側溝爬巖鰍人工繁殖和胚胎發育初步研究

譚剛 吳毅 何興恒 安義民 陳凡剛

摘要：2017年6月至2018年4月，在大渡河黑馬魚類增殖站進行了側溝爬巖鰍（Beaufortia liui）的人工繁殖和胚胎發育初步研究。結果表明，側溝爬巖鰍為底棲、雜食性魚類，晝伏夜出。其繁殖季節為2—4月，成熟卵呈卵圓形，卵徑約0.8 mm，淡黃色，微黏性。受精后約15 min卵膜吸水膨脹至最大，卵徑約1.2 mm。在水溫（17±0.5） ℃下歷時60 h 55 min，積溫974.56 ℃·h，經過7個階段完成胚胎發育。仔魚出膜6 d開口，出膜45 d，仔魚的胸鰭和腹鰭完全特化，其體型與成魚基本相同。

關鍵詞：側溝爬巖鰍（Beaufortia liui）;人工繁殖;胚胎發育;大渡河

中圖分類號：S966.4 ? ? ? ? 文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2019）24-0150-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.22.036 ? ? ? ? ? 開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Preliminary study on artificial reproduction and embryo development of Beaufortia liui

TAN Gang1，WU Yi1，HE Xing-heng1，AN Yi-min2，CHEN Fan-gang1

（1.Sichuan Aquabase Biotechnology Co.，Ltd.，Chengdu 610000，China;

2.Guodiandaduhezhentouba Hydropower Construction Co.，Ltd.，Leshan 614700，Sichuan，China）

Abstract： From June 2017 to April 2018， Experiment of artificial reproduction embryo development of Beaufortia liui in the Dadu river black horse fish breeding station. The results showed that it was omnivorous fish and benthic like nocturnal. The breeding season was from February to April， the mature eggs were oval， the egg diameter was about 0.8 mm， and the yellowish， slightly sticky. About 8 minutes after fertilization， the egg membrane swelled to the maximum， and the egg diameter was about 1.2 mm. At a water temperature of （17±0.5） ℃ for 60 h 55 min， the accumulated temperature of 974.56 ℃·h. Embryo development was completed in seven stages. After 6 days， the seedlings began to eat. The pectoral and ventral fins of the larvae were completely specialized after 45 d of film emergence， and their body shape was basically the same as that of adult fish.

Key words： Beaufortia liui; artificial reproduction; embryonic development; Dadu river

側溝爬巖鰍（Beaufortia liui）屬于鯉形目（Cypriniformes）爬鰍科（Balitoridae）爬巖鰍屬（Beaufortia），主要分布于岷江、大渡河及金沙江流域[1]。隨著人類活動的增加、水利工程的修建、生態環境的破壞等因素，致使側溝爬巖鰍的生境分布區域和野外生物量逐年減小。目前，有關側溝爬巖鰍的研究僅有其形態分類的文獻記載[1，2]。本研究于2017年6月至2018年4月，對側溝爬巖鰍的人工繁殖和胚胎發育進行了初步研究，旨在探索側溝爬巖鰍的人工繁殖和胚胎發育規律，為小型爬鰍科魚類的研究提供基礎資料。

1 ?材料與方法

1.1 ?親魚的馴養與培育

本研究所用的側溝爬巖鰍親魚采集于大渡河和金沙江流域，共采集到680尾野生親魚。野生親魚在室內的仿生馴養池進行馴養，馴養分為三個階段進行：第一階段，主要進行野生親魚投喂開口餌料的馴養;第二階段，主要進行飼喂人工合成餌料的馴養;第三階段，主要進行人工環境適應性的馴養。

通過3～4個月的人工馴養，側溝爬巖鰍可在室外進行親魚強化培育。選擇體表無傷、體重1.2 g以上雄魚和2.0 g以上的雌魚作為后備親魚進行培育。將后備親魚投放到室外水泥池中進行培育，池底鋪一層鵝卵石，用流水養殖，養殖密度為10尾/m2。每天定時觀察其生活習性和生長狀況，做好殘余餌料和排泄物的處理，并及時進行病害預防。日常馴養培育時，控制魚池的進水量為0.3 m/s，pH為6.7～7.8、溶解氧為10.5～12.0 mg/L、水溫為15～20 ℃。

