辛通暢絡法對系膜增生性腎炎大鼠血清和腎組織IL-1、IL-6的影響*

高紅旗 支 勇 曹式麗

天津中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院 天津 300193

系膜增生性腎小球腎炎（MsPGN）是臨床常見的腎小球疾病的病理類型，在我國原發(fā)性腎病綜合征中MsPGN高達30%，是導致腎小球硬化，發(fā)展為終末期腎臟病的主要疾病。MsPGN的病理學特征為腎小球系膜細胞的異常增生和系膜基質(zhì)的病理性積聚。在MsPGN的病變過程中，IL-1、IL-6等細胞因子起到重要作用。本研究采用抗大鼠胸腺細胞抗體（Anti-Thy-1）誘發(fā)MsPGN大鼠模型，觀察以辛通暢絡立法的中藥復方腎絡寧對血清、腎組織IL-1和IL-6表達的調(diào)節(jié)作用，以及對腎小球細胞外基質(zhì)的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物：健康雄性日本大耳白兔4只，體重1250±250g，普通級；遠交系健康雄性SD大鼠40只（10周齡/體重150±10g），幼齡SD大鼠10只（4周齡），SPF/VAF級。以上實驗動物均由中國醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所動物中心提供(合格證號：SCXK津2005-0001)。

1.2 實驗試劑：完全福氏佐劑與不完全福氏佐劑（Sigma公司）；IL-1、IL-6試劑盒（尚柏生物醫(yī)學技術(shù)北京公司）。

1.3 實驗藥物：腎絡寧：由柴胡12g，生黃芪30g，黃芩、當歸、水蛭各10g，女貞子、澤蘭各15g，細辛3g等組成，煎煮濃縮(含0.85g生藥/ml)，裝瓶密封，置4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｋ幬镔徸蕴旖蛑嗅t(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院中藥房，加工由天津中醫(yī)藥大學藥廠協(xié)助完成。貝那普利：瑞士諾華制藥有限公司產(chǎn)品，規(guī)格：10㎎/片，批號：06031404。

2 實驗方法

2.1 動物分組：40只大鼠適應性飼養(yǎng)1周后，按體重分層隨機分為正常組、模型組、西藥組和中藥組，每組各10只。實驗全程給予普通飼料喂養(yǎng)，自由進水。

2.2 模型復制：參考有關(guān)文獻復制抗Thy-1系膜增生性腎炎模型大鼠模型[1-2]。大鼠30只，經(jīng)尾靜脈注射兔抗鼠胸腺細胞抗體血清（ATS），每周1次，連續(xù)3周，初次注 射 ATS（1:32）1.0ml/只 ，加 強 注 射 ATS（1:16）1.0ml/只。

2.3 給藥方法：自MsPGN模型制備第1天起，中藥組每日1次以3.5g/100g體重灌服腎絡寧，西藥組每日1次以0.33mg/100g體重灌服貝那普利混懸液，對照組與模型組每日1次灌服等量生理鹽水，共進行6周。實驗全程各組均給予普通飼料喂養(yǎng)，自由進水。實驗過程中因灌胃誤入氣管，中藥組于治療第4周初死亡1只，其他各組實驗過程中無動物死亡。

2.4 標本采集：于給藥后第6周末殺檢全部大鼠，打開腹腔，摘取腎臟，迅速剪取部分腎組織放入凍存管并置于液氮中凍存，用于腎組織IL-1、IL-6檢測；另再取部分腎臟組織置于10%福爾馬林中固定，用于腎小球細胞外基質(zhì)的檢測。

2.5 觀測指標：血清和腎組織IL-1、IL-6檢測：采用雙抗體夾心ELISA法；腎小球細胞外基質(zhì)檢測：采用免疫組化ABC法。

2.6 病理圖像分析：采用HMIAS-2000高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)，于400倍高倍鏡下，每個標本隨機選取10個視域，測量細胞外基質(zhì)表達的陽性反應物信號的總面積和陽性信號物質(zhì)占腎小球體的面積百分比，評價各組腎小球ECM增殖程度。

2.7 統(tǒng)計學方法：實驗數(shù)據(jù)應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，各組實驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差（xˉ±s）表示，對實驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，檢驗結(jié)果以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

