忌酸顆粒的藥物依賴性研究

王彥禮，馬旭冉，劉佳星，宋紅新，楊偉鵬

(中國中醫科學院中藥研究所，北京 100700)

忌酸丸記載于清代醫家何書田著《救迷良方》中，在林則徐的禁煙運動中發揮了顯著作用[1]，經現代考證，忌酸丸組成為東洋參15 g，炒白術9 g，白當歸7.5 g，真川柏12 g，川黃連12 g，炙甘草9 g，廣陳皮7.5 g，生柴胡10.5 g，明天麻9 g，廣木香7.5 g，炙黃芪9 g，綠升麻0.5 g，沉水香7.5 g，生附子2.1 g，鴉片膏16.8 g組成，各藥以面糊為丸服用，具有溫補脾腎，益氣升陽，滋陰平肝，制癮戒毒的功效。

忌酸顆粒是根據戒毒古方忌酸丸進行組方優化而成，在忌酸丸原方基礎上，去鴉片膏，用西洋參等量替代東洋參，加洋金花0.5 g，酸棗仁12 g，延胡索12 g，制成顆粒制劑后，成人日用量為27 g生藥/日，用于阿片類毒品急性戒斷之后稽延性癥狀的治療，經藥效學研究證明具有鎮痛、鎮靜、提高機體免疫力、止瀉等作用。

藥物依賴性是指帶有強制性的渴求、追求與不能間斷使用某種或某些藥物或物質。藥物依賴是由成癮物質和肌體相互作用而產生的精神與軀體狀況，以強制性地使用藥物或物質來取得特定的心理效應，并借此避免戒斷綜合征的不適感受。對于新藥尤其是戒毒相關新藥的研究，為發現其是否存在潛在的依賴性，應進行藥物依賴性的試驗。所以本研究通過自然戒斷試驗和條件性位置偏愛試驗來考察和評價忌酸顆粒產生藥物依賴性的潛力和相對于嗎啡的依賴程度。

1 實驗材料

1.1 動物

SD大鼠， SPF級，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號:SCXK(京)2012-0001。行為學測試前在測試實驗環境適應3 d。

1.2 藥品及試劑

受試藥物：忌酸顆粒，由中國中醫科學院中藥研究所中藥制劑研究中心提供。用無菌注射用水配成所需濃度溶液。現用現配，常溫保存。鹽酸嗎啡，青海制藥廠有限公司生產，批號20150505。

1.3 儀器

大鼠條件性位置偏愛(CPP)裝置(美國，Med Associates Inc.)由電腦、主機和訓練箱組成。訓練箱的大小為70 cm×22 cm×22 cm，被分割為3個部分，分別為黑盒、灰盒和白盒，灰盒位于黑、白盒之間。黑盒的底部為1 cm寬的鐵絲柵欄，白盒的底部為1 cm見方的鐵絲網，灰盒底部為灰色塑料底板。黑盒和灰盒之間、白盒和灰盒之間均有可打開的門。訓練箱分別放在具有通風和照明裝置的隔音箱內。實驗過程中的數據記錄由計算機自動完成。

2 實驗方法

2.1 大鼠條件性位置偏愛試驗

分四步進行，采用無偏平衡設計[2]。第一步:(Test-0)天然傾向性測定及分組：在第1天，將大鼠放入隔門打開的條件性位置偏愛訓練箱內，測定大鼠在 15 min內在各盒停留時間，以此判斷大鼠的天然傾向性。計算大鼠在黑、白盒停留時間的差值的均數，去除天然傾向性比較大的(黑、白盒停留時間大于或接近200 s)。適合要求的45只大鼠共分為5組，每組9只。分10籠飼養。分組依據：各組大鼠的訓前條件性位置偏愛得分值接近，組間無統計學差異。5個組別包括：溶劑對照組，嗎啡組(陽性藥對照)組，受試藥物低、中、高三個劑量組。

第二步:條件性位置偏愛訓練。第1、3、5、7天，陽性藥物組和受試藥物組動物灌胃給予藥物，然后放入CPP設備的伴藥盒內停留45 min；第2、4、6、8天，灌胃給予溶劑放入CPP設備的非伴藥盒內停留45 min。溶劑對照組均灌胃給予溶劑，其它處置方式與受試藥物組相同。

