TCEAL 7、Wnt、β-catenin在結直腸癌組織中的表達情況及TCEAL 7表達與預后的關系

姜淼，馬志斌，李小雪，牛思佳

哈爾濱醫科大學附屬第一醫院消化內科，哈爾濱150001

結直腸癌是消化系統惡性腫瘤之一，其發病率較高，且全世界結直腸癌的發病率以每年2%的速度上升[1]。近年來，迅速發展的診療技術，極大地改善了結直腸癌患者的預后，但是其病死率仍然居高不下。部分結直腸癌患者被確診時，已達疾病晚期，嚴重影響患者的治療，而新的腫瘤標志物將有助于結直腸癌患者的早期診斷和治療。作為轉錄延伸因子A樣蛋白家族成員，轉錄延伸因子類（transcriptional elongation factor like 7，TCEAL7）全長2138 bp，編碼100個氨基酸，依賴啟動子調節細胞內轉錄[2-3]。研究顯示，TCEAL7在胃癌、卵巢癌和子宮內膜癌等多種腫瘤組織中低表達[4-6]。以上研究提示，TCEAL7具有成為腫瘤標志物的價值，但其在結直腸癌中的研究報道較少。研究顯示，TCEAL7在結直腸癌細胞中低表達，如過表達TCEAL7，可以抑制腫瘤細胞增殖、遷移及侵襲，促進細胞凋亡[7]。但此項研究僅關注腫瘤細胞的TCEAL7表達變化，并未在腫瘤組織中發現其表達變化。Wnt/β-catenin信號轉導通路與細胞的轉運和調亡有關。研究顯示，該Wnt/β-catenin信號轉導通路可以在多種腫瘤的發生中被激活并發揮關鍵的作用，如結直腸癌[7-8]，同時在結直腸癌的侵襲轉移中起著重要的作用[9-10]。Wnt和β-catenin是Wnt/β-catenin信號通路的重要元件，通過對其檢測可以反映Wnt/β-catenin信號通路的變化。因此，本研究重點檢測結直腸癌組織與癌旁正常組織中TCEAL7、Wnt、β-catenin 的表達情況 ，分析TCEAL7、Wnt、β-catenin的表達情況與結直腸癌患者臨床特征的關系，分析TCEAL7表達與Wnt、βcatenin表達的相關性，分析TCEAL7表達與結直腸癌患者預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2005年1月至2010年12月在哈爾濱醫科大學附屬第一醫院接受手術治療的結直腸癌患者的臨床資料。納入標準：①出現結直腸癌的臨床癥狀，并符合結直腸癌診斷，術后病理證實為結直腸癌；②術前無輔助放化療；③行一期手術切除；④病理組織均殘留少部分正常組織（距腫瘤組織約2.0 cm），標本保存完好；⑤臨床資料完整。排除標準：治療中斷的患者。根據納入排除標準，共納入50例結直腸癌患者，其中男性35例，女性15例；年齡為26～75歲，平均年齡為（56.2±8.6）歲。

1.2 評價指標

檢測TCEAL7基因及Wnt、β-catenin蛋白的表達情況，分析三者的表達情況與結直腸癌患者臨床特征的關系，分析三者表達情況的相關性，分析TCEAL7基因的表達情況與結直腸癌患者預后的關系。隨訪方式為電話隨訪和門診復查的方式相結合，隨訪時間為63個月。

1.3 檢測方法

1.3.1TCEAL 7基因的檢測 采用逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測TCEAL7基因的相對表達量。采用TRIzol試劑盒（購于Promega公司）提取結直腸癌組織和癌旁正常組織中的mRNA，采用逆轉錄試劑盒（購于Promega公司）將提取的總RNA逆轉錄為cDNA。采用primer 5.0軟件設計引物，TCEAL7基因長度為234 bp；以β-actin為內參，長度為315 bp（表1），經上海生工公司合成。采用熒光定量PCR試劑盒（購于全式金公司）進行檢測[11]。TCEAL7＞0.32為高表達。

表1 TCEAL 7和 β-actin的引物序列

1.3.2 Wnt和 β-catenin蛋白的檢測 取每例結直腸癌組織及癌旁正常組織的石蠟組織切片，采用鼠抗人Wnt、β-catenin單抗及免疫組化試劑盒（購于武漢博士德生物公司），參考Soini[12]改良法的標準，進行免疫組織化學檢測。根據BX53顯微鏡（購于奧林巴斯）400倍視野下染色細胞所占比例和染色強度分析蛋白表達水平。參照王愛民等[13]的染色細胞所占比例評分標準：0分，陽性細胞所占比例＜10%；1分，10%≤陽性細胞所占比例＜40%；2分，40%≤陽性細胞所占比例＜70%；3分，陽性細胞所占比例≥70%。細胞染色評分標準[13]：0分，不著色；1分，染色呈黃色；2分，染色呈棕黃色；3分，染色呈黃褐色。蛋白水平的評分=陽性細胞所占比例評分+細胞染色評分，0～3分為低表達，4～6分為高表達。

