氟西汀對腦卒中后抑郁大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響

方 玲 馬 婉

(杭州市第七人民醫(yī)院，浙江 杭州 310013)

腦卒中后抑郁是腦卒中后最常見的一種神經(jīng)精神并發(fā)癥，除表現(xiàn)神經(jīng)功能缺損外，還出現(xiàn)意志缺乏、自責(zé)自罪、消極悲觀、情緒低落、焦慮、失眠，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)自殺傾向〔1〕。臨床調(diào)查顯示腦卒中后抑郁發(fā)病率不斷上升，嚴(yán)重影響患者日常生活能力、認(rèn)知功能及神經(jīng)功能，成為影響患者腦卒中復(fù)發(fā)及功能恢復(fù)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔2，3〕。腦卒中后抑郁具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，與氧化應(yīng)激直接相關(guān)的氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡假說受到重視，且相關(guān)研究認(rèn)為過多的氧自由基可損害神經(jīng)元，使其水平降低，導(dǎo)致單胺類神經(jīng)遞質(zhì)釋放減少，從而引起抑郁癥的發(fā)生〔4，5〕。因此，本研究探討氟西汀對腦卒中后抑郁大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)SD大鼠40只，雌性大鼠20只，雄性大鼠20只，體重(220±20)g，放置于適宜的溫度和濕度條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。所有大鼠來源于上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物 鹽酸文拉法辛膠囊(生產(chǎn)廠家：成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司)；鹽酸氟西汀膠囊(生產(chǎn)廠家：禮來蘇州制藥有限公司)。

1.3主要試劑和儀器 大鼠丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(上海金穗生物科技有限公司)。DB001 Morris水迷宮(北京智鼠多寶生物科技有限公司)。

1.4方法

1.4.1實(shí)驗(yàn)分組及給藥 40只大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、陽性對照組、試驗(yàn)組，每組10只。正常組：給予大鼠等劑量生理鹽水灌胃，每天1次；模型組于造模成功后給予大鼠等劑量生理鹽水灌胃，每天1次；陽性對照組：給予大鼠鹽酸文拉法辛膠囊10 mg/kg灌胃，每天1次；試驗(yàn)組：給予大鼠鹽酸氟西汀膠囊10 mg/kg，每天1次。末次給藥后大鼠禁食12 h，給予大鼠3 ml/kg的10%水合氯醛腹腔注射麻醉，于大鼠腹主動(dòng)脈取血，取大鼠腦，剝離海馬，放置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2開野試驗(yàn) 采用敞箱(規(guī)格：80 cm×80 cm×40 cm)，底面劃分成25個(gè)面積相等的方格，將大鼠放入適應(yīng)60 s后，觀察大鼠3 min內(nèi)水平運(yùn)動(dòng)格數(shù)(大鼠四爪皆進(jìn)入計(jì)數(shù)為1分)、垂直豎立次數(shù)(大鼠攀附箱底或者兩前爪騰空計(jì)為1分)，以總分為最后得分。將大鼠每次均從同一角落放入，待測試結(jié)束后，采用消毒液擦拭，晾干待用。

1.4.3Morris水迷宮試驗(yàn) 該試驗(yàn)共分為A、B、C、D 4個(gè)象限。首先于大鼠訓(xùn)練前，加自來水于水迷宮中，再加墨汁使水變漆黑，將平臺(tái)置于D象限水面下2 cm左右，使其可于實(shí)驗(yàn)光線下對大鼠不可見。試驗(yàn)均于9∶00～15∶00進(jìn)行，需保持大鼠室內(nèi)安靜，燈光狀態(tài)及物品放置一致，水溫(23±2)℃。于第1～4天對大鼠進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)：從4個(gè)象限按照逆時(shí)針方向?qū)⒋笫竺嫦虺乇诜庞谒校^察且計(jì)時(shí)60 s。采用攝像系統(tǒng)記錄大鼠尋找且爬上平臺(tái)的時(shí)間為逃避潛伏期，若大鼠60 s內(nèi)未找到平臺(tái)，則引導(dǎo)其至平臺(tái)，讓其停留15 s，逃避潛伏期計(jì)為60 s。完成后以4 d的逃避潛伏期反映大鼠的學(xué)習(xí)能力。于大鼠第5天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)：將平撤除，從距原平臺(tái)最遠(yuǎn)的B象限將大鼠面向池壁放入水中，并且記錄大鼠在60 s內(nèi)各象限游泳時(shí)間，空間探索時(shí)間以在原平臺(tái)所在D象限游泳時(shí)間，作為記憶成績。

