三丁酸甘油酯對草魚幼魚體成分與形體指標及腸道消化酶的影響

李雅敏　劉艷莉　石勇　胡毅　鐘蕾　王振東

摘要? ? 為研究草魚飼料中添加三丁酸甘油酯對其魚體成分、形體指標及腸道消化酶的影響。選取健康的草魚幼魚（20.04 g±0.19 g）隨機分為4組，每組設置3個重復，分別投喂基礎日糧（T1）以及基礎日糧中添加300 mg/kg（T2）、600 mg/kg（T3）、1 000 mg/kg（T4）三丁酸甘油酯飼糧，在水庫網(wǎng)箱中進行8周的養(yǎng)殖試驗。結(jié)果表明，T4組的魚體粗蛋白含量較基礎日糧組（T1）有提高的趨勢（P>0.05），水分含量顯著降低（P<0.05），各組之間的粗脂肪和粗灰分含量無顯著差異（P>0.05）。與基礎日糧組相比，T2、T3和T4組的肝體比顯著提高，T2組的腸體比顯著提高（P<0.05）。T3和T4組的肥滿度、臟體比、腸體比和腸長比均有上升的趨勢（P>0.05）。T3組腸道脂肪酶活力較T1組顯著提高，T4組的淀粉酶活力顯著提高（P<0.05）。綜上可得，飼料中添加三丁酸甘油酯能夠改變草魚幼魚的魚體成分和形體指標，提高腸道消化酶活力。

關鍵詞? ? 三丁酸甘油酯;草魚;體成分;形體指標;腸道消化酶

中圖分類號? ? S963? ? ? ? 文獻標識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2019）24-0185-03? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

Abstract? ? The experiment was conducted to study the effects of tributyrin on the body composition，body index，and intestinal digestive enzymes of Ctenopharyngodon idellus.Healthy Grass carps（20.04 g±0.19 g）were randomly divided into 4 groups with 3 replicates，and fed the basal diet（T1）and the basal diet were added with 300 mg/kg（T2）、600 mg/kg（T3）and 1 000 mg/kg（T4）tributyrin diet for 8 weeks.The results showed that the crude protein content in the T4 group was higher than that in the control group（P>0.05），and the water content was significantly lower（P<0.05）.There was no signific-ant difference in crude fat and ash content between the groups（P>0.05）.Compared with the T1 group，the hepatosomatic index of the T2，T3，and T4 groups significantly increased，and the intestosomatic index（ISI）of the T2 group significantly increased（P<0.05）.The condition factor，visceral index，ISI and relative gut length of T3 and T4 groups all increased（P>0.05）.The intestinal lipase activity of T3 group was significantly higher than that of T1 group，and the amylase activity of T4 group was significantly increased（P<0.05）.In summary，the addition of tributyrin to the feed can change the fish body compo-sition and body index of the grass carp，improve the intestinal digestive enzyme activity.

Key words? ? tributyrin;Ctenopharyngodon idellus;body composition;body index;intestinal digestive enzyme

隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)高度集約化和工廠規(guī)模化的快速發(fā)展，抗生素濫用引發(fā)的細菌耐藥性[1]、藥物殘留[2]、水域環(huán)境污染[3]及水產(chǎn)動物免疫功能受到抑制[4]等問題日益凸顯。草魚（Ctenopharyngodon idellus）是我國年產(chǎn)量最大的淡水魚類，據(jù)2019年漁業(yè)統(tǒng)計年鑒，2018年草魚產(chǎn)量高達550.43萬t，同比增長2.97%[5]。草魚幼魚的腸道等消化器官發(fā)育還不完善，環(huán)境和飼料的雙重脅迫易導致草魚出現(xiàn)各種疾病，危害草魚的生長發(fā)育[6]。因此，尋求一種綠色、高效、無污染的飼料添加劑對生產(chǎn)安全、環(huán)保、優(yōu)質(zhì)的草魚來說具有非常重要的意義。

三丁酸甘油酯（Tributyrin，TB）是一種短鏈脂肪酸酯，其具有較低的熔點（-75 ℃）和較高的沸點（305～310 ℃），適合目前各類飼料加工的生產(chǎn)工藝[7]。在豬[8]和菊黃東方鲀（Ta-kifugu flavidus）[9]上的研究發(fā)現(xiàn)，三丁酸甘油酯能夠提高腸道消化酶活力，提高機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力。同時，在肉雞[10]和菊黃東方鲀[9]上得出三丁酸甘油酯會對機體的營養(yǎng)成分有一定的影響。但目前有關三丁酸甘油酯對草魚的作用研究鮮有報道。本研究通過向草魚幼魚飼料中添加不同水平的三丁酸甘油酯，探究其對草魚幼魚體成分、形體指標和腸道消化酶活力的影響，以期為三丁酸甘油酯在水產(chǎn)飼料中的應用提供理論基礎。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗飼料的制作

