壯藥白花九里明干預心肌損傷和保護心肌細胞作用的研究

陳天 王彩冰 陳柏樺 歐庾婷 韋顯林 趙碧旺

【摘?要】?目的：探討白花九里明在心肌缺血損傷的干預保護作用及作用機制。方法：60只小鼠分為：正常對照組和模型對照組（給予0.9%氯化鈉注射液灌胃），硝酸甘油組（給予13?mg/mL灌胃），白花九里明提取液低、中、高濃度組（分別給予150、300、600?mg/mL灌胃）;同時正常對照組給予0.9%氯化鈉注射液，其余各組給予垂體后葉素注射液0.26?U/mL腹腔注射;連續用藥?15?d，檢測小鼠心電圖、心肌總蛋白（TP）、谷草轉氨酶（AST）、過氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及心肌組織形態。結果：模型對照組的P波時限明顯小于其余各組（P<0.01）、J點上移明顯高于其余各組（P<0.01）。正常對照組的心率明顯低于其余各組（P<0.01，0.05）。白花九里明中濃度組的TP濃度明顯高于正常對照組、硝酸甘油組、白花九里明低濃度組，SOD活性明顯低于這些組（P<0.01，0.05）;白花九里明高濃度組的TP濃度明顯高于其余組、SOD活性明顯低于其余組（P<0.01）;白花九里明中濃度組與高濃度組的AST濃度無統計學差異，而均明顯低于其余各組（P<0.01）。白花九里明高濃度組和正常對照組的MDA比較無統計學差異，而又明顯低于其余組（P<0.01，0.05）;白花九里明中濃度組的MDA明顯低于白花九里明低濃度組（P<0.05）。模型對照組心肌細胞數量明顯減少，心肌細胞間毛細血管明顯擴張，細胞變性壞死區域明顯;硝酸甘油組、白花九里明低濃度組和中濃度組的心肌細胞結構優與模型對照組，心肌細胞間毛細血管擴張和變性壞死區域等均有較大的改善;白花九里明高濃度組的心肌細胞結構清晰，沒有明顯變性壞死和毛細血管擴張現象，與正常對照組心肌細胞結構表達相接近并明顯優于白花九里明低濃度組和中濃度組。結論：白花九里明有改善心肌細胞缺血缺氧、干預氧自由基對心肌細胞損傷、促進心肌細胞修復作用，這些作用存在量效正相關。