第三步:(Test-1)條件性位置偏愛效應的測定：在第6天, 將各組動物放入CPP測試箱內測試15 min，記錄大鼠在伴藥盒和非伴藥盒內停留時間和停留次數。以各組大鼠給藥后伴藥盒與非伴藥盒停留時間差值，作為評價條件性位置偏愛效應形成與否的得分。根據得分情況判斷受試藥物的精神依賴性的有無和相對強度。

大鼠隨機分為5組，每組9只，♀♂各半，5組分別為NS對照組(皮下注射)，嗎啡對照組(皮下注射，10 mg/kg)，忌酸顆粒低、中、高三個劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg。先進行基礎值測試，然后進行分組，然后按照以上劑量隔天給予大鼠，共4次，為期8天的訓練。訓練結束之后進行測試位置偏愛。

2.2 大鼠自然戒斷試驗

大鼠隨機分為5組，每組10只，♀♂各半，5組分別為NS對照組(皮下注射)，嗎啡對照組(皮下注射，40 mg/kg)，忌酸顆粒低、中、高三個劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg。以上劑量每天分3次經口灌胃給藥(8:00，13:00，18:00)，連續給藥30 d，第31天停止給藥。第30天給藥結束之后每天稱量大鼠體質量3次(8:00，14:00，20:00)，連續稱量8 d。以給藥前一天體質量均值為基礎值，計算各組戒斷后各天體質量變化率。

2.3 數據處理

數據以均數±標準差表示，組間均值的比較采用成組t檢驗或方差分析，組內不同時間點比較使用重復測量方差分析。當P<0.05時認為均值差別有統計學意義。

3 結果

3.1 忌酸顆粒給藥訓練大鼠的條件性位置偏愛得分

圖1 忌酸顆粒給藥訓練大鼠的條件性位置偏愛得分

t檢驗結果顯示，嗎啡訓練后的CPP值顯著升高(P<0.05)，而生理鹽水(P>0.05)、低劑量組(P>0.05)、中劑量組(P>0.05)和高劑量組(P>0.05)訓練后CPP值無顯著差異，提示嗎啡訓練能夠形成大鼠CPP，而忌酸顆粒低、中、高三個劑量組不能夠訓練形成CPP。

在研究劑量范圍內(忌酸顆粒低、中、高三個劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥大鼠沒有形成條件性位置偏愛。

3.2 忌酸顆粒給藥大鼠自然戒斷后的體質量變化

圖2 忌酸顆粒給藥大鼠自然戒斷后的體質量變化

采用重復測量方差分析，以測試時間作為組內因素(自然戒斷后第1～7天)，以處理方式(生理鹽水組、嗎啡組、忌酸顆粒低、中、高三個劑量組)作為組間因素，結果顯示隨著自然戒斷時間的延長，大鼠體質量顯著增高(時間效應：F6,38=68.775,P<0.001)，且時間和分組無交互作用(分組×時間交互效應：F6.38=1.522，P>0.05)，說明時間因素(即戒斷后1～7 d)的作用不隨分組的不同而不同；同時結果顯示組間效應(F4,43=27.404，P<0.001)具有統計學差異，表明生理鹽水、嗎啡、忌酸顆粒低、中、高三個劑量對大鼠自然戒斷后體質量變化具有顯著影響。Post-hoc分析顯示，生理鹽水組(P<0.001)、低劑量組(P<0.001)、中劑量組(P<0.001)和高劑量組(P<0.001)的體質量變化與嗎啡組相比具有顯著性差異。此外，生理鹽水組、低劑量、中劑量和高劑量組間無統計學差異(P>0.05)。進一步分析表明自然戒斷后第1～7天，低劑量組、中劑量組、高劑量組和生理鹽水組與嗎啡組相比，差異具有統計學意義(第1天：F4,43=47.415，P<0.001； 第2天：F4,43=50.574，P<0.001； 第3天：F4,43=32.148，P<0.001；第4天：F4,43=21.103，P<0.001；第5天：F4,43=18.557，P<0.001；第6天：F4,43=20.826，P<0.001；第7天：F4,43=11.855，P<0.001)。此外，低劑量、中劑量和高劑量組與生理鹽水間無統計學差異(P>0.05)。說明嗎啡組在自然戒斷后體質量變化明顯低于其他各組。

