CD4+CD28null T細(xì)胞與糖尿病慢性并發(fā)癥的關(guān)系研究

湯珂珂 洪萍萍 裘雙燕 余筱燕 毛玉山

研究表明，糖尿病患者動(dòng)脈粥樣硬化具有發(fā)病年齡早、進(jìn)展快、病情重等特點(diǎn)，發(fā)生率比非糖尿病患者高出3倍［1］。而糖尿病腎病是2型糖尿病（T2DM）微血管病變的典型臨床表現(xiàn)，是糖尿病患者腎功能衰竭的主要原因，其嚴(yán)重性僅次于心腦血管疾病。CD4+CD28null T細(xì)胞是有記憶的細(xì)胞毒性效應(yīng)T細(xì)胞，近來被發(fā)現(xiàn)在多種自身免疫性疾病中發(fā)揮致病作用［2］。本研究旨在分析和探討T2DM患者外周血CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)與糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化及糖尿病腎病的相關(guān)性，報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 入選標(biāo)準(zhǔn)：選取2013年1月至2015年6月期間在浙江省臺(tái)州醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的156例T2DM患者，其中男83例，女73例；年齡25～88歲，平均（56.3±11.9）歲。符合中國(guó)糖尿病指南分型和診斷標(biāo)準(zhǔn)（2010年版）。根據(jù)是否存在血管病變分為單純糖尿病組（T2DM，n=41）、糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化組（DA，n=35）、糖尿病腎病組（DN，n=39）、糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化合并腎病組（DA+DN，n=41）。糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化篩查：以彩色多普勒B超常規(guī)檢測(cè)2型糖尿病患者頸動(dòng)脈內(nèi)-中膜厚度、有無斑塊及其性質(zhì)。內(nèi)膜粗糙及厚度＞110mm或局部有斑塊者診斷為頸動(dòng)脈粥樣硬化。糖尿病腎病篩查：收集患者24h小便，檢測(cè)其微量白蛋白濃度，計(jì)算24h尿微量白蛋白總量，＞30mg診斷為糖尿病腎病。需排除急慢性腎炎、發(fā)熱、泌尿道感染或充血性心衰等引起的蛋白尿和腎功能不全。排除標(biāo)準(zhǔn)：糖尿病急性并發(fā)癥患者；妊娠糖尿病患者；急性心梗、嚴(yán)重腦血管意外等合并癥患者；合并其他影響糖代謝的疾病患者，如甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)癥、庫(kù)欣綜合征、生長(zhǎng)激素瘤等患者；嚴(yán)重胃腸道及肝腎疾病哮；惡性腫瘤及艾滋病等免疫缺陷疾病患者；合并類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病等風(fēng)濕性疾病患者；并發(fā)急慢性感染患者。

1.2 方法 （1）檢測(cè)患者空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（PBG）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、24h尿蛋白、尿微量白蛋白、身高、體重、體重指數(shù)（BMI）、腰圍、臀圍、收縮壓、舒張壓等情況。（2）采用流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司FACSCalibur）測(cè)定2型糖尿病患者外周血CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)情況：患者于清晨空腹抽取靜脈血2ml，EDTA抗凝。取2支試管（a、b），a試管加入單抗MOUSE IgG1-FITC/MOUSE IgG2-PE（美國(guó)BD公司）。b試管加入CD4-PE/CD28-FITC單抗（美國(guó)BD公司）各20μl及100μl抗凝血混勻，避光15min。加溶血素2ml避光15min。300r/min離心10min，去上清液，加2ml PBS洗1次。每管加1%多聚甲醛0.5ml。以CD4/SSC散點(diǎn)圖設(shè)CD4+淋巴細(xì)胞門，分析CD4+CD28null T細(xì)胞亞群比率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布參數(shù)以（）表示，非正態(tài)分布參數(shù)以中位數(shù)（25%～75%四分位數(shù)間距）表示。正態(tài)分布參數(shù)多組間比較采用方差分析，非正態(tài)分布參數(shù)比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。正態(tài)分布參數(shù)兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布參數(shù)采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)。獨(dú)立影響因素分析采用Logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組間CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)情況及基本資料對(duì)照 見表1。

