子宮內膜癌中單核細胞趨化蛋白-1表達及其與巨噬細胞浸潤的關系

廖紅　熊樹華　肖仲清　劉佳

【摘要】目的：分析子宮內膜癌中單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）表達及其與巨噬細胞浸潤的關系。方法：納入2016年1月-2017年12月60例在本院治療的子宮內膜癌患者，同時納入同期在本院治療的子宮內膜不典型增生患者60例和增生期子宮內膜患者60例。采用免疫組化SP法檢測所有患者子宮內膜中的MCP-1蛋白表達和CD68標識巨噬細胞浸潤表達情況，分析子宮內膜癌中MCP-1蛋白表達與CD68標識巨噬細胞浸潤兩者之間的關系。結果：在增生期子宮內膜、子宮內膜癌、子宮內膜不典型增生中MCP-1的陽性表達率分別為11.67%（7/60）、78.33%（47/60）和13.33%（8/60），三者比較差異有統計學意義（P<0.05）。在增生期子宮內膜、子宮內膜癌、子宮內膜不典型增生中CD68標識巨噬細胞的陽性表達率分別為6.67%（4/60）、81.67%（49/60）和18.33%（11/60），三者對比差異有統計學意義（P<0.05）。子宮內膜癌組織中MCP-1蛋白表達與CD68標識巨噬細胞浸潤均明顯高于增生期子宮內膜和子宮內膜不典型增生患者（P<0.05）。子宮內膜癌組織中MCP-1蛋白與CD68標識巨噬細胞浸潤之間呈正相關關系（r=0.913，P<0.05）。結論：子宮內膜癌的發生、發展與MCP-1及巨噬細胞的異常表達之間有密切的關系，子宮內膜癌組織中浸潤的MCP-1和巨噬細胞能夠促進腫瘤淋巴管和血管的形成，加速腫瘤的浸潤和轉移。

【關鍵詞】子宮內膜癌；子宮內膜不典型增生；增生期子宮內膜；單核細胞趨化蛋白-1表達；CD68標識巨噬細胞浸潤；相關性

Expression of Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Endometrial Cancer and Its Relationship with Macrophage Infiltration/LIAO Hong，XIONG Shuhua，XIAO Zhongqing，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（27）：-124

【Abstract】Objective：To analyze the expression of monocyte chemoattractant protein-1（MCP-1）and its relationship with macrophage infiltration in endometrial cancer.Method：Sixty patients with endometrial cancer treated in our hospital from January 2016 to December 2017 were enrolled in the study，meanwhile，60 patients with atypical endometrial hyperplasia and 60 patients with proliferative endometrium were enrolled in the study.Immunohistochemical SP method was used to detect the expression of MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker in endometrium of all patients.The correlation between the expression of MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker was analyzed.Result：The positive expression rates of MCP-1

in proliferative endometrium，endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia were 11.67%（7/60），78.33%（47/60）and 13.33%（8/60），respectively，the difference was statistically significant（P<0.05）.In proliferative endometrium，endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia，the positive expression rates of macrophage infitration with CD68 marker were 6.67%（4/60），81.67%（49/60）and 18.33%（11/60），respectively，the difference was statistically significant（P<0.05）.The expression of MCP-1 protein and macrophage infitration with CD68 marker in endometrial carcinoma were significantly higher than those in proliferative endometrium and atypical endometrial hyperplasia（P<0.05）.There was a positive correlation between MCP-1 protein and macrophage infiltration with CD68 marker in endometrial cancer（r=0.913，P<0.05）.Conclusion：The occurrence and development of endometrial cancer are closely related to the abnormal expression of MCP-1 and macrophages，MCP-1 and macrophages infiltrated in endometrial cancer tissue can promote the formation of lymphatic vessels and blood vessels，and accelerate the invasion and metastasis of tumors.