在研究劑量范圍內(忌酸顆粒低、中、高三個劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥30 d戒斷之后大鼠的體質量沒有出現明顯的下降。

4 討論

忌酸丸具有溫補脾腎，益氣升陽，滋陰平肝，制癮戒毒的功效，用于久吸阿片成癮之脾腎不足，氣虛陽陷，而見倦怠乏力，食少嘔惡，大便溏瀉，萎黃羸瘦，心煩頭痛，周身痠疼，頭暈目眩，盜汗遺精，脈虛無力者。忌酸顆粒是基于戒毒古方忌酸丸進行處方優化而制成，即在忌酸丸原方基礎上，去鴉片膏，用西洋參等量替代東洋參，加洋金花、酸棗仁、延胡索，用于阿片類毒品急性戒斷之后稽延性癥狀的治療。相比于目前上市的戒毒藥物多針對急性戒斷癥狀的治療[3]，忌酸顆粒對于急性戒斷癥狀之后出現的稽延性癥狀具有較好的治療作用。

世界衛生組織將藥物依賴性分為精神依賴性和身體依賴性。精神依賴性又稱心理依賴性，凡能引起令人愉快意識狀態的任何藥物即可引起精神依賴性，精神依賴者為得到欣快感而不得不定期或連續使用某些藥物。主要有鎮靜催眠藥，如安定、舒樂安定、巴比妥類、甲喹酮等。身體依賴性也稱生理依賴性，用藥者反復地應用某種藥物造成一種適應狀態，停藥后產生戒斷癥狀，使人非常痛苦，甚至危及生命。常見于麻醉性鎮痛藥(多為阿片類)，如嗎啡、海洛因、哌替啶、曲馬多、美沙酮、丁丙諾啡(布諾啡)等，其中美沙酮和布諾啡因戒斷癥狀輕較而用于戒毒時的“替代遞減法”。能引起依賴性的藥物常兼有精神依賴性和身體依賴性，阿片類和催眠鎮痛藥在反復用藥過程中，先產生精神依賴性，后產生身體依賴性。

阿片類藥物、鎮靜催眠藥等長時間應用易產生成癮性[4]，藥物或行為引起的欣快感強化了腦內愉快中樞的記憶, 形成一種獎賞機制,可使成癮者產生難以抑制的渴求感，臨床表現主要有精神依賴性和身體依賴性。忌酸顆粒中含有洋金花、制附子、延胡索和酸棗仁等具有鎮痛和安神作用的中藥，有必要在肯定藥效作用的同時考察人體對其的藥物依賴性。

條件性位置偏愛試驗是用來評價精神依賴性的經典實驗。在本項研究中，通過大鼠的位置偏愛試驗，發現在研究劑量范圍內(忌酸顆粒低、中、高三個劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥大鼠沒有形成條件性位置偏愛。提示在灌胃給藥方式下，在條件性位置偏愛的模型中，研究劑量范圍內的忌酸顆粒無明顯的精神依賴性。自然戒斷試驗是評價軀體依賴性的實驗。通過大鼠的軀體依賴性試驗，發現在研究劑量范圍內(忌酸顆粒低、中、高三個劑量組生藥量分別10 g/kg，20 g/kg，40 g/kg)，忌酸顆粒給藥30 d戒斷之后大鼠的體質量沒有出現明顯的下降。提示在灌胃給藥方式下，在自然戒斷的模型中，研究劑量范圍內的忌酸顆粒無明顯的軀體依賴性。

忌酸顆粒作為來源于古方的戒毒候選藥物，其成藥性研究應側重于藥效學和安全性，本次研究和前期研究證明忌酸顆粒對于稽延性癥狀相關藥效指標具有較好的治療作用，并且無明顯的藥物依賴性，初步說明其具有較好的新藥開發的潛質，還應結合其他安全性研究進行綜合評估。