參照草魚幼魚的營養(yǎng)參數(shù)和商品飼料配方，以魚粉、豆粕、棉粕和菜粕為蛋白源，豆油為脂肪源，面粉為糖源，配制4組等氮等脂的飼料。分別為基礎日糧組（T1）以及在基礎日糧組中分別添加300 mg/kg（T2）、600 mg/kg（T3）和1 000 mg/kg（T4）三丁酸甘油酯（由青島柯能生物科技有限公司提供）的4個試驗組，每個處理組設置3個重復。在飼料制備之前，魚粉和豆粕等飼料原料先粉碎，過40目篩網(wǎng)，再按配比從小到大逐級定量均勻混合;再將其放入V型攪拌機中充分混合25 min。隨后將豆油與已混好的干粉充分混合，再加入適量的水揉勻，將其加工制成直徑2.0 mm的顆粒飼料，晾干至飼料水分為10%左右，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩ｏ暳吓浞奖砑盃I養(yǎng)成分見表1。

1.2? ? 試驗動物的飼養(yǎng)與管理

選用同規(guī)格、同批次的健康草魚魚苗，在婁底水庫中進行網(wǎng)箱養(yǎng)殖。正式養(yǎng)殖試驗之前，馴食1周以適應環(huán)境和飼料（5 m×5 m×5 m）。饑餓24 h后，挑選規(guī)格一致、體質(zhì)健壯的草魚幼魚隨機分到各個網(wǎng)箱（2 m×2 m×2 m），每個網(wǎng)箱投放40尾草魚，草魚初始體重（20.04±0.19）g。每天投喂3次，投喂時間為7：00、12：00和17：00，日投餌量為體質(zhì)量的3%～5%，養(yǎng)殖周期為8周。養(yǎng)殖試驗期間，水溫為27.0～31.0 ℃。

1.3? ? 樣品采集

試驗第8周結(jié)束時，禁食24 h，每網(wǎng)箱隨機選取5尾草魚測量體長、體重后，冰盤迅速解剖并分離內(nèi)臟團、肝胰臟，腸道并稱取重量，測量腸道長度，計算形體指標。同時用冷凍的去離子水沖去剔除的腸周圍脂肪和內(nèi)容物，取腸道放入1.5 mL離心管中，編號并標記，放入-80 ℃冰箱保存?zhèn)錅y腸道消化酶活力。取5尾草魚置于-20 ℃冰箱冰凍作全魚樣品，用于體成分的測定。

1.4? ? 指標測定

1.4.1? ? 魚體營養(yǎng)成分。魚體常規(guī)成分測定參照文獻[11]。其中水分的測定采用105 ℃烘箱干燥恒重法測定，粗蛋白的測定采用凱氏定氮法，粗脂肪的測定采取索氏抽提法，粗灰分采用550 ℃灼燒法測定。

1.4.2? ? 形體指標。肥滿度（CF）（g/cm3）=100×終末魚重（g/尾）×體長（cm/尾）-3;臟體指數(shù)（VSI）（%）=100×內(nèi)臟重量（g/尾）/終末魚重（g/尾）;肝體指數(shù)（HSI）（%）=100×肝胰臟重量（g/尾）/終末魚重（g/尾）;腸體指數(shù)（ISI）（%）=100×腸道重量（g/尾）/終末魚重（g/尾）;腸長指數(shù)（RGL）（%）=100×腸道長度（cm/尾）/終末魚重（g/尾）。

1.4.3? ? 腸道消化酶。腸道消化酶在測定前需將腸道樣品解凍，淀粉酶和脂肪酶用生理鹽水進行勻漿，胰蛋白酶用勻漿介質(zhì)進行勻漿，放入離心機3 500 r/min下離心10 min，取上清液保存待測，然后用南京建成生物有工程研究所試劑盒進行測定，測定儀器為酶標儀（Thermo-1510）和分光光度計（UV-5200）。

1.5? ? 數(shù)據(jù)處理與分析

通過SPSS 19.0和Excel 2016對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析和數(shù)據(jù)處理，若數(shù)據(jù)差異顯著（P<0.05），則Duncan分析進行多重檢驗，數(shù)據(jù)用平均值±標準誤（Mean±SE）表示。

2? ? 結(jié)果與分析

2.1? ? 魚體營養(yǎng)成分

由表2可知，與對照組T1相比，T4組的水分含量顯著下降（P<0.05），粗蛋白含量有提高的趨勢，T2、T3組的魚體水分和粗蛋白含量無顯著差異（P>0.05）。各組之間的粗脂肪和粗灰分含量無顯著差異（P>0.05）。

2.2? ? 形體指標

由表3可知，與對照組T1相比，T2、T3和T4組的肝體指數(shù)顯著提高（P<0.05），T2組的腸體指數(shù)顯著提高（P<0.05）。T3和T4組的肥滿度、臟體指數(shù)、腸體指數(shù)和腸長指數(shù)較對照組均有上升的趨勢（P>0.05）。