1.2 ?人工繁殖

依據側溝爬巖鰍的繁殖生物學測定數據，每尾雌魚平均重量為3.5 g。用3.5%的生理鹽水配制催產劑，催產劑量為HCG 100～300 IU+LHRH-A2 6～10 μg/kg。采用一針注射法，從胸鰭基部靠近腹腔處以45°注射催產藥物，進針深度約為0.10 cm;雌魚注射10 h 后，給雄魚注射催產藥物，催產劑量減半。注射完后，將親魚放回暫養池內，保持水溫（17.0±0.5） ℃，控制水流速度0.3 m/s。

雌魚注射藥物10 h后，定時檢查，當輕輕擠壓雌魚腹部有卵從泄殖孔中順利流出即可擠卵;以紙巾擦拭尾部表面多余的水分，將成熟的卵擠入干燥的培養皿中。輕輕擠壓雄魚腹部從泄殖孔有乳白色精液流出，用生理鹽水將其沖洗到盛有卵子的培養皿中，并輕輕用手晃動培養皿10～15 s后靜置30 s，獲得受精卵。將受精卵平鋪在燒杯中，再將燒杯放置在玻璃魚缸中進行孵化，控制水溫在（17±0.5） ℃，保持微流水。

1.3 ?胚胎和仔魚發育觀察

用XTZ-EAS體視解剖鏡對側溝爬巖鰍胚胎發育進行觀察。用華谷動力相機Demo Cam軟件收集胚胎發育各個時期的照片及錄像。仔魚發育采用尼康單反相機（D7100）和微距鏡頭（Tamron SP AF 90 mm F/2.8）進行定時觀察拍攝記錄。胚胎發育和仔魚發育水溫為16～18 ℃。

胚胎發育的積溫（℃·h）=胚胎發育時間（h）×發育時水溫（℃）[3]。

2 ?結果與分析

2.1 ?生活習性與繁殖特性

側溝爬巖鰍為底棲、雜食性魚類，晝伏夜出，應急反應敏捷。白天多隱藏在鵝卵石下或陰暗處的水泥池壁上，借助其特化的胸鰭和腹鰭吸附在卵石和魚池壁的表面。20：00左右開始出來活動覓食，此時側溝爬巖鰍能夠快速敏捷在水體中游動。覓食時依靠胸鰭匍匐前進，利用其角質化的下頜刮食固著的藻類和捕捉水體底層及水草周圍的無脊椎動物，如搖蚊幼蟲和水蚯蚓等。在動物性食物充足時偏食無脊椎動物，僅采食少量藻類;當動物性食物匱乏時，就采食藻類植物。

根據野外調查和人工馴養的觀察，側溝爬巖鰍的繁殖季節為2—4月，且不同流域其繁殖時間略有不同。金沙江流域，其繁殖時間為2—3月;大渡河流域，其繁殖時間在3—4月。側溝爬巖鰍的成熟卵呈卵圓形，卵徑約0.8 mm，淡黃色。受精卵具微黏性，其黏性隨時間逐漸消失;受精卵遇水后卵膜徑約1.2 mm，卵粒中不含油粒，在靜水或微流水環境中多數會沉入水底，少部分吸附在容器壁上，并且卵粒之間不相互黏連，當有稍強流水沖擊的情況下會隨著水流而動，使卵表面容易黏附雜質和小氣泡。

2.2 ?胚胎發育

側溝爬巖鰍胚胎發育在（16～18） ℃下歷時60 h 55 min，積溫974.56 ℃·h。側溝爬巖鰍胚胎發育過程與其他鯉科魚類相同，經過7個階段，胚胎發育時序見表1、圖1。

2.2.1 ?胚盤隆起期 ?受精后10 min，受精卵逐漸吸水膨脹;受精后23 min，卵膜徑達到最大;35 min后，受精卵原生質逐漸向著動物極移動，卵黃向著植物極移動，胚盤形成;1 h 14 min后胚盤達到最大，高度約占卵黃的1/5～1/4。

