OST經鼻給藥對AD模型鼠中樞膽堿能神經環路的調控研究

田春雨，米亞新，李 穎，榮大佑，徐 麗，侯雪芹*

（山東第一醫科大學（山東省醫學科學院）藥學院，山東 泰安 271016）

蛇床子為傘形科植物蛇床Cnidium monnieri（L）Cuss.干燥成熟果實。用藥歷史悠久，經現代藥理藥理學研究發現，對神經系統具有較強的藥理活性。但由于該藥具有腦內濃度低，分布快，消除也快，生物利用度較低等特點，目前鮮有人開展研究。本研究以此為突破，研究新型劑型蛇床子素經鼻給藥抗AD功效。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗動物選用8月齡昆明種雌性小鼠60只，SPF級，體重18～22 g，由山東省實驗動物中心提供。蛇床子素（Osthole，Ost）純度≥98%，北京普天同創生物科技有限公司商城分公司[CAS:484-12-81]；3%戊巴比妥鈉（Sigma）；0.9%生理鹽水（辰欣藥業股份有限公司）；鹽酸多奈哌齊（安理申衛材（中國）藥業有限公司制造批準文號：國藥準字H20050978）等。

1.2 實驗方法

東茛菪堿致記憶障礙模型制備：參照葉翠飛等方法略加改進，第21天，每天灌胃給藥后30 min，對小鼠進行腹腔注射氫溴酸東茛菪堿3 mg/kg正常對照組以等量生理鹽水替代，造模后30 min進行Morris水迷宮測試。

腦組織和血清樣品采集：Morris水迷宮和明暗箱實驗完畢后，實驗動物禁食12 h，配制4%水合氯醛，以400 mg/kg劑量腹腔注射麻醉小鼠，眼球取血，靜置2 h，4℃、1000 rpm離心20 min，分離血清。斷頭取腦組織。

1.3 統計學方法

應用SPSS 18.0統計軟件進行分析，數據表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

蛇床子素對AD小鼠學習記憶的影響：逃避潛伏期（Escape latency）經重復測量方差分析，球形檢驗（Mauchly's Test of Sphericity）結果Mauchly's W=0.453，P=0.000，滿足球形檢驗，可以不用校正而直接進行重復測量的單變量方差分析。組內變異結果（Tests of Within-Subjects Effects）顯示訓練天數效應F=63.336，P=0.000，提示實驗動物的逃避潛伏期隨著訓練天數的增加而有變化趨勢；訓練天數與分組的交互效應（F=0.923，P=0.55）提示訓練天數的作用不隨分組的不同而有差異。進一步選用LSD法對5天逃避潛伏期進行組間的兩兩比較，結果顯示各組逃避潛伏期隨訓練時間增加呈現縮短趨勢。模型組第1-5天逃避潛伏期比正常組延長，差異有統計學意義（第2、5天：P＜0.05）；給藥組與模型組相比，蛇床子素組第5天逃避潛伏期均明顯縮短，差異有統計學意義（P＜0.05）。

蛇床子素對AD小鼠腦膽堿能神經遞質的影響：蛇床子素各劑量組對AD小鼠腦內Ach濃度檢測。單因素方差分析結果顯示各組Ach濃度（F=5.371，P=0.002）。組間兩兩比較顯示，模型組皮質Ach濃度、較正常。組明顯減少，差異有統計學意義（P＜0.05）。與模型組比，蛇床子素給藥組皮質區Ach濃度增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 結 論

蛇床子素具有改善中樞膽堿能損傷，提高小鼠學習記憶的作用，東莨菪堿誘導小鼠建癡呆模型可以引起小鼠認知功能的障礙，同時降低癡呆小鼠中樞膽堿能神經環路中乙酰膽堿和膽堿乙?；D移酶的含量。蛇床子素可以改善癡呆模型小鼠認知功能障礙，增加癡呆小鼠中樞膽堿能神經環路中乙酰膽堿（ACH）的含量，提高乙酰膽堿酯酶（AchE）活性。