主要為結合DNA參與穩定核小體，可調節DNA復制、修復、轉錄等[12]。遇到外界相應的信號刺激時，HMGB1通過活化的免疫細胞主動分泌到胞外，并且有受損及壞死的細胞被動釋放到胞外而發揮生物學活性[13]。HMGB1通過與受體相互作用，包括TLR2、TLR4、RAGE及其他協同作用的炎癥介質共同引起反應，包括維持和啟動下游級聯式炎癥反應，以及激活相關信號通路等。越來越多研究表明，HMGB1以其免疫刺激性和促炎性作為發病源促進自身免疫性疾病和慢性炎癥性疾病的發展，在類風濕關節炎疾病進程中發揮重要作用[14-15]。PALMLAD等[16]研究顯示，在CIA大鼠血管內皮細胞、滑膜成纖維細胞、巨噬細胞及細胞外間隙中HMGB1呈高表達。徐力等[17]研究報道，活動期類風濕關節炎患者血清HMGB1水平高于正常對照組和緩解期組，且與紅細胞沉降率、類風濕因子和C反應蛋白呈正相關。體外實驗研究顯示，HMGB1可對多種細胞產生作用，并且其破骨細胞生成過程中可有破骨細胞及其前體細胞產生，且作用于本身刺激破骨細胞分化成熟[18]。動物實驗研究中，在顯微鏡下給予重組HMGB1蛋白于大鼠關節腔內注射，結果顯示可導致關節輕、中度滑膜，同時使用重組HMGB1boxA蛋白或HMGB1抗體干預原誘導型關節炎動物模型后，其滑膜炎癥有所緩解，由此可見，HMGB1在類風濕關節炎發病中起重要作用[19]。本研究中研究組血清HMGB1水平高于對照組，說明類風濕關節炎患者血清HMGB1水平升高；研究組HMGB1陽性表達率高于對照組，說明類風濕關節炎患者HMGB1呈高表達。

綜上所述，HMGB1在類風濕關節炎中高表達，其可能在類風濕關節炎組織損傷發生、發展中發揮重要作用，可作為類風濕關節炎輔助診斷指標之一。