基于伯樂數(shù)字PCR平臺檢測肺腺癌患者血液中表皮生長因子受體L858R突變

李瑋 喻正源（通訊作者）

（蘇州大學附屬第一醫(yī)院腫瘤科 江蘇 蘇州 215000）

肺癌位于世界癌癥發(fā)病率第一位，大部分肺癌患者發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)位于中晚期錯過了手術(shù)治療的機會。晚期肺癌的常規(guī)治療方法為放療和化療，但治療效果往往有限，患者生存質(zhì)量以及預后也較差。近年來隨著分子靶向藥物研究的發(fā)展，越來越多的分子靶向藥物成為腫瘤治療的另一有效手段[1]。大量研究發(fā)現(xiàn)部分肺癌患者腫瘤組織中存在著表皮生長因子受體的敏感突變，而絡(luò)氨酸激酶抑制劑也逐漸成為了表皮生長因子受體陽性的肺癌患者重要的治療藥物[2]。表皮生長因子的敏感突變主要包括其19外顯子缺失突變，L858R突變，L861Q突變，20外顯子插入突變，S768I突變，以及另外的幾種罕見突變[3-4]。而L858R突變幾乎占表皮生長因子受體的敏感突變的50%，故對L858R突變檢測具有重要臨床診療意義。本研究對50例晚期肺腺癌患者穿刺活檢組織以及匹配的外周血標本在數(shù)字PCR平臺上對表皮生長因子受體L858R突變進行檢測，并分析檢測數(shù)據(jù)，以研究伯樂數(shù)字PCR平臺在血漿游離DNA中檢測L858R突變的性能。

1.樣本來源及檢測方法

1.1 樣本的收集

收集2016年2月—2018年2月期間在蘇州大學附屬第一醫(yī)院病理科病理診斷為肺腺癌患者的活檢石蠟組織50例，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期。50例樣本中男性23例，女性27例。平均年齡64歲。并在治療前采集這50例患者的外周血標本。使用10ml無創(chuàng)cell free DNA專用采血管（美國streck公司）進行外周血采集，采血后30min內(nèi)進行1200g離心，離心時間為12min。吸取上層血漿轉(zhuǎn)移至2ml離心管，15000g離心14min，吸取上層無懸浮物血漿進行游離DNA提取。

1.2 血漿游離DNA的提取

血漿游離DNA的提取采用血清/血漿游離DNA分離試劑盒（德國qiagen公司）。DNA濃度定量使用qubit3.0（美國Thermo Fisher Scientific公司）。

1.3 L858R突變檢測

采用數(shù)字微滴式PCR儀 QX200（美國Bio-Rod公司）及伯樂數(shù)字PCR L858R突變檢測試劑盒檢測標本中L858R突變。結(jié)果判讀均參照說明書指示。

2.結(jié)果

2.1 50例肺癌患者組織及血漿游離DNA L858R突變結(jié)果

50例患者穿刺活檢標本中使用數(shù)字PCR法檢測到14例L858R突變陽性，36例陰性。血漿游離DNA中數(shù)字PCR法檢測到11例L858R突變陽性，39例陰性。活檢組織和匹配的血漿游離DNA突變檢測一致率為78.57%。

表 50例肺腺癌患者活檢組織及血漿游離DNA的數(shù)字PCR法L858R突變檢測結(jié)果

3.討論

隨著對肺癌診治研究的深入，對其的治療方法已經(jīng)逐漸從單一的化療發(fā)展到現(xiàn)在的分子治療以及免疫治療時代。絡(luò)氨酸激酶抑制劑對表皮生長因子受體突變的患者有著副作用小，治療效果好等優(yōu)點。對表皮生長因子的檢測也逐漸成為主流的肺癌患者診治手段。我們在50例患者血漿游離DNA標本使用數(shù)字PCR法檢測到11例L858R突變陽性，39例陰性；匹配的活檢組織中檢測到14例L858R突變陽性，36例陰性，檢測一致率達到了78.57%。這個結(jié)果顯示數(shù)字PCR在血漿游離DNA L858R突變檢測上已經(jīng)接近了活檢組織的檢測結(jié)果，未來在L858R突變檢測上，血漿游離DNA L858R檢測可以成為一種非常有效的檢測方法進行補充。而受限于病人血液質(zhì)量難以控制，腫瘤不均一性，血漿游離DNA不易保存等情況，目前還達不到活檢組織的檢測敏感度，相信未來隨著對液態(tài)活檢的進一步深入以及檢測工藝的改進，數(shù)字PCR在液態(tài)活檢上會扮演更加重要的角色。