2.2.2 ?卵裂期 ?1 h 52 min后，受精卵胚盤開始進行第一次分裂，從細胞中間開始徑向分裂，并形成兩個細胞，進入2細胞期;2 h 36 min后，胚盤開始進行第二次分裂，與第一次分裂方向垂直，分裂4個細胞，進入4細胞期;3 h 05 min后，胚盤開始發生第三次分裂，分裂方向與第一次分裂平行，分裂成2排，每排4個細胞，下邊4個細胞略大于上邊4個，進入8細胞期;5 h 48 min后，胚盤開始發生第四次分裂，分裂方向與第二次分裂平行，分裂成排成4排，每排4個細胞，中間4個細胞略微大于周圍的細胞，并進入16細胞期;6 h 40 min后，胚盤發生第五次分裂，分裂方向與第一次分裂平行，分裂成4排，每排8個大小相似的細胞，進入32細胞期;隨著細胞分裂的不同步，細胞層數開始堆疊，數目逐漸增多、大小逐漸減小，8 h 12 min后，進入桑葚胚期，胚盤的一端開始逐漸形成隆起的多細胞胚體，如同桑葚，故稱為桑葚胚期。

2.2.3 ?囊胚期 ?10 h 10 min后，胚體細胞逐漸分裂使細胞層在卵黃上部明顯隆起，囊胚高度約占卵黃的1/2，受精卵進入囊胚早期;11 h 30 min后，胚層高度降低、開始向卵黃周圍進行移動，開始形成囊胚腔，受精卵進入囊胚中期;13 h 12 min后，胚層開始下包、高度逐漸降低，細胞層在卵黃上的隆起變得不再明顯，受精卵進入囊胚晚期。

2.2.4 ?原腸胚期 ?15 h 05 min后，開始出現胚環，胚層開始下包約1/3，側面可見胚層細胞背唇呈新月狀，胚盤邊緣伴隨著胚層細胞內卷形成胚環，受精卵進入原腸早期;受精后17 h 35 min，胚層向下包裹至卵黃的1/2，此時在胚環的一定部位內卷形成三角形隆起，受精卵進入原腸中期。受精后19 h 15 min，胚層細胞向下包裹至卵黃的2/3，背唇逐漸明顯，開始形成胚體，此時受精卵進入原腸晚期。

2.2.5 ?神經胚期 ?21 h 20 min后，胚層細胞繼續向下包裹至卵黃的3/4至5/6以上，進入神經胚期;隨著胚層細胞繼續向下包裹;23 h 35 min后，胚孔徹底閉合，胚胎背面開始形成神經版，受精卵進入胚孔封閉期;26 h 18 min后，開始出現柱狀的脊索，并逐漸形成胚體。

2.2.6 ?器官形成期 ?30 h 30 min后，胚體頭部明顯凸起，形成腦泡，腦泡的兩側出現一對橢圓隆起，為眼的原基，受精卵進入眼基出現期。

2.2.7 ?出膜前期 ?60 h 55 min后，受精卵進入出膜期，出膜時胚體尾部先破膜而出，頭部還留在卵膜內，隨后卵膜逐漸塌陷，幼苗開始脫落，在容器底部擺動，具有較大的卵黃囊。68 h 15 min后，所有受精卵完成脫膜。

2.3 ?仔魚發育

剛出膜仔魚通體透明無色素積累，卵黃囊前段膨大呈圓球狀，后段呈長細棒狀緊貼魚體腹部，卵黃囊全長約占仔魚全長的3/4;初孵仔魚，大部分在容器底部平躺，時而依靠尾部擺動。

仔魚出膜后3 d，開始出現胸鰭，細長緊貼在魚體兩側，心臟跳動明顯，血液透明且涌動明顯。

仔魚出膜后6 d，仔魚的卵黃囊基本吸收完畢。仔魚頭部和背部出現大量的黑色素，心臟和血管隱約可見，開始靠尾部擺動在容器底部游動但范圍較小，胸鰭發育快速呈扇葉狀，開始取食煮熟的雞蛋黃粒。

