PIK3CA突變影響因素對鱗狀細胞肺癌預后的影響*

陸乘俊，肖華，金海，王曉偉，姚仕華，施博文

（上海長海醫院 1.胸外科，2.呼吸與危重癥學科，上海 200433）

流行病學研究顯示鱗狀細胞肺癌的發病率接近0.05%～0.16%，特別是在吸煙人群中發病率更高[1]。類磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylino-sitol 3-kinases,PI3Ks）基因突變可以導致惡性腫瘤細胞的細胞增殖調控、癌細胞分化及侵襲等病理特性的改變，導致惡性腫瘤病情的進展[2-4]。為了進一步揭示PIK3CA基因突變與肺癌的關系，為臨床上肺癌的預后評估提供參考，本研究選取81例鱗狀細胞肺癌患者，探討PIK3CA基因突變與臨床病理特征及生存預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年2月-2016年2月于上海長海醫院收治的鱗狀細胞肺癌患者81例。其中，男性48例，女性33例；年齡24～68歲，中位年齡51歲。根據PIK3CA突變情況將患者分為PIK3CA突變組和未突變組，分別為8和33例。納入標準：①術前接受放化療；②經病理確診；③經過肺葉或全肺根治性切除術；④術后接受以鉑類為基礎的聯合化療；⑤臨床病理資料保存完整。排除標準：①標本不符合檢測要求；②依從性差，不配合治療隨訪。同時選取同患者癌旁組織（≥5 cm）作為對照。患者及家屬均知情同意并簽署同意書。

1.2 方法

取凍存已裂解的血清細胞裂解液，室溫放置5 min使其完全溶解，每1 ml的Trizol試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，手動劇烈振蕩管體15 s后，15～30℃孵育2～3 min。4℃下1 500 r/min離心15 min，將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。于4℃下1 500 r/min離心10 min，加入逆轉錄酶之前先70℃干浴3 min，終溶液即為cDNA溶液，配置反應體系：上游引物1μl，下游引物3μl，Taq聚合酶 2μl，cDNA5μl，SYBR Green 110μl，ddH2O 30μl，總體積50μl。

檢測儀器使用ABOI2008RT-PCR儀（日本Panasonic公司），反應產物采用樹脂脫鹽，經自動點樣儀的spector芯片，采用基質輔助激光吸附電離飛行時間質譜進行檢測。

1.3 統計學方法

數據分析采用SPSS 19.0統計學軟件，計數資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗，Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較用Log-rank χ2檢驗，預后影響因素采用Cox回歸模型，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PIK3CA基因突變情況

對81例石蠟包埋肺癌組織提取進行檢測，共有66例提取DNA成功，成功率為81.48%；81例癌旁組織提取成功68例，成功率83.95%；肺癌組織和癌旁組織同時擴增PIK3CA外顯子9和20的例數分別為41和43例，擴增效率分別為62.12%和63.24%。

同時擴增出PIK3CA外顯子9和20的癌旁組織和肺癌組織，外顯子9中有5例出現單個堿基突變，外顯子20中有3例出現單個堿基突變，均為肺癌組織。肺癌組織PIK3CA基因突變率為19.51%，癌旁組織PIK3CA無基因突變，基因突變率為0.00%，兩者基因突變率比較，差異有統計學意義（χ2=7.147，P=0.000）。

2.2 PIK3CA基因突變與病理特征的關系

不同性別、年齡、分化程度、TNM期及有無淋巴結轉移患者PIK3CA基因突變率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表 1。

表1 PIK3CA基因突變與病理特征關系

2.3 PIK3CA基因突變與未突變組患者中位生存期比較

PIK3CA基因突變組患者中位生存期為14個月，生存率為37.50%，PIK3CA基因未突變組患者中位生存期為26個月，生存期為73.91%，經Log-rank χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=32.915，P=0.000）。見附圖。

2.4 鱗狀細胞肺癌患者預后的影響因素分析

將患者性別、年齡、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期及PIK3CA基因突變作為自變量，患者預后及生存時間作為因變量，進行Cox回歸分析。結果顯示：分化程度、TNM分期及PIK3CA基因突變是影響患者預后的影響因素（P＜0.05）。見表2。

附圖 PIK3CA基因突變與未突變組患者生存曲線比較

表2 多因素分析參數

3 討論

肺癌特別是鱗狀細胞癌容易早期發生淋巴結或者血行的轉移，臨床預后較差[5-6]。一項包含了124例樣本量的臨床回顧性隨訪研究顯示，鱗狀細胞癌的5年生存率＜35%，中位生存時間＜32個月[7-8]。而近年來越來越多的基礎研究顯示，在影響到肺癌的發病或者臨床預后的相關因素中，基因或者表觀遺傳學的改變可能是促進肺癌臨床預后不佳的重要風險因素[9-10]。

PIK3CA突變可以促進癌細胞的凋亡率的下降，抑制免疫監察細胞對于癌細胞的殺傷作用，并可以在影響到癌細胞的生存微環境或者氧化應激障礙等方面發揮作用，進而促進鱗狀細胞癌臨床分期、組織學分型等病理過程的進展[11-12]。

本研究采用基因擴增法進行了相關PIK3CA突變基因的擴增，結果發現在鱗狀細胞癌癌旁組織中并沒有發現明顯的PIK3CA突變情況，而在癌原發病灶組織中，PIK3CA突變情況較為明顯，基因突變的陽性率平均20%左右，提示PIK3CA突變可能參與到了肺癌的發生發展過程中。PIK3CA突變能夠在影響到磷酸激酶的磷酸化、三磷酸肌醇的修飾或者干預肺癌細胞基因的轉錄翻譯活性等方面，發揮了一定的刺激作用，從而促進了鱗狀細胞癌的病情進展[12]。楊熹、王娜等[13-14]通過收集分析了82例樣本量的肺底部鱗狀細胞癌的PCR檢測資料，發現其癌基因的突變率為15%～20%，且患者的病情越嚴重、手術效果越差或者遠期生存預后越差，相關基因的陽性突變率越高，這與本研究結論較為相似。但本研究并未發現PIK3CA突變與癌組織分化細胞、臨床分期或者淋巴結轉移的關系，提示相關臨床特征不影響PIK3CA突變效果，PIK3CA突變主要與患者的遺傳表觀學改變或者父系或者母系的遺傳攜帶等有關[14]。本研究發現PIK3CA基因突變組患者中位生存期較差，生存時間較短，提示PIK3CA基因突變可以作為臨床上評估肺癌患者臨床預后的重要指標。Cox回歸分析顯示分化程度、TNM分期及PIK3CA基因突變是影響患者預后的影響因素，PIK3CA基因的突變對于惡性腫瘤臨床預后的影響，主要考慮其通過癌細胞的不同特性的影響，或者在癌細胞的治療敏感性、程序性凋亡的發生等方面發揮一定的作用，導致不良預后的發生。

綜上所述，鱗狀細胞肺癌組織PIK3CA基因突變高于癌旁組織，但與病理特征無明顯關系，PIK3CA基因突變患者預后較未突變者差。