E-cadherin和Laminin水平對葡萄胎患者清宮術后轉化為侵蝕性葡萄胎的預測價值

李慧，曾俊，周平

(廣東省婦幼保健院產科，廣州 510010)

侵蝕性葡萄胎是一種惡性滋養細胞腫瘤，由葡萄糖組織侵入子宮肌層或轉移至子宮以外的部位所致[1-2]。病理上侵蝕性葡萄胎的葡萄組織可見水樣的絨毛及增生的滋養細胞侵入子宮肌層甚至穿透子宮壁，進而伸展進入血管或腹腔[3]。葡萄胎作為臨床上常見的妊娠滋養細胞疾病，清宮治療后有轉化為侵蝕性葡萄胎的風險，后者危害程度高，因此早期診斷與治療有著重要的意義。以往研究表明，上皮型鈣粘蛋白(E-cadherin)和層粘連蛋白(Laminin)異常表達與腫瘤細胞增殖、侵襲、轉移、分化密切相關[4-6]。雖然目前已有E-cadherin、Laminin與侵蝕性葡萄胎的相關報道[4，7]，但是多關注于E-cadherin、Laminin對不同類型葡萄胎的診斷價值，而關于兩者對葡萄胎患者清宮術后轉變為侵蝕性葡萄胎的預測價值關注較少。基于此，本研究通過回顧性檢測葡萄胎組織E-cadherin和Laminin表達水平，探討其作為葡萄胎患者清宮術后預后評估的可行性。

一、資料與方法

1.研究對象：選取2016年3月至2017年12月在我院婦科就診的43例葡萄胎患者作為研究對象，所有患者經臨床病史、癥狀體征及病理檢查后確診，所有患者均行葡萄胎清宮術。

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納入標準：經過臨床病理檢查確診為葡萄胎；患者臨床資料完整；有足夠樣本組織供免疫組織化學染色檢測。

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4.侵蝕性葡萄胎診斷標準：參考2004年國際婦產科聯盟(FIGO)的診斷標準[10]，葡萄胎清宮術后，在排除再次妊娠和葡萄胎殘留的情況下，隨訪時間內滿足以下1項并且排除妊娠的即可判斷為侵蝕性葡萄胎：(1)葡萄胎排空后β-HCG檢測4次呈平臺狀態(±10%)，并持續3周及以上；(2)葡萄胎排空后β-HCG測定值3次升高(>10%)，并持續2周及以上；(3)葡萄胎排空后β-HCG水平持續異常6個月及以上；(4)病理學檢查明確診斷者。

對所有43例患者進行隨訪，隨訪方式包括門診復查和電話隨訪，本研究隨訪截至2018年6月。本研究中所涉及到對患者的處理，均在告知患者的情況下進行，研究設計獲得了本院倫理委員會的批準。相關檢驗結果與患者的個人信息均嚴格保密，符合倫理學標準。

侵蝕性葡萄胎繼發于葡萄胎妊娠后，是一種胎盤絨毛滋養細胞疾病。侵蝕性葡萄胎危害性強，容易造成血道轉移，因此早期診斷與及時治療十分關鍵。而E-cadherin與Laminin是與腫瘤相關的增殖、遷移、分化的成分，以往研究表明在侵蝕性葡萄胎的發病與侵襲中發揮著重要作用[11]；但是既往研究的側重點主要是觀察E-cadherin和Laminin對不同類型葡萄胎的診斷價值[4，7]，關于葡萄胎預后的相關研究少見報道。

4.葡萄胎患者的預后分析：將患者隨訪期間內的預后結局(0=未轉化，1=轉化)納入Cox回歸模型進行分析，結果顯示，年齡增長、停經時間越長、葡萄胎清宮次數≥2次、血β-HCG升高時間≥60 d、E-cadherin和Laminin表達陰性是葡萄胎患者轉化為侵蝕性葡萄胎的危險因素(P<0.05)(表2)。

3.一般資料收集：對參與本研究的所有患者收集其基本人口學信息、臨床病史、實驗室檢測指標，并在其出院后進行電話隨訪預后狀況。

排除標準：伴有急性或慢性的感染患者；患有其他惡性腫瘤的患者；合并自身免疫性疾病。

2.葡萄胎組織中E-cadherin和Laminin表達水平：E-cadherin和Laminin蛋白主要表達于細胞漿。葡萄胎組織中E-cadherin表達陽性率為46.5%(20/43)，Laminin表達陽性率為37.2%(16/43)；其中，隨訪期間轉化為侵蝕性葡萄胎者其葡萄胎組織中兩種因子的表達陽性率均為0(0/7)。

二、結果

本研究隨訪截止日期2018年6月1日，隨訪時間6～18個月，43例患者均獲得隨訪；隨訪期間共計發生7例轉化為侵襲性葡萄胎，轉化率16.3%。

1.患者一般情況：本研究共納入43例女性葡萄胎患者，年齡18～45歲，平均年齡(29.3±4.9)歲。43例患者均未絕經，月經初潮11～17歲，平均初潮年齡(12.5±2.1)歲，此前無妊娠滋養細胞疾病史。經產婦20人，首次妊娠23人。停經時間6～18周，其中>12周者9例，8～12周者23例，6～8周11例。葡萄胎清宮次數1次者28人，≥2次者15人。