【Key words】Endometrial cancer；Atypical endometrial hyperplasia；Proliferative endometrium；Monocyte chemoattractant protein-1 expression；CD68 marking macrophage infiltration；Correlation

First-authors address：Jiangxi Maternal and Child Health Hospital，Nanchang 330006，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.27.033

單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）作為CC趨化因子家族成員的組成之一，屬于系分子量15kD的糖蛋白，內部共包含76個氨基酸，前體部位有99肽，

其中含有23個氨基酸的信號肽[1]。MCP-1主要是由人和鼠的單核細胞、成纖維細胞、內皮細胞、淋巴細胞所產生的或由腫瘤細胞所分泌產生[2]。MCP-1能夠通過對腫瘤相關巨噬細胞（TAMS），尤其是單核-巨噬細胞產生趨化，從而在炎癥、腫瘤、動脈粥樣硬化等多種疾病的病灶部位發揮其生物學效應，參與多種腫瘤的發生發展、過程[3-4]。此次研究通過選取2016年1月-2017年12月本院收治的子宮內膜病變患者，取所有患者的標本，檢測分析其子宮內膜中的MCP-1與CD68標識巨噬細胞浸潤及兩者的相關性。現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料納入2016年1月-2017年12月在本院治療的60例子宮內膜癌患者，同時納入同期在本院治療的子宮內膜不典型增生患者60例和增生期子宮內膜患者60例。納入標準：診斷符合子宮內膜癌、子宮內膜增生及增生期子宮內膜；年齡32~57歲；均為女性；疾病分期Ⅰ~Ⅳ期；臨床資料完整。排除標準：合并其他子宮內膜病變；不愿參加此次研究。該研究已經倫理學委員會批準，患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2方法采用北京博奧森公司提供的兔抗人多克隆MCP-1抗體濃縮液，工作濃度為1︰200；采用北京西雅金橋生物技術有限公司提供的鼠抗人單克隆CD68抗體即用型。采用福州邁新生物技術有限公司提供的DAB顯色試劑和S-P免疫組化試劑盒。抽取患者的病理標本，石蠟包埋存檔，連續切片4張，厚度為5 μm。采用SP二步法進行免疫組化檢測，取已知的病理切片作為陽性參照對象，以PBS緩沖液作為代替一抗的陰性對參照。MCP-1免疫組化陽性產物定位于腫瘤細胞胞質中，呈現為棕黃色細顆粒狀。CD68免疫組化陽性產物定位于巨噬細胞胞質中，呈現為棕黃色細顆粒狀。

1.3觀察指標與評定標準（1）分析子宮內膜病變中MCP-1表達陽性率與CD68標識巨噬細胞浸潤的情況。陽性率判定標準：按照Ozdemir方法結合病理切片中陽性物質的表達強度和量將其分為4級，其中陽性細胞數<5%或無陽性物質表達為（-）；陽性細胞數在5%~25%或顯色較淺為（+）；陽性細胞數在26%~50%或顯色深為（2+）；陽性細胞數>50%或顯色深為（3+）。（2）分析子宮內膜癌組織中MCP-1和CD68標識巨噬細胞浸潤的關系。

1.4統計學處理采用SPSS 23.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。有序分類變量資料用秩和檢驗，相關性運用Spearman相關分析檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1增生期子宮內膜、子宮內膜癌、子宮內膜不典型增生患者一般資料比較60例子宮內膜癌患者，年齡32~57歲，平均（44.32±5.36）歲；按照2000年FIGO標準對其進行組織學分級和臨床病理分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期14例，Ⅲ期16例，Ⅳ期

7例；G1級35例，G2級19例，G3級6例；有淋巴結轉移8例，無淋巴結轉移52例；病灶浸潤>1/2肌層49例，局限于黏膜層及浸潤<1/2肌層11例。60例子宮內膜不典型增生患者，年齡33~56歲，平均（44.35±5.58）歲；60例增生期子宮內膜患者，年齡32~57歲，平均（44.56±5.67）歲。三者年齡比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

2.2子宮內膜病變中MCP-1表達與CD68標識巨噬細胞浸潤在增生期子宮內膜、子宮內膜癌、子宮內膜不典型增生中MCP-1的陽性表達率分別為11.67%（7/60）、78.33%（47/60）和13.33%（8/60），三者對比差異有統計學意義（P<0.05）。在增生期子宮內膜、子宮內膜癌、子宮內膜不典型增生中CD68標識巨噬細胞的陽性表達率分別為6.67%（4/60）、81.67%（49/60）和18.33%（11/60），三者對比差異有統計學意義（P<0.05）。子宮內膜癌組織中MCP-1蛋白表達與CD68 標識巨噬細胞浸潤均明顯高于增生期子宮內膜和子宮內膜不典型增生患者，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.3子宮內膜癌組織中MCP-1和CD68標識巨噬細胞浸潤的關系子宮內膜癌組織中的MCP-1蛋白與CD68標識巨噬細胞浸潤呈正相關關系（r=0.913，P=0.000），見表2。