1.4 統計學方法

采用SPSS 20.0統計軟件分析數據。計數資料以例數和率（%）表示，采用χ2檢驗；計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗；采用Kaplan-Meier法繪制TCEAL7高、低表達患者的生存曲線，采用Log-rank法比較TCEAL7高、低表達患者的生存情況。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TCEAL 7基因的相對表達量

TCEAL7基因在50例結直腸癌組織中的相對表達量為（0.36±0.02），明顯低于50例癌旁正常組織的（1.20±0.13），差異有統計學意義（t=20.659，P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征的結直腸癌患者TCEAL 7、Wnt、β-catenin的表達情況

不同臨床分期、淋巴結轉移情況、遠處轉移情況的結直腸癌患者的TCEAL7的表達情況比較，差異均有統計學意義（χ2=5.433、6.566、3.979，P=0.020、0.010、0.046），但不同性別、年齡結直腸癌患者的TCEAL7的表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。不同臨床分期、淋巴結轉移情況、遠處轉移情況的結直腸癌患者的Wnt的表達情況比較，差異均有統計學意義（χ2=4.160、7.219、6.349，P=0.041、0.007、0.012），但不同性別、年齡結直腸癌患者的Wnt的表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。不同臨床分期、淋巴結轉移情況、遠處轉移情況的結直腸癌患者的β-catenin的表達情況比較，差異均有統計學意義（χ2=8.631、10.141、7.028，P=0.003、0.001、0.008），但不同性別、年齡結直腸癌患者的β-catenin的表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征的結直腸癌患者TCEAL 7、Wnt、β-catenin的表達情況

2.3 TCEAL 7表達情況與Wnt、β-catenin表達情況的相關性

結直腸癌組織中TCEAL7的表達情況與Wnt、βcatenin的表達情況均呈負相關（r=-0.583、-0.392，P＜0.01）。（表3）

表3 結直腸癌組織中TCEAL 7表達情況與Wnt、β-catenin表達情況的對照

2.4 TCEAL 7表達情況與預后的關系

TCEAL7高表達患者的生存情況優于TCEAL7低表達患者，差異有統計學意義（χ2=4.559，P=0.032）。（圖1）

3 討論

圖1 TCEAL 7低表達（ n=32）與高表達（ n=18）結直腸癌患者的生存曲線

本研究顯示，結直腸癌組織中TCEAL7的相對表達量明顯低于癌旁正常組織（P＜0.01），同時不同臨床分期、淋巴結轉移情況、遠處轉移情況的結直腸癌患者的TCEAL7、Wnt、β-catenin的表達情況比較，差異均有統計學意義（P＞0.05），但不同性別、年齡結直腸癌患者的TCEAL7、Wnt、β-catenin的表達情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；結直腸癌組織中TCEAL7的表達情況與Wnt、βcatenin的表達情況呈負相關（P＜0.01）。進一步分析TCEAL7表達情況與結直腸癌患者預后的關系，發現TCEAL7高表達患者的生存情況優于TCEAL7低表達患者（P＜0.05），說明TCEAL7具備作為結直腸癌腫瘤標志物的潛在價值。TCEAL7位于22.1-22.2區域的X染色體長臂，含有轉錄因子A（transcription factor A，TFA）結構域，可以通過依賴啟動子調節轉錄。Chien等[4]發現，TCEAL7在卵巢癌組織和細胞中低表達甚至無表達；過表達TCEAL7，可以抑制卵巢癌細胞的增殖，促進細胞凋亡，并可以在轉錄水平抑制NF-κB，c-myc和cyclin D1的表達。Huang等[6]報道，在胃癌組織和胃癌細胞中TCEAL7低表達，且TCEAL7的表達量與病灶的大小、臨床分期、有無淋巴結轉移有關，提示TCEAL7可能有評估胃癌患者預后的價值。

TCEAL7通過Wnt/β-catenin信號通路發揮其對腫瘤細胞的調節作用。TCEAL7在多種腫瘤中發揮抑癌基因的作用。Wnt和β-catenin是Wnt/βcatenin信號通路中的關鍵分子，在Wnt作用下βcatenin的磷酸化受到抑制，細胞質中β-catenin水平高，β-catenin進入細胞核內，調節靶基因的表達；當Wnt信號被異常激活時，引起細胞增殖、分化的異常[7,9,14-15]。結直腸癌腫瘤細胞核β-catenin的表達情況與肝轉移有關[8,16]。結直腸癌浸潤前沿細胞βcatenin表達水平明顯升高，同時，細胞核和細胞質中β-catenin的表達水平亦隨之升高[17]。這與本研究結果一致。本研究同時顯示，結直腸癌組織中TCEAL7的表達情況與Wnt、β-catenin的表達情況呈負相關（P＜0.01）。綜上所述，TCEAL7、Wnt、β-catenin 表達可能與結直腸癌患者臨床分期、淋巴結轉移情況、遠處轉移情況有關，TCEAL7與Wnt、β-catenin呈負相關。TCEAL7表達的高低可以提示結直腸癌患者的預后，具有作為腫瘤標志物的價值。