3.轉化組和未轉化組比較：單因素分析顯示，與未轉化組比較，轉化組年齡增加、停經時間延長、葡萄胎清宮次數增加、血游離β-HCG升高時間延長、E-cadherin和Laminin表達陰性率增高(表1)。

本科院校圖書館的招聘信息占抓取到的招聘信息總數的39．1%，是人才需求最旺盛的圖書館類型。本調查將本科院校圖書館劃分為兩個部分，一是包括獨立學院在內的普通高校圖書館；二是高水平大學圖書館，即原來的“211”院校。普通高校圖書館的招聘信息有148條，占招聘信息總數的29．4%，招聘198人；高水平大學圖書館的招聘信息有49條，占招聘信息總數的9．7%，招聘 60人。

2.免疫組織化學染色：(1)樣本采集：采集葡萄胎患者的葡萄胎組織，經石蠟包埋分裝，之后送往實驗室進行病理檢查。(2)檢測：檢測組織E-cadherin和Laminin表達水平。石蠟包埋的樣本組織經二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化；加入檸檬酸鹽緩沖液(pH=6.0)加熱30 min修復抗原，3%H2O2孵育10 min消除內源性過氧化物酶，加入5%山羊血清封閉2 h。樣本組織加入兔抗人E-cadherin抗體(武漢博士德生物)1：200和兔抗人Laminin抗體(Sigma，美國)1：500，4℃孵育過夜，次日再加入二抗孵育1 h，光學顯微鏡下觀察染色結果。(3)結果判定：按照染色強度和陽性細胞染色面積對E-cadherin和Laminin表達進行綜合評價。染色強度：最終評分為染色強度評分(陰性0分；弱染色1分；中等染色2分；強染色3分)×染色面積(0～5%為0分；6%～25%為1分；26%～50%為2分；>50%為3分)。參考相關報道的評價標準[8-9]，最終評分≥3分為陽性表達，<3分為陰性表達。

表2 葡萄胎患者預后的Cox回歸分析

三、討論

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Varras等[12]研究結果提示E-cadherin與子宮內膜分化與預后相關。E-cadherin是機械粘接細胞收縮的皮層，作用于生物力學反饋途徑，是協同細胞間粘接的糖蛋白，通過介導粘結這一通路進而發揮作用[6]。本研究發現，E-cadherin在轉化組病例葡萄胎組織中表達較弱。可能的原因是葡萄胎后期的增殖分化程度增高，E-cadherin表達下降從而使得細胞間的粘接作用降低，某種程度上為滋養細胞的侵襲提供了可能性，從而使滋養細胞侵襲作用增加，進而脫落、轉移甚至遷移至其他部位，加重疾病程度。本研究結果表明，早期檢測E-cadherin表達水平對葡萄胎患者清宮術后轉化為侵蝕性葡萄胎有較大的預測價值。

Laminin介導細胞粘附、遷移、增殖分化的組成成分。本研究提示Laminin表達降低可使葡萄胎患者清宮術后轉化為侵蝕性葡萄胎的風險增加，其免疫組織化學表達或可評估腫瘤細胞的分化與侵襲性[13]。Laminin作為一種重要的基底膜糖蛋白，在滋養細胞活動過程中介導其粘連，而當其表達降低，滋養細胞穩定性下降從而其游離遷移至其他部位。Laminin表達在侵蝕性葡萄胎發展及侵襲過程中發揮一定作用，與葡萄胎增殖分化改變程度相關。

E-cadherin與Laminin是腫瘤發生/發展過程中的兩個相對比較敏感的指標因素，本研究采用Cox回歸分析法求證這兩個指標對葡萄胎患者清宮術后轉化為侵蝕性葡萄胎的影響。結果表明，低水平的E-cadherin與Laminin是良性葡萄胎轉化為侵蝕性葡萄胎的獨立危險因素。建議臨床醫生在臨床治療過程中密切關注E-cadherin與Laminin水平低的患者，特別是E-cadherin、Laminin雙陰性患者，建議持續監測患者血游離β-HCG水平變化情況，對其及時進行藥物治療及其他輔助措施以降低其轉化為侵蝕性葡萄胎的可能性。

在進行檢測的過程中，應用物化探技術勘測礦物質的地質效果，應當結合相應礦產來有效檢查地質效果，合理、科學的評估物化探技術的實際操作手段，這樣才能為之后技術的合理應用奠定堅實的基礎。在目前的地質環境當中，大多數礦物質通過以往的勘測手段往往很難進行監測，并且在對這一技術進行使用的過程中，需要結合地質結構的實際狀況，這樣才能得出合理的數據信息，并且結合這些數據信息來對勘測方案進行規劃。對多樣化的礦產勘查手段進行充分的應用，能夠深入的分析礦產區域的礦物質特性、交通情況、地質狀況等，這樣才能物化探技術在礦產勘查工作當中得到有效的運用，從而實現最大化的地質效果。

侵蝕性葡萄胎的臨床治療以化療為主，輔助以手術治療。因其疾病危害程度對女性較大，為此康復護理治療、以及心理治療研究表明具有很重要的作用[1，2，14-16]，本研究僅從醫學病理角度考慮相關指標對于病情轉化的預測價值，而對后期護理及心理咨詢等未考慮，其結果具有一定的局限性。但本研究仍是結合病理與疾病預后的調查，對疾病的認識有一定的價值，對預測疾病預后加強完善其后期康復有重要意義。