3討論

子宮內膜癌是女性生殖系統常見的一種上皮惡性腫瘤，多發于子宮內膜，常見于圍絕經期和絕經后的婦女，對女性的生活質量和身心健康造成嚴重的影響[5]。相關研究證實，在我國每年約有20萬的新發子宮內膜癌病例[6]。其導致的死亡率目前居于婦科常見惡性腫瘤的第3位（僅次于卵巢癌和宮頸癌），嚴重威脅女性的生命安全[7]。研究發現，在不同地區該病的發病率也各不相同，其發病原因主要與生活方式密切相關[8]。近些年來隨著人們生活方式和生活習慣的不斷改變，子宮內膜癌的發病率呈現出逐年上升的趨勢，目前已經居于女性生殖系統惡性腫瘤的第2位（僅次于宮頸癌）[9]。絕經后出血或圍絕經期出血是子宮內膜癌最常見的臨床癥狀[10]。子宮內膜癌的發病機制目前尚不明確，一般臨床根據發病機制主要與生物學行為特點將其分為雌激素依賴型（Ⅰ型）和非雌激素依賴型（Ⅱ型）兩類，前者多數為子宮內膜樣癌，部分為黏液腺癌；后者多為漿液性癌，透明細胞癌等[11]。因此早期發現、早期治療前期病變是臨床關注的重點。

子宮內膜腺基質細胞和上皮細胞在正常生理條件下均可分泌MCP-1[12]。有研究指出，MCP-1在腺上皮細胞內的表達水平與基質細胞相比明顯較高[13]。但是MCP-1在腺上皮細胞內的表達一般不受調節因素的調節[14]。與之相反的是，基質細胞在腫瘤壞死因子a（TNF-a）、PDGF、IFN-1及IL-1等因素的作用下可表達為低組成性、高誘導性的MCP-1[15]。此外也有大量研究證實，在正常子宮內膜中MCP-1的表達表現為性激素依賴性，可能與月經周期有密切的關系[16-17]。MCP-1的表達在子宮內膜增生期大于分泌期，并且在經前期達到最高水平，排卵期則水平最低[18]。而上述這種周期性的變化特點與子宮內膜中巨噬細胞數量的變化呈正相關[19]。在經前期巨噬細胞的含量達到最高，而在排卵期則最少[9]。可以看出，雌孕激素能夠通過對MCP-1的表達實施調節進而調節子宮內膜中巨噬細胞的變化[20]。本研究中，子宮內膜癌組織中的MCP-1蛋白與CD68標識巨噬細胞浸潤之間呈正相關關系（r=0.913，P=0.000）。研究結果提示，陽性MCP-1蛋白的表達強度對子宮內膜腺癌患者臨床病理特征的影響與CD68陽性巨噬細胞表達強度對子宮內膜腺癌患者臨床病理特征的影響相一致，這也進一步證實了MCP-1和巨噬細胞通過協同作用，促進宮頸鱗癌的浸潤轉移。

巨噬細胞是炎癥和腫瘤的橋梁。在瘤微環境中，巨噬細胞被誘導分化和極化，由M1型轉變為M2表型的腫瘤相關巨噬細胞，從而促進腫瘤發生發展。在宮頸癌組織中，CD68標識巨噬細胞通過增加免疫抑制因子，減少免疫促進因子，引起免疫抑制，促使宮頸癌的浸潤轉移。

本研究還發現在子宮內膜癌組織中MCP-1蛋白與CD68標識的巨噬細胞的陽性表達率均明顯高于子宮內膜不典型增生和增生期子宮內膜（P<0.05），說明MCP-1和巨噬細胞參與了子宮內膜癌的發生發展過程，也進一步提示MCP-1蛋白與CD68標識的巨噬細胞可能通過分泌某些促淋巴管生成的因子，進而促進腫瘤新生淋巴的生成，從而參與了腫瘤細胞的轉移。因此筆者設想，是否可以通過阻斷MCP-1能夠阻礙巨噬細胞的聚集，從而延緩或阻斷腫瘤的發生發展過程，這也可以為腫瘤的治療提供新的思路。

綜上所述，MCP-1蛋白與CD68標識的巨噬細胞參與了子宮內膜癌的發生發展過程，可為臨床治療提供一定的參考。

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（收稿日期：2019-07-17）（本文編輯：程旭然）