LncRNA-PRNCR1多態性與腸癌易感性及預后的關系

周春燕 黃可可 陳小林 任妹 劉劍榮

【摘要】 目的：研究LncRNA-PRNCR1多態性與腸癌易感性及預后的關系。方法：分別比較對照組以及觀察組LncRNA-PRNCR1多態性之間的差異，分析LncRNA-PRNCR1多態性與結直腸癌患者的易感性以及預后的相關性。結果：兩組rs16901946中的基因型比較，差異有統計學意義（P<0.05），與rs16901946中的AG、GG、AG/GG基因型位點相比，AA位點的腸癌發病率較高（P<0.05）。在≥58歲患者中，rs16901946中的AA基因型與腸癌的易感性相關，其OR值為1.801，在<58歲患者中，其OR值為0.960。同時，在加性模型中顯示，≥58歲患者中，每增加一個等位基因A，患者的結直腸癌風險增加33.3%;女性患者中，每增加一個等位基因A，患者直腸癌風險增加11.3%，差異均有統計學意義（P<0.05）。通過對不同基因型結腸癌患者的總體生存情況比較，患者的生存時間之間的差異有統計學意義（P<0.05）。結論：患者LncRNA-PRNCR1中的rs16901946基因突變與患者的結直腸癌的進展密切相關，未來可通過對患者的多基因量化分析，對腫瘤細胞的激活進行預測。

【關鍵詞】 結直腸癌 基因多態性 易感性 預后

[Abstract] Objective： To study the relationship between polymorphism of LncRNA-PRNCR1 and susceptibility and prognosis of intestinal cancer. Method： The differences of LncRNA-PRNCR1 polymorphism between control group and observation group were compared， and the correlation between LncRNA-PRNCR1 polymorphism and susceptibility and prognosis of patients with colorectal cancer was analyzed. Result： The difference of rs16901946 genotype between the two groups was statistically significant （P<0.05）， compared with the AG， GG and Ag/GG genotypes in rs16901946， the incidence of colorectal cancer at AA locus was higher （P<0.05）. In patients ≥58 years old， the AA genotype in rs16901946 was associated with the susceptibility to colorectal cancer， and OR value was 1.801; in patients <58 years old， the OR value was 0.960. At the same time， in the additive model， the risk of colorectal cancer increased by 33.3% for every allele A increased in patients ≥58 years old; for every allele A increased in female patients， the risk of rectal cancer increased by 11.3%， the differences were statistically significant （P<0.05）. The difference of survival time of patients with different genotypes of colon cancer was statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The rs16901946 gene mutation in lncRNA-PRNCR1 is closely related to the progress of colorectal cancer in patients. In the future， the activation of tumor cells can be predicted by quantitative analysis of multiple genes in patients.

[Key words] Colorectal cancer Genetic polymorphism Susceptibility Prognosis

First-authors address： Pingxiang Peoples Hospital， Pingxiang 337000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.36.016

結直腸癌是臨床常見的消化道腫瘤性疾病之一，流行病學調查顯示，結腸癌僅次于肺癌，位于全球腫瘤疾病的第二位[1]。近年來，隨著我國生活水平的不斷提高，居民的飲食習慣以及生活方式發生顯著變化，我國結腸癌的發病率以及死亡率呈現顯著上升趨勢[2]，根據2014年全國流行病學調查數據顯示，我國的結腸癌患者的發病率和死亡率分別為23.37/10萬以及13.90/10萬[3]，從目前的治療效果評價，由于結直腸癌的早期診斷存在一定的困難，患者一旦確診，均已經發展為中晚期，制約著患者的治療[4]。在對結腸癌患者的細胞生物學的研究中，非編碼的RNA（ncRNA）區別于編碼RNA，在由患者的基因組進行轉錄后，不再進行編碼蛋白質，有研究顯示，此類ncRNA主要通過對患者的正常細胞的時間以及空間的表達進行干預而發揮其生物學功能[5]。而長鏈非編碼RNA（LncRNA）在物種之間的序列保守性較差，結構具有多樣化，同時其顯著的亞細胞定位功能也成為腫瘤細胞調控的靶點之一。研究顯示，LncRNA對患者的DNA甲基化、基因組印記、染色體修飾以及X染色體的沉默具有積極的調控作用，而隨著LncRNA基因的突變，勢必會造成患者腫瘤細胞的惡性增殖，嚴重影響患者的生命質量[6]。LncRNA-PRNCR1存在遺傳多態性位點，本研究通過LncRNA-PRNCR1多態性與腸癌易感性及預后的關系分析，為臨床診斷提供科學依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究對象均來自2012年1月-2016年1月在本院治療的結直腸癌患者50例作為觀察組，其中病程：0～1年29例，1～2年21例;所有患者的臨床TNM分期均為Ⅱa期以及Ⅲ期，其中Ⅱa期19例，Ⅲ期31例。另選取本院健康體檢表觀健康者50例為對照組。（1）納入標準：所有患者均符合結直腸癌診斷標準[7];所有患者入院前均未進行抗腫瘤治療。（2）排除標準：嚴重心臟、肝、腎功能障礙的患者;中途停止治療或者轉院患者;不配合隨訪患者。研究對象均簽署知情同意書，并經醫院倫理委員會論證通過。