【關鍵詞】?白花九里明;垂體后葉素;心肌損傷;干預;保護

【中圖分類號】R285.5?【文獻標志碼】?A【文章編號】1007-8517（2019）22-0017-05

Zhuang?Medicine?Blumea?Megacephala?on?Research?by?Intervention?of

Myocardial?Injury?and?Protects?of?Heart?Cells

CHEN?Tian?WANG?Caibing*?CHEN?Bohua?OU?Yuting?WEI?Xianlin?ZHAO?Biwang

Youjiang?Medical?College?For?Nationalities，Baise??533000，China

Abstract：Objective?Explore?the?protective?effect?intervention?and?mechanism?of?Blumea?megacephala?on?myocardial?injury?in?mice.?Methods?Sixty?mice?divided：?Normal?control?group?and?Model?control?group?（give?0.9%?NaCl?injection），?Nitroglycerine?group?（give?13mg/mL?Nitroglycerine），Blumea?megacephala?low，?medium?and?high?concentration?groups?（respectively?give?150，?300，?600mg/ml?Blumea?megacephala?extract）;?Intraperitoneal?injection：?Normal?control?group?give?0.9%?NaCl?injection，?Other?groups?give?0.26U/mL?pituitrin?injection.?Continuous?use?of?15d，?detection?ECG?of?mice，?detection?TP、AST、SOD、MDA?and?tissue?section?in?the?heart.?Results?Model?control?group?the?P?wave?duration?obviously?shorter?than?other?groups?（P<0.01），the?J?point?move?up?obviously?higher?than?other?groups?（P<0.01）.?Normal?control?group?the?heart?rate?obviously?below?than?other?groups?（P<0.01，0.05）.?Blumea?megacephala?medium?concentration?group?the?TP?obviously?higher?than?Normal?control?group，?Nitroglycerine?group，?Blumea?megacephala?low?concentration?group，?and?SOD?activity?obviously?below?than?these?groups?（P<0.01，0.05）.?Blumea?megacephala?high?concentration?group?the?TP?obviously?higher?than?other?groups，?and?SOD?activity?obviously?below?than?other?groups?（P<0.01）.?Blumea?megacephala?medium?concentration?group?and?high?concentration?group?the?AST?are?no?significant?difference，?but?obviously?below?than?other?groups?（P<0.01）.?Blumea?megacephala?high?concentration?group?and?Normal?control?group?the?MDA?are?no?significant?difference，?but?obviously?below?than?other?groups?（P<0.01，0.05）.?Blumea?megacephala?medium?concentration?group?the?MDA?obviously?below?than?low?concentration?group?（P<0.05）.?Model?control?group?myocardial?cell?the?number?is?significantly?reduced，the?capillary?expansion?between?myocardial?cells?is?obvious，?and?the?area?of?cell?degeneration?necrosis?is?obvious.?Nitroglycerine?group，?Blumea?megacephala?low?and?medium?concentration?groups?the?cardiomyocyte?structure?was?better?than?that?of?the?Model?control?group，?the?intercellular?capillary?dilation?and?denaturation?necrosis?of?cardiac?myocytes?were?all?greatly?improved.?Blumea?megacephala?high?concentration?group?yocardial?cell?structure?is?clear，?there?is?no?obvious?degenerative?necrosis?and?capillary?dilation，?it?is?close?to?the?normal?control?group?myocardial?cell?structure?expression，?and?obviously?excellent?than?Blumea?megacephala?low?and?high?concentration?groups.Conclusions?Blumea?megacephala?have?improve?myocardial?ischemia?and?hypoxia，?intervention?oxygen?free?radicals?on?myocardial?cell?injury，?promotion?of?cardiomyocyte?repair;?These?effects?have?positively?correlated?in?the?dosage?and?effectof.

Keywords：Blumea?megacephala;?Pituitrin;?Myocardial?Injury;?Intervention;?Protects

白花九里明[Blumea?megacephala?（Randeria）]屬菊科植物，為廣西壯族民間常用藥，外敷用于治療跌打腫痛，內服用于治療風濕骨痛、月經不調、產后流血[1-2]。近年研究文獻報道，白花九里明具有鎮痛消炎、護肝止血、降壓升糖等作用[3-7]。而白花九里明對心肌缺血缺氧損傷方面影響未發現有文獻報道，本實驗采用垂體后葉素制備小鼠急性心肌缺血缺氧損傷模型，以白花九里明民間用量[1-2]換算成小鼠用量[8]給小鼠灌胃，研究白花九里明對心肌損傷的干預保護作用及作用機制，并與臨床抗心絞痛藥物硝酸甘油[9]的保心作用相比較，為白花九里明的利用與開發提供實驗依據。

1?材料與方法

1.1?實驗動物?健康SPF級KM小鼠60只，雌雄各半，體質重25～35?g，由廣西右江民族醫學院動物實驗中心提供（實驗動物使用許可證號：SYXK桂2017-0004，實驗動物生產許可證號：SCXK桂2017-0003）。小鼠飼養環境為室溫18～22?℃、濕度?50?%～60?%、日光照?12?h。實驗前適應性喂養1周。