3 實驗結(jié)果

3.1 各組血清、腎組織IL-1、IL-6的表達比較：見表1。

表1 各組血清、腎組織IL-1、IL-6的表達比較（xˉ± s，pg/ml）

3.2 腎組織細胞外基質(zhì)分析結(jié)果：見表2。

表2 腎組織細胞外基質(zhì)增殖程度（xˉ±s，%）

4 討論

IL-1、IL-6是MsPGN中參與免疫調(diào)節(jié)和介導炎癥反應的細胞因子，也是重要的系膜細胞增殖促進因子，是導致ECM積聚發(fā)展成腎小球硬化的重要原因。IL-1和IL-6是促進系膜細胞增殖的重要細胞因子，而且系膜細胞通過自分泌方式產(chǎn)生具有生物活性的IL-1并表達其受體，如在免疫復合物性腎炎大鼠腎小球系膜細胞的IL-1 mRNA表達量比正常大鼠增加2～3倍，提示系膜細胞能夠持續(xù)分泌大量的IL-1，刺激系膜細胞增殖及增加ECM合成[3]。IL-6也是系膜細胞自分泌調(diào)節(jié)因子，通過參與和維持系膜細胞高活性狀態(tài)的自分泌途徑，促進系膜細胞和ECM增生，IL-6在腎臟中的高表達與腎小球系膜基質(zhì)增生呈正相關(guān)[4]。因此，通過調(diào)控IL-1、IL-6的表達，抑制系膜細胞增殖，對防治MsPGN具有重要意義。

中醫(yī)學認為，絡脈是氣血運行通道，亦是病邪傳變途徑，具有邪易滯易瘀、邪易入難出、邪易積成形的病理特點[5]，腎絡郁滯是MsPGN等多種慢性腎臟病的共同病理基礎(chǔ)，腎絡寧是以“辛通腎絡，標本兼治”為治法的中藥復方制劑。方中柴胡、黃芩疏利少陽，樞轉(zhuǎn)氣機；黃芪、當歸、女貞子補益脾腎，扶正理虛；澤蘭、細辛、水蛭辛通暢絡，化瘀消滯。諸藥協(xié)同，疏導調(diào)節(jié)，養(yǎng)臟和絡，促進腎絡氣血調(diào)暢。本課題前期研究提示，以辛通暢絡立法的中藥復方腎絡寧，具有減輕腎小球FN、LN、ColIV等ECM成分的表達量，改善系膜基質(zhì)增生的作用[6-7]。本研究結(jié)果顯示,腎絡寧能夠顯著降低MsPGN大鼠血清和腎組織IL-1、IL-6的表達量，減輕腎組織細胞外基質(zhì)的增殖程度，提示抑制MsPGN大鼠IL-1、IL-6的表達，減輕其對系膜細胞增殖的病理性作用，阻抑腎小球系膜基質(zhì)增生，是腎絡寧防治MsPGN的重要機制。

5 參考文獻

[1]Nomura K,Liu N,Nagai K,et al.Roles of coagulation pathway and factor Xa in rat mesangioproliferative glomerulonephritis[J].Lab Invest，2007,87(2)：150-160.

[2]Shinosaki T,Notoya M,Nomura Y,et al.Glomerular epithelial cell injury accelerates the progression of antibody-induced mesangial proliferative nephritis[J].Exp Nephrol，2002,10(4)：245-258.

[3]Werber HI,Emancipator SN,Tykocinski ML,et al.The interleukin 1 gene is expressed by rat glomerular mesangial cells and is augmented in immune complex glomerulonephritis[J].J Immunol,1987，138(10)：3207-12.

[4]Ng DP，Nurbaya S，Ye SH，et al．An IL-6 haplotype on human chromosome 7p21 confers risk for impaired renal function in type 2 diabetic patients[J].Kidney Int，2008，74(4)：521-527.

[5]王少墨,王慶其.絡脈理論與腫瘤臨床運用芻議[J].浙江中醫(yī)雜志,2012,47(3)：157-159.

[6]竇一田，支勇，曹式麗.辛通暢絡法干預系膜增生性腎炎大鼠腎小球細胞外基質(zhì)積聚的實驗研究[J].江蘇中醫(yī)藥，2011，43（3）：87-89.

[7]竇一田，高先樓，曹式麗．腎蘇Ⅱ?qū)ο的ぴ錾阅I炎模型大鼠腎病變及白細胞介素-6的影響[J].中醫(yī)雜志，2011，52(13)：1131-1134.