仔魚出膜后8 d，仔魚胸鰭發育成長條形，背鰭、腹鰭開始發育，仔魚身體黑色素明顯。當有外界刺激時，依靠胸鰭和尾鰭在容器底部游動，游動范圍小且主要在水體底部游動，開始主動取食幼體輪蟲和幼體枝角類。

仔魚出膜后15 d，仔魚的胸鰭和腹鰭還未特化。仔魚呈現頭部大，身體細長，當有外界刺激時主要沿著容器壁游動，開始取食稍大的枝角類和藻類。

仔魚出膜后25 d，仔魚的胸鰭和腹鰭還未完全特化。仔魚體色呈現淡黃色或青色，頭后身體逐漸變寬，呈梭形，并開始匍匐于卵石和容器壁上。

仔魚出膜后45 d，仔魚的胸鰭和腹鰭完全特化，身體上的斑紋明顯，體型與成魚基本相同。側溝爬巖鰍仔魚發育過程見圖2。

3 ?討論

與已報道的其他爬鰍科魚類相同，側溝爬巖鰍的受精卵屬于漂流性卵[4]。但側溝爬巖鰍的卵徑（1.2 mm）要小于犁頭鰍（5.34 mm）[5]和四川華吸鰍（1.85 mm）[6]，并且黏性也比犁頭鰍和四川華吸鰍弱。

影響側溝爬巖鰍胚胎發育的主要因素是水溫。整個發育過程中需要保持水溫在16～18 ℃，受精卵經過60 h 55 min胚胎發育，開始出膜。在水溫16～18 ℃范圍內側溝爬巖鰍的受精卵出膜率達到最高，畸形率最低，幼苗出膜后，存活率較高;當水溫在19～22 ℃時，胚胎發育到囊胚期用時較短，但開始出現大量死亡，出膜率較低并且畸形苗出現較高;當水溫小于16 ℃時，胚胎進入原腸胚期時就開始出現大量死亡，出膜率最低。本研究表明側溝爬巖鰍在水溫16～18 ℃時，較為適合其正常的胚胎發育。吳金明等[6]對赤水河四川華吸鰍的胚胎發育進行了研究，表明其在水溫26.3～27.8 ℃下，受精卵經過22 h 34 min的胚胎發育，開始出膜，仔魚經過65 d發育成成魚體型;熊玉宇等[5]對犁頭鰍的胚胎發育進行了研究，表明其在水溫26.3～27.8 ℃下，受精卵經過34 h的胚胎發育，開始出膜，仔魚經過56 d發育成成魚體型。李恒德[7]對金沙江犁頭鰍的胚胎發育研究表明，其在水溫17.5～21.0 ℃下，受精卵經過57 h 48 min的胚胎發育，開始出膜。大渡河側溝爬巖鰍的胚胎發育時間與金沙江犁頭鰍較為接近，胚胎發育溫度范圍卻比其要窄，并且側溝爬巖鰍仔魚發育的速度要快于四川華吸鰍和犁頭鰍，這可能與側溝爬巖鰍生存環境、水流、溶解氧以及卵黃的大小等因素有關。

參考文獻：

[1] 丁瑞華.四川魚類志[M].成都：四川科學技術出版社，1994.

[2] 陳宜瑜.中國平鰭鰍科魚類系統分類的研究I.平鰭鰍亞科魚類的分類[J].水生生物學集刊，1978（3）：331-348.

[3] 薛凌展.大刺鰍胚胎發育觀察[J].淡水漁業，2014，44（2）：101-104，108.

[4] 唐文喬，陳宜瑜.平鰭鰍科魚類的分類學研究[J].上海水產大學學報，2000（1）：1-10.

[5] 熊玉宇，喬 ?曄，劉煥章，等.犁頭鰍早期發育[J].水生生物學報，2008（3）：424-433.

[6] 吳金明，王芊芊，劉 ?飛，等.赤水河四川華吸鰍的早期發育[J].四川動物，2011，30（4）：527-529，536，670.

[7] 李恒德.金沙江貢氏犁頭鰍的繁殖和胚后發育的觀察[J].動物學雜志，1965（2）：79-83.