益腎別濁湯對糖尿病腎病大鼠氧化應激的影響

李 娟 王永超 楊江成 李 玲

糖尿病腎病作為糖尿病最為常見的并發癥之一，不但是糖尿病致死、致殘的主要原因，也是終末期腎病的第2大病因[1]。然而目前對于本病缺乏有效的治療手段，除了控制血壓、血糖、血脂以及ACEI/ARB等的藥物以外，中醫藥成為臨床醫生治療本病的不二選擇。然而中醫藥治療本病的效果雖然顯著，但機制難尋，本研究正是基于以上認識，通過觀察益腎別濁湯對糖尿病腎病大鼠SOD及iNOS的影響，試圖從氧化應激方面闡述益腎別濁湯防治糖尿病腎病的可能機制，為中醫藥的現代化提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1實驗動物選取清潔級雄性SD大鼠共90只(由山東中醫藥大學動物實驗室提供，許可證號：2016-0023)，體質量在(230±10)g之間，溫度控制在(20±2)℃，濕度控制在(65±3)%，敏感周期為12 h，高脂喂養。

1.2藥物制備益腎別濁湯：黨參、黃芪、車前子各10 g，茯苓、山藥、枸杞子、石韋各15 g，五味子、芡實各5 g，由本院中藥炮制中心制成藥量1 kg/L的藥物濃縮液。

1.3主要試劑超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、誘導型一氧化氮合酶(iNOS)試劑盒由北京大康生物有限公司提供，血糖試紙由雅培公司提供，腎功能試劑盒由南京建成生物有限公司提供，采用日立8000全自動生化儀進行檢測。

1.4糖尿病腎病模型大鼠的制備所有大鼠適應性喂養1周后，隨機分為健康對照組(30只)和模型對照組(60只)，模型對照組禁食8 h后，按照30 mg/kg進行而靜脈注射STZ，高脂喂養1周后，尾靜脈測空腹血糖，若血糖水平大于11.1 mmol/L則視為造模成功。60只大鼠共成功造模42只(造模成功率為70%)，將模型組大鼠隨機分為模型對照組(21只)和治療組(21只)，治療組給予益腎別濁湯生藥5 g/kg·d，健康對照組和模型對照組給予等量的生理鹽水灌胃。

1.5標本取材所有大鼠喂養8周后，采用心臟取血的方法抽取3 ml血液，分別進行血糖、血肌酐、尿素氮、SOD以及iNOS的測定，取雙側腎臟稱重以計算腎系數。腎系數=雙側腎臟重量(g)/體質量(kg)×100%。

2 結果

2.1大鼠一般情況及腎系數的比較模型組大鼠自造模第3日起，出現多飲多食等糖尿病等癥狀，隨著時間的延長逐漸出現體質量下降，精神不振，毛發枯萎等腎病癥狀。模型對照組及治療組大鼠體質量較健康對照組明顯下降(P<0.05)，而腎系數則明顯升高(P<0.05)；治療組腎系數明顯低于模型對照組(P<0.05)，但體質量無明顯差異(P>0.05)。結果詳見表1。

表1 各組大鼠體質量及腎系數比較 (只，

注：與對照組比較，1)P<0.01；與模型對照組比較，2)P<0.05

2.2大鼠血糖及腎功能的比較經統計學分析發現，模型組大鼠血清葡萄糖、尿素氮及肌酐水平顯著高于健康對照組，提示造模成功。進一步分析發現治療組的血糖水平及腎功能顯著低于模型對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。結果詳見表2。

表2 各組大鼠血糖及腎功能比較 (只，

注：與對照組比較,1)P<0.01;與模型對照組比較,2)P<0.05;與模型對照組比較,3)P<0.01

2.3大鼠SOD及iNOS的變化經統計學分析發現，模型對照組、治療組大鼠SOD水平較健康對照組明顯下降，其中模型對照組下降最為明顯，各組間均有統計學意義(P<0.05)；模型對照組、治療組大鼠iNOS水平較健康對照組明顯升高，其中模型對照組升高最為明顯，各組間均有統計學意義(P<0.05)；結果詳見表3。

表3 各組大鼠SOD及iNOS水平比較 (只，

注：與對照組比較,1)P<0.01;與模型對照組比較,2)P<0.05;與模型對照組比較,3)P<0.01

3 討論

目前中醫尚無“糖尿病腎病”的病名，不過早在《素問病機氣宜保命集》中就有此病的描述“腎消者，病在下焦，初發為膏淋，下如膏油之狀，至成而面色黧黑，形瘦而耳焦， 小便濁而有脂”，此文獻詳細的描述了本病由早期的蛋白尿期至終末期腎病的臨床表現，并首次提出了“腎消”的概念。《圣濟總錄》中有“消渴病久腎氣受傷，腎主水，腎氣虛衰，小便至甜，有膏”，此文也明確了本病病位在腎，腎氣虛弱為主要病機，因此益腎氣、別清濁是治療本病的主要治療原則。益腎別濁湯以益腎氣為大法，同時佐以健脾養腎，別清濁的方藥進行辨證論治，方中黨參、黃芪補氣，山藥、枸杞子滋補肝腎共為君藥，茯苓健脾，芡實、五味子收斂固精，佐以車前子、石韋以利尿滲濕，別清泌濁，全方組方嚴謹，君臣搭配共奏益腎別濁之功。在本研究中，治療組大鼠的體質量、腎系數以及腎功能水平明顯優于模型對照組，提示益腎別濁湯確實具有保護模型大鼠腎臟的作用。

現代醫學認為，糖尿病患者體內不僅僅存在糖脂代謝紊亂，同時也存在大量的炎癥因子、細胞生長因子以及氧化應激反應等[2，4]，在這些因素的共同作用下，腎臟血流動力學發生了改變，從而導致尿蛋白和腎功能的變化，其中氧化應激反應逐漸受到重視，多數學者認為其在本病的發生中扮演了重要角色[5]。近年來許多研究發現[6，7]，高血糖不但可以升高腎臟組織內的抗氧化酶的表達，也可以升高大鼠腎臟組織中的氧化應激水平，在糖尿病腎病的發生中可能起到重要作用。SOD是體內的一種抗氧化酶，它可以通過清除體內過多的超氧陰離子自由基，并以此來減少脂質過氧化反應，使機體免受損傷[8]。NOS在機體內主要以機構型(cNOS)和誘導型(iNOS)兩種形式存在，其中后者主要分布在腎臟、心臟以及血管內皮中，具有合成NO的作用，是一種重要的促炎性酶，在正常情況下呈低表達或者不表達狀態，但受到內毒素、促炎癥因子以及其它蛋白酶的刺激時，可以被迅速激活，導致炎癥反應的發生[9，10]。本研究發現，模型對照組、治療組大鼠SOD水平較健康對照組明顯下降，但治療組SOD下降幅度明顯低于模型對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)；模型對照組、治療組大鼠iNOS水平較健康對照組明顯升高，但治療組iNOS水平升高幅度明顯低于模型對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)。上述結果提示益腎別濁湯具有顯著的抗氧化應激的作用，這可能與升高SOD，降低iNOS水平有關。

綜上所述，益腎別濁湯具有顯著的腎臟保護作用，其中的機制可能是通過升高SOD，降低iNOS水平的表達有關，但限于經費原因，本研究并沒有明確闡述其中的具體分子機制，這將是我們下一步的研究重點所在。