基于數(shù)據(jù)分析苦參堿對肝臟的作用

徐錦龍 段寶忠 馬衛(wèi)成

作者單位：1浙江省寧波市鄞州第二醫(yī)院藥劑科（寧波315100）；2大理大學藥學院（大理 671000）

苦參堿（matrine）是從中藥苦參或山豆根中分離得到的一種生物堿，具有抑制乙肝病毒復制，改善病理性肝炎癥狀和體征的作用，近年研究表明其還具有抗腫瘤等作用?？鄥⒕哂小靶《尽?，經(jīng)研究苦參堿是其主要毒性成分之一，主要表現(xiàn)為神經(jīng)毒性和肝臟毒性[1-2]。目前臨床上苦參堿也被用來護肝保肝，但也有患者發(fā)生了肝功能異常[3-5]?；诖?，苦參堿對肝臟既有保護又有一定損害的雙向作用。為確保臨床使用苦參堿的安全有效，查詢了苦參堿對肝毒性（hepatotoxicity）的文獻，基于數(shù)據(jù)進行分析總結，以期獲得其對肝臟的利弊關系，供參考。

1 資料來源

采用主題詞“苦參堿”、“肝毒性”、“肝損傷”、“matrine”、“hepatotoxicity”檢索 Pubmed、Embase、中國知網(wǎng)（CNKI）、萬方醫(yī)學數(shù)據(jù)庫（Wanfang）、維普數(shù)據(jù)庫（VIP）、中國生物醫(yī)學數(shù)據(jù)庫（CBM）等數(shù)據(jù)庫，均從建庫至2017年12月16日，共查到文獻408篇。經(jīng)過排重，閱讀文獻后，排除苦參堿治療肝損傷的文章，獲得研究苦參堿導致肝毒性的相關文獻8篇，其中動物試驗3篇，細胞試驗5篇（排除對腫瘤細胞的毒性作用）[6-13]。

2 結果與分析

2.1 細胞試驗結果分析 倪曉珺等[8]利用SD大鼠進行原代肝細胞的培養(yǎng)，采用苦參堿0.0124、0.124、1.24g/L三個濃度組進行細胞毒性的研究，作用24h后，均未發(fā)現(xiàn)肝細胞活力顯著性的下降，表明當苦參堿濃度在1.24g/L以下時，對SD大鼠原代肝細胞無明顯毒性。張茜等[9-10]采用HL7702細胞進行研究，苦參堿濃度分別為 0.625、1.25、2.5、5g/L，共同孵育24h后，1.25、2.5、5g/L三個濃度組對細胞活力有不同程度的影響并呈線性相關，其中2.5、5g/L兩組與對照組比較，對細胞活力有顯著性的影響（圖1）。5g/L的苦參堿能明顯升高細胞上清液中的天門冬氨酸氨基轉氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）水平。細胞形態(tài)學觀察也發(fā)現(xiàn)，給予HL7702細胞苦參堿24h后細胞出現(xiàn)皺縮，變圓，體積變小，倒置顯微鏡下的亮度增加，且呈劑量相關性，2.5g/L和5g/L組中，皺縮的細胞百分率分別達到80%和100%。

圖1 苦參堿對HL7702細胞活力的影響

張茜等[9-10]的研究可從圖1細胞活力情況得出：1.25g/L以下時，HL7702細胞未發(fā)現(xiàn)明顯肝毒性；1.25g/L以上時，對肝臟的毒性呈劑量相關性。除此之外，我們也發(fā)現(xiàn)，當藥物濃度在0.625g/L反而細胞活力有所上升。為了證實這一有現(xiàn)象，石鵬等[7]研究了不同濃度苦參堿對QSG7701細胞的抑制作用，苦參堿濃度分別為 0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0g/L，分別作用24、48、72h后的抑制率（轉化為細胞活力），雖然在48h時表現(xiàn)為普遍表現(xiàn)為活力下降，但在24h和72h時低濃度的苦參堿表現(xiàn)為活力增加，尤其是72h時活力上升明顯。見圖2-4。

從以上研究得出苦參堿在0.5g/L以下時具有明顯的促進肝細胞增值作用。該研究也發(fā)現(xiàn)，對BEL-7404細胞在任何濃度下對細胞均產(chǎn)生抑制作用，研究結論為0.75g/L為最佳抗腫瘤濃度，且對正常肝細胞毒性較小。

田雄英等[6]采用苦參堿 0.125、0.25、0.5g/L 三個濃度對HL7702細胞進行研究，表明其促細胞生長作用未隨濃度增加而增加，但其對rHSC99細胞呈明顯抑制作用。見圖5。

