外周血細胞形態學檢查聯合血清EB病毒DNA定量分析在傳染性單核細胞增多癥患兒中的應用

鄭州大學附屬兒童醫院 河南省兒童醫院 鄭州市兒童醫院（450000）褚苗

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年2月～2017年12月我院疑似IM患兒274例，男158例，女116例，年齡1～9歲，平均（5.66±2.07）歲；本研究經我院醫學倫理委員會審批通過。

1.2 方法 外周血細胞形態學檢查：以EDTA-K2抗凝管采靜脈血1ml，顛倒3～6次，混勻，血涂片2～3張，瑞氏-姬姆薩染液染色，油鏡鏡檢。由細胞學專業、技術嫻熟的專業檢測醫師閱片。陽性：異型淋巴細胞＞10%。定量PCR技術分析：抽取靜脈血，以EDTA-K2抗凝處理，采取TaqMan熒光標記探針基因擴增技術測定，探針序列：FPEBV5X-CCTCGGACAGCTCCTAAGAAGGCACC-Y3’，26bp；引物序列：PQEBVF5，_AAGC-CCAACACTCCACCAC-3’，19bp；PQEBVR5’-CTGGTAGGACT-GGGCGAC-3’，18bp。PCR擴增條件：93℃，2min，預變性；93℃，45s，55℃，60s，共10個循環。最后93℃，30s；55℃，45s，共30個循環。陽性：EB-DNA定量＞1.0×103copy/ml。

附表 檢測結果[n(%)]

1.3 觀察指標 ①分析單獨檢測與聯合檢測結果。②比較單獨檢測與聯合檢測靈敏度、準確度及特異度。

1.4 統計學處理 通過SPSS21.0處理數據，計數資料（特異度、靈敏度、準確度）以n（%）表示，行χ2檢測，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 檢測情況 本研究疑似274例IM患兒經實驗室病理學確診98例。外周血細胞形態學檢查檢出真陽性55例，真陰性158例；定量PCR技術檢出真陽性61例，真陰性163例；外周血細胞形態學檢查聯合定量PCR技術檢出真陽性97例，真陰性157例。

2.2 檢測結果 聯合檢測準確度92.70%、靈敏度98.98%高于外周血細胞形態學檢查（77.74%、56.12%）、定量PCR技術（81.75%、62.24%）單獨檢測，差異有統計學意義（P＜0.05），聯合檢測特異度與單獨診斷對比，差異無統計學意義（P＞0.05），見附表。

3 討論

IM能通過血液、唾液傳播，并長期潛伏于機體淋巴組織中，正常情況下與機體相安無事，若免疫功能低下，EB病毒便活化形成感染，誘發不同程度疾病[1]。異型淋巴細胞的生成多是因為B淋巴細胞受體與病毒結合后于持續復制及增殖的過程中被T淋巴細胞識別，誘發細胞毒性效應。于循環血液中受刺激后增殖的T淋巴細胞產生形態變異，與正常的T淋巴細胞形態差異顯著。本研究中行外周血細胞形態學檢查檢出真陽性55例，真陰性158例，準確度77.74%、靈敏度僅56.12%，漏診率較高。定量PCR技術重復性好、操作簡單，能一步完成擴增及產物的檢測，準確地反映病毒感染及復制情況。本研究中采用定量PCR技術檢出真陽性61例，真陰性163例，準確度81.75%、靈敏度62.24%，雖略高于外周血細胞形態學檢查，但經統計學計算無顯著差異（P＞0.05）。肖波等[2]采用外周血細胞形態學檢查聯合EBV-DNA定量分析對212例IM患兒實施檢測檢出陽性190例，顯著高于單獨檢測。本研究中對274例疑似IM患兒采用外周血細胞形態學檢查聯合定量PCR技術檢測，檢出真陽性97例，真陰性157例，準確度92.70%、靈敏度高達98.98%，遠高于單獨檢測（P＜0.05），提示聯合檢測可提高檢測準確度、靈敏度。