全自動免疫熒光分析儀與常規培養法對食品中沙門氏菌檢測效果的比較

◎ 蘇佩冰，陳亞波，梁梅娟

（中山市食品藥品檢驗所，廣東 中山 528437）

全自動免疫熒光分析儀（Mini VIDAS）是用酶熒光化析技術（ELFA）通過固相吸附器，用已知抗體來捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯抗體再次結合，經充分沖洗后，通過激發光源檢測，即能自動讀出發光的陽性標本，其優點是檢測速度快，靈敏度高，無風險[1]。

Mini VIDAS能對食品及環境中的沙門氏菌屬、葡萄球菌腸毒素檢測、大腸桿菌O157、單核增生李斯特菌、李斯特菌屬、彎曲菌屬等常見致病性細菌進行快速篩檢，特別是對食品中李斯特菌和沙門氏菌的檢測和鑒定結果比較成熟，已先后被美國FDA、AOAC、USDA等部門認可[2]。

隨著消費者對食品衛生質量要求的日趨重視，傳統的檢測方法由于手續繁瑣、時間過長，跟不上形勢發展的要求[3]。本實驗室對Mini VIDAS檢測食品中沙門氏菌與傳統國家標準方法進行了比較，結果表明Mini VIDAS法檢測食品沙門菌較常規法敏感性、特異性較高，用其檢測為陰性的樣品能很快做出非沙門菌的判斷，比常規法可提前2～3 d，其檢測為陽性的樣品均得到常規方法的證實，未發現假陽性結果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

熟肉制品80份，河粉、豆腐、蛋制品各50份，共230份樣品。

1.1.2 培養基

緩沖蛋白胨水（BPW）、四硫磺酸鈉煌綠（TTB）增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸（SC）增菌液、亞硫酸鉍（BS）瓊脂、三糖鐵（TSI）瓊脂、賴氨酸脫羧酶試驗培養基等均（北京陸橋技術有限責任公司）；沙門氏菌屬顯色培養基（法國科瑪嘉公司）。

1.1.3 試劑

API20E生化鑒定試劑盒及配套試劑（法國生物梅里埃公司）、沙門菌診斷血清（寧波天潤生物藥業有限公司）、 Mini VIDAS相關試劑（法國生物梅里埃公司）。

1.1.4 儀器

Mini VIDAS，購于法國生物梅里埃公司；生化培養箱，購于賓得亞太（香港）有限公司；高壓滅菌器，購于日本Hirayama公司。

1.1.5 對照菌種

鼠傷寒沙門氏菌（ATCC14028）、大腸埃希氏菌（ATCC8099）、枸椽酸桿菌（ATCC 8090），均購于美國Microbiologics ATCC；銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]購于環凱（廣州微生物保藏中心）。

1.2 方法

1.2.1 Mini VIDAS

①取25 g樣品接種到225 mL緩沖蛋白胨水中，（36±1）℃培養16～20 h。②取0.1 mL培養物接種至10 mL SX2肉湯中，（41.5±1）℃培養22～26 h。③取1 mL增菌液沸水浴加熱15 min滅活，用VIDAS SLM試劑盒上機檢測。④陰性結果直接報告，陽性結果按常規方法確證。

1.2.2 常規培養法

監控系統的主從站通訊即為S7-200 PLC與各變頻器之間的通訊，主從站的通訊是本系統設計的核心工作。該部分在通訊上采用RS-485兩線制主從通訊連接方式。單一的RS-485通訊鏈路最多可掛接32個節點，除去作為通訊主機用的S7-200 PLC，從站所接入的變頻器理論上最多可達31臺之多[3]。但用戶可根據變頻器的工作狀態實時性需求，自行選擇監控對象的數量，變頻器臺數越少，輪詢所用時間越短，系統實時性越高；反之亦然[4]。

按照GB 4789.4-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》執行。取25 g樣品接種到225 ml緩沖蛋白胨水中，（36±1）℃培養8～18 h。取1 mL培養物接種10 mL TTB和10 mL SC中，TTB在（42±1） ℃ 培 養18～24 h，SC在（36±1） ℃ 培 養18～24 h。然后按標準在選擇性平板上劃板，挑取可疑菌在NA平板上劃線純化，進一步做生化鑒定和血清鑒定[4]。

1.2.3 結果評價

常規培養法為對照，評價Mini VIDAS檢測結果。

2 結果

2.1 Mini VIDAS法與常規培養法沙門氏菌的陽性檢出數

采用Mini VIDAS法和常規培養法對230份樣品進行平行檢測，兩種方法均檢出沙門氏菌陽性樣品11份，且兩者檢出的樣品一致。Mini VIDAS法檢測的230份樣品中，無假陽性樣品，見表1。

表1 Mini VIDAS法與常規培養法檢出沙門氏菌陽性數表

2.2 Mini VIDAS法與常規培養法檢測結果比較

表2 Mini VIDAS法與常規培養法檢測結果比較表

2.3 Mini VIDAS法檢測沙門氏菌及其他非沙門氏菌的交叉反應檢測試驗

用Mini VIDAS法和常規培養法對鼠傷寒沙門氏菌（ATCC14028）、沙門氏菌陽性分離株①、沙門氏菌陽性分離株②、沙門氏菌陽性分離株③、大腸埃希氏菌（ATCC 8099）、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、枸椽酸桿菌（ATCC 8090）進行交叉反應檢測試驗所獲結果完全一致，未見異常。

2.4 部分Mini VIDAS法檢測沙門氏菌陽性樣品的證實

對Mini VIDAS法檢測結果的部分陽性樣品的SX2肉湯增菌液進行劃線分離，按常規方法重新鑒定，結果證實其檢測結果準確，未發現假陽性，見表3。

表3 部分Mini VIDAS法檢測沙門氏菌陽性樣品的證實表

3 討論

本研究采用Mini VIDAS法和常規培養法檢測同時檢測230份不同來源的樣品。結果顯示，Mini VIDAS法沒有假陽性及假陰性。表明Mini VIDAS法檢測出來的陰性結果完全可靠，可直接報告為檢測結果陰性。Mini VIDAS法可在48 h左右獲得陰性結果，比常規培養法法節省至少48 h，大大地提高了檢測效率。另外，本試驗由于樣品量有限，雖然這230份樣品中沒有出現假陽性結果，但不能排除出現假陽性的情況。因此，要報告檢測結果陽性需經常規方法證實。

沙門氏菌在世界各國食源性細菌感染食物中毒中占據著重要位置[5]。因此，世界衛生組織明確規定沙門氏菌為食品衛生必檢項目之一，但國家標準方法采用的常規培養法雖結果準確可靠，卻存在操作繁瑣、工作量大、耗時長（一般需要5～6 d）等缺點[6]。

法國生物梅里埃公司生產的Mini VIDAS功能強、操作簡單、結果可靠，且均有獨特創新的全自動系統，參數可不斷更新，目前已被美國公職分析化學家協會AOAC及FDA、USDA等官方機構所認可。通過本次試驗所獲230個數據，我們認為其作為一種常規的快速檢測手段是可以被接受的。另外，除了檢測食品中沙門氏菌外，該儀器目前已具備了檢測食品中單核細胞增生李斯特氏菌、埃希氏大腸桿菌0157：H7、空腸彎曲菌、葡萄球菌腸毒素等功能，隨著其功能范圍的不斷擴大，認為其應用價值必將有進一步的提高。