2.2 獨(dú)立影響因素分析 以糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化為因變量，以BMI、腰圍、臀圍、收縮壓、舒張壓、FPG、PBG、HbA1c、CRP、TC、TG、HDL-C、LDL-C、尿微量白蛋白、CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，在校正年齡和病程后所得到的結(jié)果顯示CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)、餐后血糖、CRP是糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立影響因素，見表2。以糖尿病腎病為因變量，以BMI、腰圍、臀圍、收縮壓、舒張壓、FPG、PBG、HbA1c、CRP、TC、TG、HDL-C、LDL-C、CD4+CD28null T細(xì)胞 亞 群的表達(dá)為自變量進(jìn)行Logistic回歸分析，在校正年齡和病程后所得到的結(jié)果顯示，CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)、腰圍是糖尿病腎病的獨(dú)立影響因素，見表3。

表1 各組間CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)情況及基本資料對(duì)照

表2 糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析

表3 糖尿病腎病相關(guān)危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析

3 討論

T細(xì)胞在糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病腎病中均扮演了重要的角色。多項(xiàng)研究表明，CD4+CD28nullT細(xì)胞可能參與大動(dòng)脈血管結(jié)構(gòu)的改變和動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生和發(fā)展［3-4］。本研究結(jié)果顯示，糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化組相比單純糖尿病組，糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化合并腎病組相比糖尿病腎病組，CD4+CD28null T細(xì)胞亞群表達(dá)均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Logistic回歸分析顯示，在校正年齡和病程后，CD4+CD28null T細(xì)胞亞群的表達(dá)、餐后血糖、CRP是糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立影響因素。近來有研究表明，CD4+CD28null T細(xì)胞亞群可以獨(dú)立影響糖尿病微血管病變的進(jìn)展［5］。Cantón A 等［6］提出CD4+CD28null T細(xì)胞可能參與糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，糖尿病腎病組相比單純糖尿病組CD4+CD28null T細(xì)胞表達(dá)明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Logistic回歸分析顯示，CD4+CD28null T細(xì)胞的表達(dá)、腰圍是糖尿病腎病的獨(dú)立影響因素。因而認(rèn)為CD4+CD28null T細(xì)胞的表達(dá)分別是糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病腎病的獨(dú)立影響因素。

已有研究表明，CD4+CD28null T細(xì)胞是在炎癥環(huán)境下產(chǎn)生的，產(chǎn)生很多病理過程，比如動(dòng)脈粥樣硬化及自身免疫性疾病。國(guó)外專家在具有高濃度CD4+CD28null T細(xì)胞的眼部玻璃體液中，也發(fā)現(xiàn)了高水平的細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)［6］。有研究提出糖尿病大血管病變和微血管病變可能存在一種共通性，即可能都存在一種微炎癥狀態(tài)。微炎癥狀態(tài)是一種由非微生物因素引起的慢性進(jìn)展的隱性炎癥狀態(tài)，表現(xiàn)為IL-6等細(xì)胞因子及CRP等炎癥標(biāo)志物輕度持續(xù)增高，引起各種慢性并發(fā)癥的發(fā)生［7］。本研究結(jié)果表明，糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化組和糖尿病腎病組的炎癥指標(biāo)CRP均顯著高于單純糖尿病組，證實(shí)了微炎癥狀態(tài)的存在以及這兩種糖尿病慢性并發(fā)癥的共通性。但本研究還發(fā)現(xiàn)糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化組的CRP指標(biāo)明顯高于糖尿病腎病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Logistic回歸分析顯示，CRP是糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立影響因素，卻不是糖尿病腎病的獨(dú)立影響因素。因而本研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)可能是CD4+CD28null T細(xì)胞影響2型糖尿病患者動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的主要途徑。但在2型糖尿病腎病中雖然也存在CD4+CD28null T細(xì)胞相關(guān)的炎癥反應(yīng)，還可能與其他CD4+T細(xì)胞和胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常、全身因素引起的局部改變等相關(guān)，其內(nèi)在機(jī)制仍需要進(jìn)一步深入研究。