1.2 方法 DNA提取方法：所有研究對象入組后，均進行靜脈采血4 mL，離心后，取患者的血漿部分，采用磁珠法對患者的DNA進行提取，設備以及試劑盒由西安金磁納米生物技術有限公司提供。采用PCR擴增儀對患者的樣本進行DNA擴增，采用的PCR擴增儀器由美國ABI公司提供，引物由上海生物工程股份有限公司提供，采用美國thermo提供的蛋白核酸檢測儀對樣本的核酸進行檢測，采用美國sequenom提供的基因分型massarray平臺，對基因分型進行比較。

1.3 觀察指標 采用NIBI數據庫獲得LncRNA-PRNCR1的不同編碼區域位點，分析rs16901946，rs13252298，rs7463708以及rs7007694的不同基因型與結直腸癌患者的關系。分別對患者不同基因型的年齡以及性別進行分層后，分析與結直腸癌患者發病風險的關聯性。對患者開展為期3年的隨訪，以患者死亡作為終點事件，分析不同基因型患者的生存情況之間的差異。

1.4 統計學處理 本研究數據使用SPSS 19.0統計學軟件進行分析，計量資料采用（x±s）表示，比較t檢驗，計數資料采用率（%）表示，比較采用字2檢驗，基因分布之間的差異采用HWP進行分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組基線資料比較 兩組的性別、年齡、體重指數比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 兩組不同基因位點結腸癌情況比較 通過對不同基因位點與患者的結腸癌相關性分析，rs16901946中的基因型兩組比較，差異有統計學意義（P<0.05）;與rs16901946中的AG、GG、AG/GG基因型位點相比，AA位點的腸癌發病率較高，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3 rs16901946易感性分層分析 通過對患者的分層分析，在≥58歲患者中，rs16901946中的AA基因型與腸癌的易感性相關，其OR值為1.801，在<58歲患者中，其OR值為0.960。同時，在加性模型中顯示，≥58歲患者中，每增加一個等位基因A，患者的結直腸癌風險增加33.3%;女性患者中，每增加一個等位基因A，患者直腸癌風險增加11.3%，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表3。

2.4 rs16901946基因位點不同基因型結腸癌患者的總體生存情況比較 結腸癌患者rs16901946基因位點的基因型AA、AG、GG、AG/GG平均生存時間分別為（30.25±2.12）、（29.11±2.32）、（27.34±2.67）、（25.11±2.55）個月，比較差異有統計學意義（F=6.544，P=0.000）。

3 討論

隨著細胞生物學的不斷發展，目前認為，結直腸癌患者的發生以及發展是一個較為復雜的突變過程[8]，長鏈非編碼RNA廣泛存在于哺乳動物中，在機體細胞的增殖以及分化過程中扮演重要角色[9]。大量研究證實，患者的腫瘤細胞的無序增殖以及細胞周期的變化，與患者的長鏈非編碼RNA密切相關[10-11]。

本研究中，通過在已有的基因數據庫中的LncRNA-PRNCR1數據進行分析，可得rs16901946中的基因型兩組比較，差異有統計學意義（P<0.05）;與rs16901946中的AA位點相比，AG、GG、AG/GG基因型的腸癌發病率較低，差異有統計學意義（P<0.05）。秦芹[12]通過對患者的長鏈非編碼RNA與結直腸癌易感性的研究中指出，患者的rs16901946基因突變，可造成患者的結直腸癌發病風險的升高，與本研究一致。另外，在對患者的等位基因突變情況的分析中，為避免混雜因素的感染，本研究對患者不同的性別、年齡情況展開分層分析，在≥58歲患者中，rs16901946中的AA基因型與腸癌的易感性相關，其OR值為1.801;在<58歲患者的人群中，其OR值為0.960，同時，在加性模型中顯示，≥58歲患者中，每增加一個等位基因A，患者的結直腸癌風險增加33.3%，在女性患者中，每增加一個等位基因A，患者的及直腸癌風險增加11.3%，差異均有統計學意義（P<0.05）。有研究報道顯示，LncRNA-PRNCR1可以通過對患者的腫瘤細胞周期的影響而發揮作用[13]。而rs16901946在整個作用過程中，可能通過對患者的LncRNA-PRNCR1二級結構發揮作用，影響患者的靶基因結合，進而造成患者的腫瘤細胞的無需增殖[14]，而在進一步的分層分析中，認為年齡和性別之間存在顯著差異，提示年齡和性別是導致患者發生細胞生物學差異的關鍵性指標[15]。同時全國性的流行病學數據顯示，男性患者的結腸癌患者的發病情況高于女性[16]，且隨著患者的年齡的升高，患者的發病風險以及疾病的惡化風險顯著升高[17]，與本研究相互印證。