圖2 苦參堿對QSG7701細胞活力的影響（24h）

圖3 苦參堿對QSG7701細胞活力的影響（48h）

圖4 苦參堿對QSG7701細胞活力的影響（72h）

圖5 苦參堿對HL7702細胞活力的影響

綜上所述，苦參堿在低濃度（0.5g/L以下）時具有明顯的促進肝細胞生長的作用，但隨著濃度的上升，尤其是1.25g/L以上時可能有肝細胞毒性。

2.2 動物試驗結果分析 趙清梅等[11]進行苦參堿對小鼠的亞急性毒性試驗，劑量分別為24.7、4.9、2.47mg/kg，連續(xù)灌胃給藥30天，結果顯示：24.7mg/kg組肝臟系數(shù)顯著升高，病理剖檢發(fā)現(xiàn)也有不同程度腫大；4.9，2.47mg/kg組肝臟系數(shù)未見明顯升高，病理剖檢與對照組比較，肝臟血管周圍實質細胞結構較完整，可見明顯的肝細胞索，距血管較遠的部分肝細胞腫脹、擁擠、有空泡變化，細胞核溶解、消失，肝小葉結構紊亂，肝細胞索紊亂、竇狀隙不明顯，有淋巴細胞浸潤。

梁培等[12]研究苦參堿對肝臟的影響。結果顯示，10、40mg/kg兩組連續(xù)灌胃60天，發(fā)現(xiàn)肝臟系數(shù)、AST、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、ALP和肝臟脂質過氧化產(chǎn)物（MDA）明顯升高，對肝臟超氧化物歧化酶（SOD）無明顯影響。

郭秋萍等[13]研究了200mg/kg的苦參堿連續(xù)灌胃14天，小鼠死亡率達80%。死亡小鼠的AST、ALT和ALP明顯升高，肝組織SOD和谷胱甘肽（GSH）明顯降低。肝組織HE染色發(fā)現(xiàn)死亡小鼠肝細胞發(fā)生變性、灶性壞死，而存活小鼠未見明顯異常。TUNEL法檢測發(fā)現(xiàn)死亡小鼠有很多細胞核被深染為棕黃色的凋亡細胞，可見細胞縮小，間隙增大，存活小鼠可見少量細胞的細胞核被染為棕黃色。

動物試驗結果顯示，4.9mg/kg以下的灌胃給藥劑量未發(fā)現(xiàn)明顯肝毒性，而24.7mg/kg及以上肝毒性明顯。

3 討論

苦參堿是苦參的主要毒性成分之一。根據(jù)動物實驗的研究結果，小鼠在4.9mg/kg以下的灌胃給藥劑量未發(fā)現(xiàn)明顯肝毒性，而24.7mg/kg及以上肝毒性明顯，毒性劑量按體表面積折算為2.47mg/kg（小鼠∶正常人＝10∶1)。而鄭瑞雯等[14]報道人體試驗單次服用苦參堿膠丸100～400mg耐受性良好，按人體60kg計算，則為6.67mg/kg?？梢?，小鼠對于苦參堿肝毒性的敏感性要大于人類。

根據(jù)細胞試驗研究，當苦參堿濃度1.25g/L以下時，苦參堿在低濃度（0.5g/L以下）時具有明顯的促進肝細胞生長的作用，但隨著濃度的上升，尤其是1.25g/L以上時呈現(xiàn)明顯的肝細胞毒性。李晏等[15]對雜種犬多次給予苦參堿緩釋片150mg得到穩(wěn)態(tài)峰濃度約為9.68μg/mL，穩(wěn)態(tài)谷濃度為5.19μg/mL，絕對生物利用度為（73.5±14.2）%，根據(jù)體表面積換算（正常人∶犬=1∶1.87），則按70kg正常人穩(wěn)態(tài)峰濃度約為7.04μg/mL，穩(wěn)態(tài)谷濃度為3.78μg/mL。這與冷凍保存L-02肝細胞推薦的苦參堿濃度6μg/mL相類似[16]。鄭瑞雯等[14]報道給予苦參堿膠丸100、200、400mg后，血藥濃度峰值分別為 （0.60±0.13），（1.21±0.33），（2.38±0.72）g/L，按 73.5%的生物利用度來計，苦參堿注射劑分別為73.5、147、294mg。故苦參堿注射劑150mg推薦量還是比較安全的，而80mg的推薦量可能更能促進細胞生長。

苦參堿對肝臟細胞產(chǎn)生毒性的主要機制可能與氧化應激和誘導細胞凋亡有關，促進細胞生長的主要機制可能與清除自由基，保護細胞膜有一定關系，但具體機制仍不明確，需進一步研究。

綜上所述，苦參堿在低濃度（0.5g/L以下）時具有明顯的促進肝細胞生長的作用，但隨著濃度的上升，尤其是1.25g/L以上時可能具有的肝細胞毒性?；跀?shù)據(jù)，苦參堿在人體和動物的肝毒性可能存在差異，并且在不同劑量下，苦參堿對肝臟表現(xiàn)出保護和毒性的雙向作用。