抗磷脂酶A2受體抗體檢測在特發性膜性腎病診斷中的意義

符克英，蔡俊宏，符生苗，韓葉光，王 茹，張 培

(海南省人民醫院腎病研究室，海南 海口 570311)

抗磷脂酶A2受體抗體檢測在特發性膜性腎病診斷中的意義

符克英，蔡俊宏，符生苗，韓葉光，王 茹，張 培

(海南省人民醫院腎病研究室，海南 海口 570311)

目的 探討血液中抗磷脂酶A2受體抗體(anti-PLA2R)在特發性膜性腎病診斷中的意義。方法應用間接免疫熒光方法檢測特發性膜性腎病患者血液中的anti-PLA2R，以繼發性膜性腎病患者及健康獻血員作為對照，分析其與腎活檢組織中病理診斷的相關性。結果間接免疫熒光方法檢測血液中的anti-PLA2R敏感性為76.7%、特異性為96.7%。繼發性膜性腎病組僅檢出1例陽性，正常組未檢出陽性。血液anti-PLA2R與病理診斷的相關性分析發現其陽性符合率為97.9%，陰性符合率為80.8%，總符合率為87.5%，Kappa一致性檢驗，Kappa=0.752，P＜0.01。結論間接免疫熒光方法檢測血液中的anti-PLA2R可成為體外診斷特發性膜性腎病的特異性指標。

抗磷脂酶A2受體抗體；特發性膜性腎病；間接免疫熒光

特發性膜性腎病(IMN)是臨床常見的以大量蛋白尿或腎病綜合征為主要表現的原發性腎小球疾病[1，2]，伴血栓和心血管并發癥，以及慢性腎功能衰竭風險。其典型的病理學特征是腎小球上皮下和基底膜內免疫復合物沉積，伴節段性或球性硬化；免疫病理檢查可見IgG和C3沿基底膜細顆粒狀沉積；電鏡下可見電子致密物在基底膜的不同部位沉積。在2009年自身抗原磷脂酶A2受體(PLA2R)被鑒定以前，IMN的診斷主要通過腎臟穿刺、組織學檢查或電鏡檢查[1]。但是僅依靠組織病理學檢查并不能完全與其他原因引起的膜性腎病加以區別，故我們擬通過檢測血液中抗磷脂酶A2受體抗體(anti-PLA2R)與腎活檢病理診斷的相關性，探討其在IMN診斷和鑒別診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來源于2007年4月至2014年5月本院90例腎活檢組織標本(石蠟常溫保存)，其中IMN 60例，狼瘡性腎炎20例，乙肝相關性腎炎10例，相應血液樣本90例；以健康獻血員血液樣本30例作為對照(血液樣本-80℃保存)。對腎活檢組織行HE、PAS、PASM、Masson染色，免疫熒光檢查及電鏡檢查，觀察其病理改變。病例納入標準：IMN依據腎臟病理光鏡、電鏡、免疫熒光診斷結合臨床診斷納入，排除其他可能引起膜性腎病的疾病。

1.2 研究分組 根據病理診斷將60例IMN設為實驗組，將狼瘡性腎炎和乙肝相關性腎炎30例設為繼發性膜性腎病組，健康獻血員30例為正常對照組。

1.3 方法 應用間接免疫熒光方法檢測血液中的anti-PLA2R水平，采用包被有未轉染及轉染PLA2R的EU90細胞為檢測基質，試劑盒購自德國歐蒙醫學實驗診斷股份公司。比較分析其與腎活檢組織病理診斷的相關性。

1.4 統計學方法 所有數據均采用SPSS18.0統計軟件進行分析，計數資料進行χ2檢驗，比對資料進行Kappa一致性檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 三組受試者anti-PLA2R水平比較 IMN組陽性46例，占76.7%，繼發性膜性腎病組陽性1例，占3.3%，正常對照組均為陰性，陽性樣本均可見anti-PLA2R與基質的轉染細胞反應引起特異性胞漿熒光。本研究中，間接免疫熒光方法用于IMN檢測的敏感性為76.7%、特異性為96.7%。

2.2 血液anti-PLA2R水平與腎活檢組織病理診斷比較 血液anti-PLA2R與腎活檢組織病理診斷結果的相關性分析發現，兩種方法比較χ2檢驗值為70.825，P＜0.01，其陽性符合率為97.9%，陰性符合率為80.8%，總符合率達87.5%；對比分析Kappa一致性檢驗的結果，Kappa=0.752，P＜0.01，見表1。