另外在對患者的預后分析中，通過對不同基因型患者的生存情況進行分析，隨著患者的基因突變情況的增加，患者的生存期顯著縮短，分析認為，在對患者的腫瘤細胞的調控中，由于LncRNA-PRNCR1對于患者腫瘤細胞無須增殖情況的失衡[18-19]，導致患者可能會產生相應的腫瘤細胞增殖以及變性，最終激活腫瘤活性，導致腫瘤細胞的無序增殖[20]。

本研究還存在一定的局限性，由于在結直腸癌患者的發病過程中，患者的生活方式、飲食習慣等都可能成為結直腸癌發病的重要影響因素。由于本研究樣本量較小，所以，本研究結果的一致性有待在大樣本研究中進行驗證。

綜上所述，患者LncRNA-PRNCR1中的rs16901946基因突變與患者的結直腸癌的進展密切相關，未來可通過對患者的多基因量化分析，對腫瘤細胞的激活進行預測。

參考文獻

[1]張惠博，楊琰英，宋啟斌.MTHFR基因多態性與結直腸癌的相關性[J].國際腫瘤學雜志，2017，44（8）：619-621.

[2]張德志，張宇，朱少功.VEGFR2基因rs10013228多態性對R_0切除結直腸癌患者預后的影響[J].臨床腫瘤學雜志，2018，197（5）：45-49.

[3]葉石才，鄭學寶，朱朱，等.IL-22基因單核苷酸多態性與結直腸癌易感性和臨床病理參數的相關性[J].安徽醫科大學學報，2019，54（4）：119-123.

[4]王鑫，謝甲貝，曹名波，等.漢族結直腸癌患者胞苷脫氨酶基因單核苷酸多態性與卡培他濱治療不良反應的關系[J].中華實用診斷與治療雜志，2018，32（5）：79-83.

[5]劉劍榮，陳小林.miR-124 rs531564、miR-26A rs7372209和miR-126 rs4636297基因多態性與結直腸癌患者預后的相關性研究[J].重慶醫學，2017，46（36）：5076-5080.

[6]許曄瓊，崔燕紅，趙一琳，等.HOTAIR基因多態性與結直腸癌發病風險[J].臨床檢驗雜志，2019（5）：364-368.

[7]顧晉，邢加迪.結腸癌治療指南[J].中華胃腸外科雜志，2005，8（3）：269-272.

[8]徐佳佳.MTHFR基因多態性與先兆流產和復發性流產的關系[J].中國婦幼保健，34（6）：1326-1328.

[9]李濤，賴春鳳，鄭敏莉，等.MTHFR基因多態性與客家人群食管癌易感性的關系[J].廣東醫學，2018，39（7）：61-64.

[10] Fang D，Ye Y.C-reactive protein gene rs1205 polymorphism is not associated with the risk of colorectal cancer[J].Bioscience Reports，2017，37（4）：BSR20170872.

[11] Xie M，Zhao F，Zou X，et al.The association between CCND1 G870A polymorphism and colorectal cancer risk：A meta-analysis[J].Medicine，2017，96（42）：e8269.

[12]秦芹.長鏈非編碼RNA與結直腸癌易感性及預后相關研究[D].武漢：華中科技大學，2016.

[13] Portela P，Merzoni J，Lindenau J D，et al.KIR genes and HLA class I ligands in a Caucasian Brazilian population with colorectal cancer[J].Human Immunology，2017，78（3）：263-268.

[14] Huszno J，Grzybowska E，Bochenek M N，et al.Abstract P2-07-13： TP53 gene polymorphisms （c.[215G>C]） in breast cancer patients and predisposition to family cancers- Single center experience[J].Cancer Research，2017，77（4 Supplement）：P2-07-13-P2-07-13.

[15] Chen T W，Lee C C，Liu H，et al.APOBEC3A is an oral cancer prognostic biomarker in Taiwanese carriers of an APOBEC deletion polymorphism[J].Nature Communications，2017，8（1）：465.

[16] Aggarwal N，Donald N D，Malik S，et al.PWE-002 The association of low penetrance variants in dna repair genes with colorectal cancer： a systematic review and meta-analysis[J].Gut，2017，66（Suppl 2）：A126.

[17] Okazaki S， Stintzing S， Sunakawa Y，et al.Predictive value of TLR7 polymorphism for cetuximab-based chemotherapy in patients with metastatic colorectal cancer[J].International Journal of Cancer，2017，141（6）：1-9.

[18] Li B，Shi X，Yuan Y，et al.ERCC1rs11615 polymorphism increases susceptibility to breast cancer： a meta-analysis of 4547 individuals[J].Bioscience Reports，2018，38（3）：BSR20180440.

[19] Rai V，Abdo J，Agrawal S，et al.Vitamin D Receptor Polymorphism and Cancer： An Update.[J].Anticancer Research，2017，37（8）：3991-4003.

[20] Wu S， Wang S， Fu Y， et al. A novel mechanism of rs763110 polymorphism contributing to cervical cancer risk by affecting the binding affinity of CEBP/β and OCT1 complex to chromatin[J]. International Journal of Cancer， 2017， 140（4）：756.

（收稿日期：2019-07-11） （本文編輯：周亞杰）