一例血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染的診斷

呂遠蓉　王懷禹　魏玲

摘要：2017年3月，四川省某養雞場飼養的肉雞突然出現精神萎靡、心包積液、肝臟腫大和壞死為主要特征的疫病，臨床初步診斷為Ⅰ群禽腺病毒感染，取送檢的病料組織進行實驗室病毒分離鑒定，并通過分子生物學PCR檢測和序列分析，最終確定該養雞場發生了血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染并分離到致病毒株，養殖場應該引起對該病的重視。

關鍵詞：Ⅰ群禽腺病毒；感染；診斷

近3年來，我國各地陸續發生由血清4型Ⅰ群禽腺病毒（fowl adenovirus，FAV-Ⅰ）引起的一種病毒性疾病，該病主要表現為雞心包積水綜合征和雞包涵體肝炎等特征，因此該病又稱心包積水綜合征（hydropericardium syndrome，HPS）和安卡拉病（angara disease，AD）。該病死亡率高達80%以上，給我國養禽業造成了很大的經濟損失，是當前危害養雞業的一種重要的病毒性傳染病。該病的主要臨床表現為3～8周齡的雞突然死亡，初期診斷較為困難，一般無明顯的臨床癥狀，通常發病7天后，死亡率逐漸上升。2017年12月，四川省某養雞場飼養的肉雞突然出現精神萎靡不振、排黃綠色糞便、死亡等臨床癥狀，剖檢可見心包積液嚴重，腎臟和肺臟腫大，肝臟腫大、變色、壞死。取送檢的病料組織進行實驗室病毒分離和鑒定，通過分子生物學PCR檢測和核酸序列分析，最終確定該養雞場發生了血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染并分離到致病毒株，現將診斷過程報道如下。

1材料和方法

1.1 SPF雞與SPF雞胚

SPF雞及SPF雞胚購自濟南斯帕法斯家禽有限公司。

1.2臨床癥狀與病理變化觀察

觀察發病雞的臨床癥狀，并對病死雞進行解剖，觀察病理變化。

1.3病料樣品的采集與處理

無菌采集剖解雞的心包積液和肝臟組織作為臨床病料樣品，低溫運送至實驗室檢測。將病料樣品按3信體積的比例加滅菌生理鹽水，利用研磨器進行研磨，研磨后組織液反復凍融3次，采用12，000r/min離心10min，吸取上清液加入青、鏈霉素，4℃過夜，次日取病毒液進行病毒分離。

1.4病毒分離與雞胚病變觀察

將處理后的病料樣品通過卯黃囊途徑接種6日齡SPF雞胚10枚，同時取5枚SPF雞胚接種生理鹽水作為對照，37℃孵育168h，同時棄去24h內死亡雞胚，記錄雞胚死亡時間，將24～168h死亡的雞胚放4℃保存，168h后對死亡雞胚全部解剖并觀察絨毛尿囊膜病變和雞胚發育情況，收集死亡雞胚的卯黃連續接種6日齡SPF雞胚并盲傳3代。

1.5 PCR檢測與序列鑒定

根據相關方法，設計合成1對Ⅰ群禽腺病毒檢測引物，利用病毒基因組DNA提取試劑盒提取臨床病料樣品和第3代分離毒的病毒基因組DNA，按照參考文獻中的PCR擴增程序進行PCR擴增，PCR擴增產物利用瓊脂糖凝膠電泳檢測，對特異性擴增片段利用膠回收試劑盒回收純化，將回收產物送生工生物工程（上海）股份有限公司進行序列測定，將測序結果利用Blast軟件與GenBank中登錄的序列進行比對。

2結果與分析

2.1臨床癥狀與病理變化觀察結果

病雞精神萎靡不振，排黃綠色糞便，發病雞死亡，剖檢可見心包積液嚴重，心包腔中有黃色透明的液體，肝臟出血、腫脹、腫大、變色、壞死。腎臟和肺臟腫大。

2.2病毒分離與雞胚病變觀察結果

10枚SPF雞胚接種后在64～96h死亡，盲傳3代后，死亡時間集中在48～72h，剖檢死亡雞胚均可見雞胚卯黃膜增厚，胚體較小且發育不良，羽毛稀少，體表發紅，尿囊液渾濁，個別雞胚有尿酸鹽沉積。對照組雞胚無死亡，發育良好，解剖無任何病變。

2.3 PCR檢測與序列鑒定結果

PCR擴增產物經1.0%瓊脂糖凝膠電泳，在位于約502bD處出現特異性DNA擴增條帶，與李天芝等專家的報道完全一致。PCR擴增產物的測序結果經序列比對證實為血清4型FAV-Ⅰ特異性序列。

3討論

Ⅰ群禽腺病毒是腺病毒科禽腺病毒屬成員，可感染各種禽類并且各種日齡的禽類均易感，導致禽類生產性能下降和不同程度地死亡，給養禽業帶來巨大的經濟損失。腺病毒在禽體內是一種條件性病原體，一般情況下不表現臨床癥狀，但機體抵抗力低下時，特別是并發感染時，腺病毒會表現出嚴重的致病性。該病自2015年開始，在我國多地暴發并流行，該病主要侵害幼齡雞群，特別是3～8周齡育雛、育成期肉雞，病死率最高可達80%以上。Ⅰ群禽腺病毒對外界抵抗力不強，只要做好雞舍的消毒和日常管理，就可以減少病原體數量，防止病毒水平傳播。預防本病可以在雞群中適量補充微量元素和維生素B、C、K及魚肝油等，提高雞群免疫力，增強雞群抗病力。一旦有雞發病要采取隔離措施，種蛋也可能成為疾病傳播來源，要加強監測，要做好引進種蛋和種雞的病原檢測和凈化，這對防止雞腺病毒感染十分重要。此外，控制好傳染性法氏囊病毒、雞傳染性貧血病毒等免疫抑制性病原也是預防禽腺病毒感染的重要手段。Ⅰ群禽腺病毒至少有12個血清型，血清型的復雜也增加了疫苗研制的難度。國內目前還沒有商品化的疫苗用來防控禽腺病毒感染，但是各生物公司研制的滅活疫苗已經處于臨床試驗階段，相信在不久就可以應用于禽腺病毒防控之中。