表1 血液anti-PLA2R與腎活檢組織中病理診斷結果的相關性

3 討論

磷脂酶A2受體(PLA2R)屬于Ⅰ型跨細胞膜受體，是哺乳動物甘露糖受體家族4個成員之一。PLA2R的N端是1個富含半胱氨酸的結構域，與之相鄰的是1個纖連蛋白Ⅱ(Fibronectin typeⅡ)結構域以及8個串聯的C型植物凝集素樣結構域(C-type lectin-like domain，CTLD)，位于胞漿內的C端含有與內吞裝置相互作用的結構，可能與將細胞外的配體分子轉運至細胞內有關。PLA2R主要分為兩型(M型與N型)，已經確認M型PLA2R是自身抗體的主要靶抗原[3-5]。PLA2R主要在腎小球足細胞呈高表達，并與IgG4共定位于IMN患者腎小球的免疫復合物沉積中，IMN患者中anti-PLA2R主要為IgG4亞型，這是腎小球沉積物中的主要免疫球蛋白亞類，從IMN患者沉積物中洗脫的IgG可識別PLA2R，因此PLA2R是導致IMN的一個主要抗原，檢測循環血液中的anti-PLA2R對于診斷和監測IMN病情活動很可能具有重要作用[3，6]。在IMN患者中，血液中的anti-PLA2R與PLA2R構象依賴表位結合，兩者形成原位免疫復合物沉積在腎小球基底膜，引起足細胞的損傷、腎小球基底膜的增厚以及通透性的改變[1]。IgG4是anti-PLA2R中最主要的抗體亞型，這與繼發性膜性腎病(狼瘡性膜性腎病或惡性腫瘤相關膜性腎病等)不同，后者抗體以IgG2、IgG3為主要亞型。有研究表明，anti-PLA2R滴度與IMN疾病活動度有關，也可以作為評價治療效果的一項指標[2-5]。

2009年Beck等采用Western印跡法在37例IMN患者血液中的26例檢出了M型PLA2R，認為anti-PLA2R對于診斷和監測IMN病情活動很可能具有重要作用[3，6]。Qin等[7]報道認為anti-PLA2R對于IMN具有很高的特異性，其血液中抗體的滴度可用于判斷患者的療效和預后。周廣宇等[8]報道認為anti-PLA2R可能是IMN的特異性抗體和致病性抗體。有學者[9-10]研究認為anti-PLA2R水平可作為IMN病情活動和治療效果的監測工具。根據國外報道，免疫組織化學法可以用來檢測anti-PLA2R[3]，而以轉染細胞作為檢測基質的間接免疫熒光法是血液學篩查anti-PLA2R的一種便捷可靠的方法，適于anti-PLA2R的定性與定量分析[3，11-13]。

本研究結果顯示，應用包被有未轉染及轉染PLA2R的EU90細胞為檢測基質，間接免疫熒光法檢測患者血液中的anti-PLA2R，敏感性為76.7%、特異性為96.7%；與腎活檢組織病理診斷比較分析的一致性非常好，且繼發性膜性腎病組30例中僅1例陽性，健康獻血員血液樣本30例中無陽性結果。在本次研究中，有14例臨床確診IMN患者間接免疫熒光法結果為陰性，可能與以下幾點有關：(1)IMN患者體內可能存在除了PLA2R受體以外的自身抗體靶抗原；(2)在樣本采集時，IMN患者正處于病情緩解階段或治療過程中，病理性免疫活動處于低水平狀態，自身抗體的滴度降低；(3)由于轉染細胞內靶抗原的表達水平和構象的影響，造成檢測anti-PLA2R的誤差。

綜上所述，我們認為應用包被有未轉染及轉染PLA2R的EU90細胞為檢測基質，間接免疫熒光法檢測患者血液中的anti-PLA2R可作為體外診斷IMN的特異性指標，有利于和繼發性膜性腎病的鑒別診斷。

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Significance of anti-phospholipase A2 receptor antibody in the diagnosis of idiopathic membranous nephropathy.

FU Ke-ying,CAI Jun-hong,FU Sheng-miao,HAN Ye-guang,WANG Ru,ZHANG Pei.Division of Nephrology Research,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo discuss the significance of anti-phospholipase A2 receptor antibody(anti-PLA2R) in diagnosing idiopathic membranous nephropathy.MethodsAnti-PLA2R in the blood was detected by indirect immunofluorescence in the patients with idiopathic membranous nephropathy(IMN group),and then compared with those in the patients with secondary membranous nephropathy(secondary membranous nephropathy group)and healthy blood donors(healthy control group).The relationship between anti-PLA2R and pathological diagnosis of renal tissue was analyzed.ResultsFor detection of anti-PLA2R in blood by indirect immunofluorescence,the sensibility was 76.7%and the specificity was 96.7%.Only one case was positive in the secondary membranous nephropathy group, and none was positive in the healthy control group.Correlation analysis between anti-PLA2R and pathological diagnosis showed a positive coincidence rate of 97.9%,negative coincidence rate of 80.8%,total coincidence rate of 87.5%, and the Kappa of consistency test of 0.752,P＜0.01.ConclusionAnti-PLA2R in blood detected by indirect immunofluorescence could be used as the specific indicator for diagnosing idiopathic membranous nephropathyin vitro.

Anti-phospholipase A2 receptor antibody(anti-PLA2R);Idiopathic membranous nephropathy (IMN);Indirect immunofluorescence

R692

A

1003—6350（2015）11—1626—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.11.0581

2014-12-15)

海南省衛生廳立項課題（編號：瓊衛2012 PT-16）

蔡俊宏。E-mail：cjh7506@163.com