1.4.4海馬SOD和MDA水平檢測 取1.4.1剝離的海馬組織，采用比色法測定SOD和MDA水平。

1.5觀察指標(biāo) ①觀察各組自主活動(dòng)次數(shù)變化；②觀察各組逃避潛伏期變化；③觀察各組空間探索時(shí)間變化；④觀察各組海馬組織內(nèi)SOD和MDA水平變化。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2、t及F檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組自主活動(dòng)次數(shù)變化比較 與正常組自主活動(dòng)次數(shù)〔(35.91±5.98)次〕比較，模型組〔(4.79±1.42)次〕、陽性對照組〔(18.36±4.91)次〕和試驗(yàn)組〔(23.69±2.76)次〕自主活動(dòng)次數(shù)明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，陽性對照組和試驗(yàn)組自主活動(dòng)次數(shù)明顯增加(P<0.05)；試驗(yàn)組大鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯多于陽性對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2各組逃避潛伏期變化比較 與正常組比較，模型組、陽性對照組和試驗(yàn)組大鼠逃避潛伏期明顯延長(P<0.05)；與模型組比較，陽性對照組和試驗(yàn)組大鼠逃避潛伏期明顯縮短(P<0.05)；試驗(yàn)組大鼠逃避潛伏期明顯低于陽性對照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 各組逃避潛伏期變化比較

與正常組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；與陽性對照組比較：3)P<0.05，下表同

2.3各組空間探索時(shí)間變化比較 與正常組空間探索時(shí)間〔(28.31±3.74)s〕比較，模型組〔(16.47±2.12)s〕、陽性對照組 〔(22.13±1.64)s〕和試驗(yàn)組〔(25.43±2.80)s〕大鼠空間探索時(shí)間明顯降低(P<0.05)；與模型組比較，陽性對照組和試驗(yàn)組大鼠空間探索時(shí)間明顯延長(P<0.05)；試驗(yàn)組大鼠空間探索時(shí)間明顯長于陽性對照組(P<0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4各組海馬組織內(nèi)SOD和MDA水平變化比較 與正常組比較，模型組、陽性對照組和試驗(yàn)組海馬組織內(nèi)SOD水平明顯降低，而MDA水平明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，陽性對照組和試驗(yàn)組海馬組織內(nèi)SOD水平明顯升高，而MDA水平明顯下降(P<0.05)；試驗(yàn)組海馬組織內(nèi)SOD水平明顯高于陽性對照組，而MDA水平顯著低于陽性組(P<0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 各組海馬組織內(nèi)SOD和MDA水平變化比較

3 討 論

腦卒中后抑郁主要是腦卒中后出現(xiàn)以興趣減退、情緒低落為主要表現(xiàn)的一種病癥，是腦卒中常見并發(fā)癥，嚴(yán)重影響腦卒中治療和預(yù)后〔6,7〕。目前，腦卒中后抑郁治療以抗抑郁細(xì)胞改善癥狀為主。氟西汀是一種選擇性5-羥色胺(5-HT)再攝取抑制劑，是常見的臨床上一線抗抑郁藥物，但目前對其潛在的抗抑郁作用仍不十分明確〔8,9〕。研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)，氟西汀治療能夠誘導(dǎo)正常大鼠海馬和皮層EAAT2表達(dá)升高〔10〕。開野試驗(yàn)主要是一種廣泛用于動(dòng)脈的自主活動(dòng)能力及探索能力的評(píng)價(jià)，其活動(dòng)評(píng)分主要反映大鼠的活動(dòng)，并且垂直活動(dòng)評(píng)分可反映大鼠對新鮮環(huán)境的好奇程度〔11〕。而開野試驗(yàn)中，大鼠水平活動(dòng)下降主要反映其活動(dòng)度減少，垂直活動(dòng)下降主要反映對新鮮緩解的好奇程度減少〔12〕。本研究表明，氟西汀可增加大鼠自主活動(dòng)次數(shù)。Morris水迷宮試驗(yàn)是一種主要用于考察動(dòng)物空間學(xué)習(xí)記憶能力，該實(shí)驗(yàn)方法廣泛用于與大腦海馬組織病變相關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究〔13,14〕。本研究結(jié)果顯示氟西汀可提高學(xué)習(xí)記憶能力。近年來，氧化應(yīng)激作為研究熱點(diǎn)，被認(rèn)為精神疾病的重要原因之一，如抑郁癥、腦卒中等〔15〕，認(rèn)為腦卒中后抑郁發(fā)病機(jī)制中，與氧化應(yīng)激直接相關(guān)的氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡假說受到廣大學(xué)者關(guān)注。MDA和SOD是氧化-抗氧化系統(tǒng)中重要的兩個(gè)因子〔16〕。本研究表明，氟西汀可通過提高SOD水平降低MDA水平，改善氧化應(yīng)激。綜上所述，氟西汀可改善腦卒中后抑郁大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與降低腦內(nèi)MDA水平和增加SOD水平相關(guān)。