2.3? ? 腸道消化酶活性

由圖1、2、3可知，與對照組T1相比，T3組草魚腸道脂肪酶活力顯著提高（P<0.05），淀粉酶和胰蛋白酶活力呈下降趨勢（P>0.05）。T1、T2和T4組間的脂肪酶活力無顯著變化（P>0.05）。T2組的淀粉酶活力較T1組有提高的趨勢（P>0.05），T4組顯著提高（P<0.05）。T2和T4組的胰蛋白酶活力與對照組T1比有提高的趨勢（P>0.05）。

3? ? 結(jié)論與討論

該試驗結(jié)果表明，飼料中添加三丁酸甘油酯能夠改變草魚幼魚的魚體成分、提高肝體指數(shù)、腸體指數(shù)等形體指標，增加腸道消化酶活力。

魚類的營養(yǎng)價值主要在于魚肉中含有豐富的完全蛋白質(zhì)。通常來說，魚體營養(yǎng)成分是比較穩(wěn)定的。本研究結(jié)果表明，與對照組相比，不同添加量的三丁酸甘油酯對草魚幼魚的魚體粗脂肪和粗灰分含量無顯著影響，這與研究丁酸鈉對草魚[12]體成分的作用研究結(jié)果類似。但是添加1 000 mg/kg三丁酸甘油酯顯著降低了草魚魚體的水分含量，粗蛋白含量有提高的趨勢。這說明三丁酸甘油酯能促進蛋白質(zhì)的合成，原因可能與丁酸能調(diào)節(jié)機體內(nèi)分泌水平有關[13]，具體原因需要進一步深入的研究。陳秀梅等[14]在建鯉（Cyprinus carp-iovar Jian）上的研究也發(fā)現(xiàn)γ-氨基丁酸（4-Aminobutyric acid）的添加提高了魚體肌肉中的蛋白質(zhì)含量。

魚體肥滿度是檢驗魚體肥瘦的重要指標，臟體比、肝體比、腸體比和腸長比是判斷內(nèi)臟、肝臟及腸道發(fā)育程度的關鍵標志。本試驗結(jié)果顯示，添加600、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯的處理組較對照組而言，草魚的肥滿度和臟體比均有提高的趨勢。喬麗紅等[15]研究表明，三丁酸甘油酯有提高建鯉臟體比的趨勢;而孫浪等[16]發(fā)現(xiàn)2.5 g/kg丁酸鈉可以顯著提高鯽魚（Carassius auratus）的肥滿度。上述研究結(jié)果與本結(jié)果類似。同時，與對照組相比，添加不同水平的三丁酸甘油酯顯著提高了草魚幼魚的肝體比。這可能是因為丁酸能促進乙酰COA合成脂肪，或通過羥甲基戊二酸單酰COA途徑促進胴體合成，從而促進了脂肪的吸收利用[17]。研究表明，腸體比和腸長比是衡量動物腸道消化吸收功能的指標之一[18]。本研究中，與對照組相比，飼料中添加600、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯后，草魚的腸體比和腸長比也有增加的趨勢。原因可能是丁酸通過調(diào)節(jié)mRNA和蛋白質(zhì)的合成，或者刺激結(jié)腸內(nèi)水和鈉離子的吸收，提高黏膜修復酶的活性，從而促進腸道上皮細胞增殖，提高腸絨毛長度和隱窩深度，并增加其質(zhì)量和長度[19-20]。相似結(jié)論在田莉[21]研究丁酸鈉對草魚腸道健康影響的試驗中也有體現(xiàn)。

腸道消化酶（脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶等）活力的增加能夠提高動物腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，進而促進機體的生長[22-23]。本試驗中，與對照組相比，添加600 mg/kg三丁酸甘油酯能顯著提高草魚的腸道脂肪酶活力，添加300、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯組的淀粉酶和胰蛋白酶活力也有不同程度的上升。在豬[24-25]、肉雞[26]、草魚[21]的研究也發(fā)現(xiàn)，三丁酸甘油酯能夠提高動物腸道脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶活力，與本研究結(jié)果類似。通常來說，丁酸具有降低飼糧pH值、增加腸道酸度、激活蛋白酶原和提高消化酶的作用[27-28]。同時，丁酸可以誘導胰島素和胰高血糖素的產(chǎn)生，起到調(diào)節(jié)腸道消化酶的效果[29-30]。但是600 mg/kg三丁酸甘油酯組的草魚幼魚腸道淀粉酶和胰蛋白酶活力較對照組而言有一定的下降趨勢，這與以往的研究結(jié)論稍有不同，具體原因需要進一步的研究。從整體上講，草魚幼魚飼糧中添加三丁酸甘油酯能夠提高機體腸道消化酶活力。

4? ? 參考文獻

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