1.2?藥材、藥品、試劑和儀器?白花九里明采于廣西百色市郊（經右江民族醫學院民族教研室覃道光教授鑒定為白花九里明植物），曬干備用。硝酸甘油（北京益民藥業有限公司，批號：20150314）;垂體后葉素注射液（安微宏業藥業有限公司，批號：110311）;0.9%氯化鈉注射液（廣西裕源藥業有限公司，批號：L16062904）;氨基甲酸乙酯（成都市科龍化工試劑廠，批號：20161101）;甲醛（煙臺市雙雙化工有限公司，批號：20170701）;TP定量測試盒、AST測試盒、SOD測試盒、MDA測試盒?（南京建成生物工程研究所，規格：96T，批號分別為20171130、20171202、20171204、20171201）。多功能酶標儀（上海壹僑國際貿易有限公司，型號TriStar?LB941）;心電圖機（廣州市艾迪科遜醫療器械有限公司，型號：ECG-6511），數碼顯微鏡（麥克奧迪實業集團有限公司，型號：BA2100igital）;離心機（上海安亭科學儀器廠，型號;TGL-16G）;手持臺式兩用均質器（PRO?Scientific?Inc?Oxford?CT?USA，型號：PR0200）;三用恒溫水箱（江蘇金壇宏凱儀器廠，型號：HH-W600）。

1.3?白花九里明提取液的制備?將60g白花九里明干草加入30℃左右的溫水2000mL浸泡1h，文火煮沸1h，16層紗布過濾，保留濾液;濾渣再加入30℃左右的溫水2000mL文火煮沸1h，16層紗布過濾，兩次濾液合起用文火隔水濃縮至100mL（相當于生藥600mg/mL），冷卻后放入4℃冰箱保存，用時以雙蒸水配制成低濃度和中濃度（150mg/mL、300mg/mL）的白花九里提取液。每5天提取1次。

1.4?動物分組與給藥方法?取60只健康SPF級KM小鼠隨機均分為6組。正常對照組和模型對照組（給予0.9%氯化鈉注射液灌胃），硝酸甘油組（給予13mg/mL灌胃），白花九里明提取液低、中、高濃度組（分別給予150、300、600mg/mL灌胃）;正常對照組給予0.9%氯化鈉注射液腹腔注射，其余各組給予垂體后葉素注射液0.26U/mL腹腔注射;灌胃和腹腔注射的量均按小鼠?10mL/kg體質重計算，每天1次，連續15d。

1.5?心電圖檢測?小鼠于末次用藥前禁食12h、禁水2h，末次用藥后用20%氨基甲酸乙酯腹腔注射麻醉，通過心電圖機描記藥后10min的心電圖肢體Ⅱ導聯波型。由同一人檢測心電圖各波段的情況。

1.6?小鼠心肌勻漿制備及心肌組織病檢?于心電圖檢測后迅速將小鼠剖胸取心臟，取右心組織放入冰凍0.9%NaCl溶液試管中用勻漿機勻漿，制成10%的心肌勻漿離心分離出上清液;取左心浸泡于10%甲醛溶液固定?30?min，再脫水、石臘包埋、HE染色制備組織切片，用數碼顯微鏡檢查心肌組織結構并攝像。

1.7?小鼠心肌總蛋白（TP）、谷草轉氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的測定?取小鼠心肌勻漿上清液，分別用TP定量測試盒、AST測試盒、SOD測試盒、MDA測試盒按說明書操作，用酶標儀檢測出心肌中TP、AST、SOD、MDA的濃度。

1.8?數據處理?應用SPSS?16.0統計軟件將數據統計分析，計量資料以均數加減標準差（x±s）表示，多組間均數比較采用方差分析，組間兩兩比較通過q檢驗，檢驗水準：α=0.05，進行雙側檢驗。

2?結果

2.1?各組小鼠心電圖檢測結果比較?P波時限：白花九里明中濃度組和高濃度組明顯大于正常對照組（P<0.01，0.05），模型對照組明顯小于其余各組（P<0.01），硝酸甘油組、白花九里明低濃度組和正常對照組的兩兩比較無統計學差異（P>0.05）。QRS波時限和P-R段時限各組間兩兩比較無統計學差異（P>0.05）。模型對照組的J點上移明顯高于其余各組（P<0.01），其余各組J點上移的兩兩比較無統計學差異（P>0.05）。正常對照組的心率明顯低于其余各組（P<0.01，0.05），而其余各組間的心率兩兩比較無統計學差異（P>0.05）。見表1。